程　正，尤昱州，邢建輝，劉　虎

(1 安徽省銅陵市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽　銅陵　244000；2 安徽中醫(yī)藥大學(xué)，

安徽　合肥　230038；3 安徽安科恒益藥業(yè)有限公司，安徽　銅陵　244000)

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HPLC法測(cè)定貝諾酯分散片的含量

程正1,2，尤昱州1，邢建輝1，劉虎3

(1 安徽省銅陵市食品藥品檢驗(yàn)中心，安徽銅陵244000；2 安徽中醫(yī)藥大學(xué)，

安徽合肥230038；3 安徽安科恒益藥業(yè)有限公司，安徽銅陵244000)

建立了HPLC法測(cè)定貝諾酯分散片的含量。采用Ultimate XB-C18(250 mm×4.6 mm×5 μm)色譜柱，甲醇:水(60:40)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為240 nm，柱溫為30 ℃，流速為1.0 mL/min。結(jié)果顯示，貝諾酯在4.96～118.92 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.99989，平均回收率為99.47%，RSD為0.21%(n=6)。該方法具有操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，可用于貝諾酯分散片的質(zhì)量控制。

HPLC法；貝諾酯分散片；含量測(cè)定

貝諾酯為對(duì)乙酰氨基酚和阿司匹林的酯化產(chǎn)物，是新型抗炎、解熱鎮(zhèn)痛藥。主要用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕痛、感冒發(fā)燒、頭痛、神經(jīng)痛及術(shù)后疼痛等[1]。由于貝諾酯在水中的溶解性差，其普通口服制劑起效慢，生物利用度低。分散片吸收快，生物利用度高，服用方便，尤其適合老、幼和吞服固體困難的患者[2]?，F(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[3]中含量測(cè)定為紫外-可見(jiàn)分光光度法。為了進(jìn)一步提高完善該品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，本文成功建立了用HPLC法測(cè)定貝諾酯分散片的含量。該方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確，可以作為貝諾酯分散片的鑒別和含量測(cè)定用。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試藥

1.1.1儀器

UltiMate3000高效液相色譜儀，Thermo scientific；DAD檢測(cè)器；Chromeleon 7工作站；TU-1901紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)，北京普析通用；XS105DU電子天平，梅特勒托利多。

1.1.2試藥

貝諾酯分散片(0.2 g)，安徽某廠(批號(hào)：131201、140201、140202)；貝諾酯對(duì)照品,中國(guó)食品藥品檢定研究院(批號(hào)：100225-201303)；甲醇(色譜純)；水為重蒸水。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Ultimate XB-C18(250 mm×4.6 mm×5 μm)，流動(dòng)相：甲醇-水(60:40)，檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm，柱溫：30 ℃，流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量10 μL；理論板數(shù)按貝諾酯對(duì)照品峰計(jì)算不低于3000[4-6]。

1.2.2對(duì)照品溶液

分別精密稱取105 ℃干燥2 h的貝諾酯對(duì)照品，用甲醇溶解，制成每1 mL中含495.5 μg/mL的溶液，作為對(duì)照品貯備液。精密量取貯備液5 mL，置50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

1.2.3供試品溶液

取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于貝諾酯0.1 g)，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取5 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得。

1.2.4陰性對(duì)照溶液的制備

按處方組成比例及工藝要求，取其他成分制成陰性對(duì)照供試品，再按供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。

2　結(jié)果與討論

2.1峰純度檢查和檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液，注入液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下條件測(cè)定，以DAD檢測(cè)器在200～400 nm波長(zhǎng)處記錄紫外吸收?qǐng)D，圖示貝諾酯在240 nm的波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇240 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。經(jīng)峰純度檢查，色譜圖中貝諾酯主峰為一純物質(zhì)峰。如圖1和圖2。

圖1　紫外光譜圖

圖2　HPLC色譜圖

2.2線性關(guān)系

精密吸取對(duì)照品貯備液0.5、1、3、5、7、9、12 mL，分別置50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，照上述色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖，以主成份峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度C(mg/mL)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示貝諾酯在所選濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　線性關(guān)系試驗(yàn)

2.3精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量10 μL，分別測(cè)定貝諾酯的峰面積，RSD為0.09%，表明精密度良好。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　精密度試驗(yàn)

