馬擁軍，陳真，胡少龍，鄭雅萍，李小兵

金華地區(qū)嬰幼兒病毒性腹瀉流行病學(xué)分析

馬擁軍，陳真，胡少龍，鄭雅萍，李小兵

目的了解1年中浙江省金華地區(qū)5歲以下兒童病毒性腹瀉病原構(gòu)成及流行病學(xué)特點(diǎn)。方法對(duì)822例5歲以下腹瀉患兒進(jìn)行糞便標(biāo)本采集，利用多重片段分析方法對(duì)5種主要腹瀉病毒進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果822例腹瀉樣本中檢出陽性樣本473例，檢出率為57.5%，其中輪狀病毒檢出率為39.8%，諾如病毒檢出率為21.4%，腺病毒檢出率為9.6%，冠狀病毒檢出率為3.3%，星狀病毒檢出率為2.2%。不同性別各病毒感染率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。6個(gè)月至2歲年齡段陽性檢出率明顯高于其他年齡段，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。輪狀病毒與諾如病毒整年均可檢出，其中輪狀病毒在秋冬季節(jié)檢出率高于春夏季（均P＜0.05）；諾如病毒夏季和秋季檢出率高于春季和冬季（均P＜0.05）。結(jié)論引起嬰幼兒腹瀉的主要病毒是輪狀病毒，高發(fā)期為秋冬季和夏秋季，且0～2歲為病毒性腹瀉高發(fā)年齡段。

嬰兒；幼兒；腹瀉；病毒；流行病學(xué)

腹瀉的發(fā)病率僅次于急性呼吸道感染，已受到WHO和各國(guó)政府的高度重視［1］，是發(fā)展中國(guó)家嬰幼兒的常見病。80%嬰幼兒腹瀉是由病毒感染引起的，臨床表現(xiàn)為惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉伴全身癥狀，如果不能及時(shí)有效地進(jìn)行治療，身體脫水和體內(nèi)電解質(zhì)紊亂將可能引起死亡。因此探討嬰幼兒腹瀉的流行病學(xué)特點(diǎn)，對(duì)于合理的預(yù)防和治療，具有重要的意義。為系統(tǒng)掌握本地區(qū)病毒性腹瀉的流行現(xiàn)狀與特點(diǎn)，從而為病毒的防治與疫苗的研發(fā)提供指導(dǎo)依據(jù)。筆者對(duì)本院 822例糞便標(biāo)本的 5種病毒進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料收集2015年1—12月浙江省金華市中心醫(yī)院5歲以下822例腹瀉患兒的新鮮腹瀉標(biāo)本822份（822例患者），其中男506例，女316例，男女比例為1.6∶1。

1.2研究方法

1.2.1儀器與試劑GenomeLab GeXP遺傳分析儀（A26572），購(gòu)自美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司；糞便DNA/RNA提取試劑盒（20141117）（20150825），購(gòu)自寧波重鼎生物技術(shù)有限公司。

1.2.2實(shí)驗(yàn)方法取100mg以上糞便，與0.9%氯化鈉注射液按1：3比例（m/v）充分混勻后提取核酸。利用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)設(shè)計(jì)5種腹瀉病毒及內(nèi)參的特異性引物；建立多重逆轉(zhuǎn)錄酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（mRTPCR）［2］體系：按照水（無核酸酶）605l，5×RT Buffer 220 l，RT primer mix 110 l配置RT預(yù)混液，按照10×PCR Buffer 110l，25 mmol/L MgCl2220l，DiaP PCR Primer mix 110 l，Solution×110 l配置PCR預(yù)混液，在20l反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系中加入5l待測(cè)核酸、14l RT預(yù)混液和1 l反轉(zhuǎn)錄酶，經(jīng)過48℃1min，42℃60min，95℃5 min的孵育，將RT反應(yīng)產(chǎn)物10.3l轉(zhuǎn)移至PCR反應(yīng)體系（9 l PCR預(yù)混液，0.7 LTaq聚合酶）。PCR擴(kuò)增參數(shù)為94℃變性1 min后進(jìn)入35個(gè)循環(huán)：94℃30 s；60℃30 s和70℃1 min，70℃延伸1 min。用GeXP遺傳分析系統(tǒng)對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)電泳分離，從而對(duì)5種腹瀉病毒進(jìn)行鑒別。1.3統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1病毒檢出率822例患者中473例檢測(cè)結(jié)果陽性，其中輪狀病毒陽性最多，其次為諾如病毒。見表1。

