黃衛(wèi)國(guó)

(陽(yáng)江市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)所，廣東　陽(yáng)江　529500)

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淺談食品中三聚氰胺的檢測(cè)方法

黃衛(wèi)國(guó)

(陽(yáng)江市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)所，廣東陽(yáng)江529500)

三聚氰胺是一種重要的化工原料，三聚氰胺既非食品原料也不是食品添加劑。本文探討幾種常用的食品中三聚氰胺的檢測(cè)方法，包括液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)、氣相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法(GC-MS-MS)、液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法(LC-MS-MS)以及酶聯(lián)免疫法(ELISA)等，為食品中三聚氰胺的檢測(cè)方法選擇提供依據(jù)，也為未來(lái)研究高靈敏度、成本低而且分析快速的三聚氰胺檢測(cè)方法提供參考。

三聚氰胺；檢測(cè)方法；食品

三聚氰胺(Melamine)，簡(jiǎn)稱三胺，別名蜜胺，是一種重要的化工原料，常用于制造三聚氰胺樹脂，廣泛運(yùn)用于木材、塑料、涂料、造紙、紡織、皮革、電氣、醫(yī)藥等行業(yè)，是建筑業(yè)中常用的防火阻燃材料[1]。在食品應(yīng)用中，三聚氰胺既不是食品原料也不是食品添加劑，本與食品毫無(wú)關(guān)系，但由于其含氮量高達(dá)66.7%，價(jià)格較蛋白質(zhì)便宜，一些不法商家利用凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法缺陷，違法把三聚氰胺添加到食品或動(dòng)物飼料中，造成產(chǎn)品蛋白質(zhì)含量高的假象，從而獲得高利益。三聚氰胺進(jìn)入人體后不能被代謝，長(zhǎng)期攝入三聚氰胺會(huì)引起泌尿系統(tǒng)的結(jié)石，甚至誘發(fā)膀胱癌。2008年9月，由于三聚氰胺在嬰兒乳粉中非法添加導(dǎo)致超過5萬(wàn)名嬰幼兒出現(xiàn)泌尿系統(tǒng)結(jié)石，俗稱大頭嬰兒事件，使得三聚氰胺在乳制品中非法添加得到曝光，直接導(dǎo)致中國(guó)乳制品行業(yè)性的誠(chéng)信危機(jī)，對(duì)人們的日常生活造成嚴(yán)重的社會(huì)影響。

圖1　三聚氰胺的結(jié)構(gòu)

1　食品中三聚氰胺

三聚氰胺原本不應(yīng)該在食品中存在，也不允許人為添加到食品中，其作為塑料樹脂的重要組成成分，有可能會(huì)由塑料包裝材料遷移到食品中，但微量的遷移不至于對(duì)人體造成傷害。大頭嬰兒事件的出現(xiàn)，使得三聚氰胺在食品中違法添加得到曝光，引起人們極大重視，也使得食品中三聚氰胺的檢測(cè)方法探索迅速發(fā)展。

2　三聚氰胺的檢測(cè)方法

三聚氰胺的檢測(cè)方法已經(jīng)由過去較簡(jiǎn)單的苦味酸法等，快速發(fā)展到現(xiàn)今高精密度的液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)、氣相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法(GC-MS-MS)、液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法(LC-MS-MS)、酶聯(lián)免疫法(ELISA)、電化學(xué)法、電化學(xué)發(fā)光法(ECL)等。

2.1液相色譜法(HPLC)

HPLC法是目前檢測(cè)食品中三聚氰胺比較廣泛的方法之一，其常用的色譜柱有C8和C18，檢測(cè)器多用UV檢測(cè)器或DAD檢測(cè)器，該方法相較GC-MS、GC-MS-MS，具有前處理簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，檢測(cè)時(shí)間較短，但該法檢測(cè)限較高，受基質(zhì)影響較大，易于出現(xiàn)的假陽(yáng)性情況，適合較高含量的三聚氰胺檢測(cè)。

汪輝等[2]用C18作分離色譜柱，建立高蛋白食品中三聚氰胺的HPLC-DAD檢測(cè)法，該方法中用0.02 mol/L硫酸銨-甲醇(94:6)作流動(dòng)相，選取235.0 nm作檢測(cè)波長(zhǎng)，檢測(cè)限可達(dá)到0.01 μg/mL，線性范圍0.1～150 μg/mL。

趙永彪等[3]采用ODS分離柱(C18)建立測(cè)定寵物食品中三聚氰胺的高效液相色譜分析法，該法用pH=3的庚烷磺酸鈉-乙腈(90:10)作流動(dòng)相，在236 nm檢測(cè)三聚氰胺含量，最低定量檢出濃度為2 mg/kg。

2.2氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)、氣相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法(GC-MS-MS)