2.4重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)(140202)供試品6份，按供試品溶液制備方法處理，在上述色譜條件下測(cè)定，平均含量為100.29%，RSD為0.81%，表明本法重復(fù)性良好，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3　重復(fù)性試驗(yàn)

注：平均片重=0.4127 g。

2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)

取制備好的供試品溶液(140202)，在上述色譜條件下測(cè)定，每間隔4 h測(cè)定色譜峰面積，RSD為0.45%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4　穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.6回收率試驗(yàn)

取已知含量的供試品(140202)，共6份，精密稱定，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加對(duì)照品貯備液2 mL，加甲醇稀釋至刻度，在上述色譜條件下測(cè)定，平均回收率為99.47%，RSD為0.21%。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5　回收試驗(yàn)結(jié)果

2.7供試品含量測(cè)定

分別取上述3批貝諾酯分散片供試品，按上述方法及條件測(cè)定。按外標(biāo)法計(jì)算貝諾酯的標(biāo)示量的百分含量，同時(shí)用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定上述供試品，兩法測(cè)得結(jié)果比較，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6　供試品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

2.8討論

已有文獻(xiàn)對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行了試驗(yàn)，當(dāng)甲醇-水系統(tǒng)pH值在4.5以下和4.5以上時(shí)，主峰峰形差別不大，滿足分析要求，且甲醇-水系統(tǒng)即能滿足實(shí)驗(yàn)要求，無(wú)需使用緩沖鹽或離子對(duì)試劑[7-8]。

原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用的是紫外分光光度吸收系數(shù)測(cè)定法測(cè)定組分含量，專屬性不強(qiáng)，誤差也較大；且筆者在日常實(shí)驗(yàn)中曾發(fā)現(xiàn)不同廠牌的乙醇溶劑檢查結(jié)果不同。因原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)有使用對(duì)照品法進(jìn)行校正，所以若溶劑紫外吸收過(guò)大，則對(duì)本品含量測(cè)定結(jié)果有一定的影響。

3　結(jié)　論

本文采用HPLC法測(cè)定貝諾酯分散片的含量，取得了較為滿意的結(jié)果，同時(shí)還可提高鑒別的專屬性，方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，可為貝諾酯分散片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高提供參考。

[1]鄭虎.藥物化學(xué).4版[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:470.

[2]張華,許玉華,王曉娜,等.貝諾酯分散片的制備及質(zhì)量控制[J].中國(guó)藥業(yè),2011,20(18):38-40.

[3] WS1-(X-043)-2006Z 國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn):第70冊(cè)[S].

[4]陳慶先,朱晶,劉鵬飛,等.HPLC法測(cè)定小兒貝諾酯散中貝諾酯的含量[J].中國(guó)醫(yī)藥指南,2011, 29(09):236-237.

[5]張濤.高效液相色譜法測(cè)定貝諾酯顆粒的含量[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2009, 26(6):44-45.

[6]中國(guó)藥典:二部[S].2015:76.

[7]晁若冰,陳濤.RP-HPLC法測(cè)定貝諾酯及其有關(guān)物質(zhì)[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),1999,34(10):782-785.

[8]陳秀琳,林梅玉.HPLC法測(cè)定小兒復(fù)方貝諾酯片中貝諾酯的含量[J].海峽藥學(xué),2002,14(3):27-29.

Determination of Benorilate Dispersible Tablets by HPLC

CHENGZheng1,2,YOUYu-zhou1,XINGJian-hui1,LIUHu3

(1 Tongling Institute for Food and Drug Control,Anhui Tongling 244000;2 Anhui University of Chinese Medicine,Anhui Hefei 230038;3 Anhui Ankehengyi Pharmaceutical Co.,Ltd., Anhui Tongling 244000, China)

A method for determination of Benorilate Dispersible Tablets by HPLC was established. Ultimate XB-C18column(250 mm×4.6 mm×5 μm)was used, the mobile phases consisted of methanol and water(60:40),the detection wavelength was at 240 nm,the column temperature was 30 ℃,the flow rate was 1 mL/min. Results showed that the linear range of benorilate was at 4.96～118.92 mg/mL, r=0.99989.The average recovery was 99.47%. RSD=0.21%(n=6). The method was accurate.It could be used for determination of Benorilate Dispersible Tablets.

HPLC; Benorilate Dispersible Tablets;content determination

程正(1982-)，男，主管藥師，主要從事食品藥品檢驗(yàn)研究。

R927.2

A

1001-9677(2016)03-0115-03