GC-MS、GC-MS-MS法較HPLC法具有試劑使用少，檢測(cè)限低，降低出現(xiàn)假陽(yáng)性的優(yōu)點(diǎn)，該法將三聚氰胺從食品中提純，然后將三聚氰胺衍生化成非極性物質(zhì)，通過氣相色譜分離，用質(zhì)譜進(jìn)行定量分析。但由于該法需要將三聚氰胺衍生化處理，前處理步驟比較繁瑣，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，該法適用于較低含量的三聚氰胺檢測(cè)。

王征[4]建立GC-MS法測(cè)定動(dòng)物食品中的三聚氰胺，通過甲醇/水/三乙胺混合液提取動(dòng)物食品中的三聚氰胺，氮?dú)獯蹈桑俟柰榛苌?，利用DB-5TH彈性石英毛細(xì)管柱作分離柱，質(zhì)譜作檢測(cè)器，最低檢測(cè)限達(dá)到0.1 μg/g, 在0.1～50.0 mg/L范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，該法選擇性好，能有效消除復(fù)雜基體干擾。

吳惠勤等[5]通過三氯乙酸、乙酸鉛提取，用固相萃取住凈化，吡啶作衍生化試劑，DB-1MS石英毛細(xì)管柱作分離柱，GC-MS分析奶粉及奶制品中的三聚氰胺，其檢出限為1 μg/kg，定量限為5 μg/kg，線性范圍0.01～50 mg/L，回收率在90%～98%之間。

盧業(yè)舉等[6]建立GC-MS-MS法測(cè)定食品中的三聚氰胺，該法用吡啶作衍生化試劑，選用TR-5MS色譜柱，采用多反應(yīng)檢測(cè)模式(MRM)進(jìn)行檢測(cè)，最低定量檢測(cè)限為1 μg/kg，在0.1～100 μg/L范圍內(nèi)線性良好，可用于測(cè)定奶粉、奶糖，含乳飲料、餅干等食品中三聚氰胺的檢測(cè)。

2.3液相色譜-質(zhì)譜-質(zhì)譜法(LC-MS-MS)

LC-MS-MS法由于受基質(zhì)的影響較少，具有極低的檢測(cè)限優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)由于不需像GC-MS法要對(duì)三聚氰胺進(jìn)行衍生化，簡(jiǎn)化前處理過程，檢測(cè)時(shí)間較短，但該法所用的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀價(jià)格較貴，檢測(cè)成本較高，同時(shí)該法不能用無(wú)機(jī)鹽緩沖液作流動(dòng)相，其流動(dòng)相的可選擇性較少。

欒偉[7]建立LC-MS-MS法用于寵物食品中三聚氰胺的檢測(cè)，采用C18色譜柱作分離柱，以pH=5.1的甲醇-水(1:9)作為流動(dòng)相，該法的靈敏度可以達(dá)到50 pg/mL。

劉梅等[8]采用C8分離柱，以乙腈和水為流動(dòng)相，串聯(lián)質(zhì)譜作檢測(cè)器檢測(cè)食品中的三聚氰胺，該方法檢測(cè)限為0.5 mg/kg,線性范圍為0.1～10.0 mg/kg。

黃芳等[9]采用C18柱建立飼料中三聚氰胺的高效液相色譜-質(zhì)譜測(cè)定方法，該法用乙腈-0.1%甲酸(5:95)作流動(dòng)相，采用正離子化，多反應(yīng)檢測(cè)模式(MRM)，該法檢測(cè)限可達(dá)0.01 mg/L，線性范圍為0.01～0.5 mg/L。

2.4酶聯(lián)免疫法(ELISA)

ELISA法相較色譜法，ELISA法具有特異性強(qiáng)，靈敏度高，操作簡(jiǎn)單，分析時(shí)間短，可同時(shí)進(jìn)行大量樣品的篩查。

王黎麗等[10]基于單克隆抗體建立三聚氰胺直接和間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法，兩種方法的IC50分別為3.12 μg/L和56.88 μg/L，線性范圍為0.05～10 μg/L和0.1～1000 μg/L，兩種方法都可以用于三聚氰胺的快速檢測(cè)，但間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA比直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA更加靈敏。

2.5電化學(xué)發(fā)光法(ECL)

電化學(xué)發(fā)光是電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光相互滲透形成的，其利用電化學(xué)原理在電極表面產(chǎn)生某些氧化還原物質(zhì)而導(dǎo)致的化學(xué)發(fā)光，具有設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、靈敏度高、重現(xiàn)性好、線性范圍寬、可進(jìn)行原位檢測(cè)等特點(diǎn)。

陳鈺等[11]采用噴射式電化學(xué)發(fā)光流動(dòng)檢測(cè)技術(shù)建立奶粉和液態(tài)奶中三聚氰胺的檢測(cè)方法，其檢測(cè)限為0.001 μg/L，不同加標(biāo)量的陰性樣品回收率為92.2%～114.2%，線性范圍在0.001～1000 μg/L。

2.6其他檢測(cè)方法

食品中三聚氰胺的檢測(cè)分析，除了上述介紹的常用方法外，還有表面增強(qiáng)拉曼光譜法(SERS)[13]，熒光光譜法[14]、分光光度法[15]等。

3　結(jié)　語(yǔ)

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)于三聚氰胺的檢測(cè)，不同的檢測(cè)方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，在實(shí)際應(yīng)用中要根據(jù)樣品、檢測(cè)成本等選擇合適的檢測(cè)方法。我國(guó)是世界上食品的生產(chǎn)和消費(fèi)大國(guó)，在食品安全越來(lái)越重視的今天，開發(fā)和研究食品中三聚氰胺的高靈敏度、成本低而且分析快速的檢測(cè)方法，將是未來(lái)的發(fā)展方向，對(duì)加強(qiáng)食品中三聚氰胺的監(jiān)控，提高食品安全指數(shù)具有重要意義。

[1]張俊燕,何呂興.三聚氰胺的樣品前處理及最新檢測(cè)方法[J].生命科學(xué)儀器,2007(5):57-59.

[2]汪輝,曹小彥,彭新凱,等.高效液相色譜-二極管陣列法測(cè)定高蛋白食品中的三聚氰胺[J].食品與機(jī)械,2007,23(5):114-124.

[3]趙永彪,李自春,劉婷,等.高效液相色譜法測(cè)定寵物食品中的三聚氰胺[J].分析實(shí)驗(yàn)室,2008,27(z1):190-192.

[4]王征.GC-MS法測(cè)定動(dòng)物食品中的三聚氰胺[J].福建分析測(cè)試,2008,17(2): 1-4.

[5]吳惠勤,黃芳,林曉珊,等.氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定奶粉及奶制品中的三聚氰胺[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào),2008(10):1044-1048.

[6]盧業(yè)舉,舒勇,趙成仕.氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定食品中的三聚氰胺[J].色譜,2008,26(6): 749-751.

[7]欒偉.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)分析寵物食品中三聚氰胺[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào),2007,26(S1):285-286.

[8]劉梅,李金強(qiáng),田德金,等.固相萃取-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)食品中的三聚氰胺[J].化學(xué)分析計(jì)量,2008,17(2):48-50.

[9]黃芳,黃曉蘭,吳惠勤,等.高效液相色譜-質(zhì)譜法對(duì)飼料及食品添加劑中三聚氰胺的測(cè)定[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào),2008,27(3):313-315.

[10]王黎麗,陳芳芳,吳超,等.基于單克隆抗體的三聚氰胺ELISA檢測(cè)方法的建立[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2011,30(6):962-966.

[11]陳鈺,王捷,劉仲明,等.噴射式電化學(xué)發(fā)光流動(dòng)檢測(cè)技術(shù)快速測(cè)定奶粉及液態(tài)奶中三聚氰胺[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào),2013,32(7):890-893.

[12]王士偉,鄧光輝,屈忠凱,等.毛細(xì)管電泳電化學(xué)發(fā)光法分離測(cè)定奶粉中的二聚氰胺和三聚氰胺[J].分析實(shí)驗(yàn)室,2014,33(10):1198-1201.

[13]Mecker LC,Tyner KM, Kauffman JF,et al. Selective melamine detection in multiple sample matrices with a portable Raman instrument

using durface enhanced Raman spectroscopy-active gold nanoparticles [J]. Anal Chim Acta, 2012,733: 48-55.

[14]韓彩芹,劉瑩,趙文艷,等.三聚氰胺溶液的熒光光譜實(shí)驗(yàn)研究[J].光學(xué)學(xué)報(bào),2009(11):3163-3167.

[15]馮偉,呂昌銀,嚴(yán)成艷,等.膠束增敏分光光度法水相測(cè)定乳制品中三聚氰胺[J].分析實(shí)驗(yàn)室,2010,29(4):49-52.

Discussion on the Detection Methods of Melamine in Food

HUANGWei-guo

(Yangjiang Supervision Testing Institute of Quality and Metrology, Guangdong Yangjiang 529500,China)

Melamine is not food material and food additive, but a kind of important chemical material. To provide the basis for the detection melamine in food, several kinds of detection methods of melamine were discussed including HPLC, GC-MS, GC-MS-MS, LC-MS-MS, ELISA, etc. It also provided the reference for research of high sensitivity, rapid testing and cheap detection of melamine in food in the future.

Melamine; detection methods; Food

黃衛(wèi)國(guó)(1985-)，男，工程師，主要從事分析化學(xué)檢測(cè)和應(yīng)用。

O63

A

1001-9677(2016)03-0037-03