2.2病毒感染性別分布不同性別各病毒感染率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X2=0.878，P＞0.05）。見表2。

2.3病毒感染年齡分布6個(gè)月至2歲年齡段陽性檢出率明顯高于其他年齡段，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X2≥15.76，均P＜0.05）。見表3。

2.4病毒感染年齡分布2015年全年可見，輪狀病毒與諾如病毒整年均可檢出，其中輪狀病毒在秋冬季節(jié)檢出率均高于春夏季（X2≥22.29，均P＜0.05）；諾如病毒夏季和秋季檢出率均高于春季和冬季（X2≥6.57，均P＜0.05）。見表4。

表1 各種病毒檢出情況

表2　不同性別患兒病毒檢查陽性檢出率比較例（％）

表3　輪狀病毒、諾如病毒陽性檢出率年齡構(gòu)成　例（%）

表4　輪狀病毒、諾如病毒檢出率

3　討論

嬰幼兒腹瀉是嬰幼兒期的一種胃腸道功能紊亂，以腹瀉、嘔吐為主的綜合征［3］，而病毒性腹瀉已經(jīng)成為許多發(fā)展中國(guó)家嬰幼兒死亡的主要原因之一。因此對(duì)嬰幼兒腹瀉患者進(jìn)行病毒檢測(cè)對(duì)于病毒性腹瀉的診斷與及時(shí)治療顯得尤為重要。國(guó)內(nèi)對(duì)不同病毒引起腹瀉的流行病學(xué)報(bào)道較少，為了解不同病毒引起嬰幼兒腹瀉的重要性。本文收集了2015年5歲以下822例腹瀉患兒的新鮮腹瀉樣本，同時(shí)對(duì)輪狀病毒、諾如病毒、腸道腺病毒、冠狀病毒、星狀病毒5種病毒進(jìn)行檢測(cè)。共檢出陽性樣本473例，檢出率為57.5%，混合感染93例，占11.3%，其中輪狀病毒檢出率為39.8%，諾如病毒檢出率為21.4%，腺病毒檢出率為9.6%，冠狀病毒檢出率為3.3%，星狀病毒檢出率為2.2%。因此在臨床上遇到患兒腹瀉，應(yīng)充分考慮到病毒性腹瀉的可能性，不應(yīng)只考慮到細(xì)菌性腹瀉，運(yùn)用科學(xué)的檢測(cè)方式可避免抗生素的濫用。

本次研究發(fā)現(xiàn)病毒性感染的男患兒人數(shù)多于女患兒，可能是由于腹瀉就診的男患兒多于女患兒所致，但性別因素在病毒感染率差異上并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。輪狀病毒仍是目前引起嬰幼兒腹瀉的最主要病原體，高發(fā)于秋冬季節(jié)，諾如病毒檢出率僅次于輪狀病毒，這與國(guó)內(nèi)外多數(shù)報(bào)道相一致［4-6］，但本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)諾如病毒在8、9月份檢出率較高，這與北方地區(qū)所報(bào)道的流行時(shí)間相比靠前［7］，可能與南北方氣候環(huán)境差異有關(guān)。在流行高發(fā)季節(jié)室內(nèi)注意通風(fēng)換氣，勤洗手，注意飲食衛(wèi)生。對(duì)患兒使用過的物品進(jìn)行消毒，應(yīng)少帶孩子去公共場(chǎng)所，尤其是防止在醫(yī)院發(fā)生交叉感染。針對(duì)這兩大腹瀉病毒，本研究發(fā)現(xiàn)6個(gè)月至2歲的嬰幼兒病毒檢出率最高，與我國(guó)其他地區(qū)研究報(bào)道結(jié)果一致［8］。這與嬰幼兒本身免疫系統(tǒng)未發(fā)育完善，且此年齡段的嬰幼兒正處于或已完成斷奶，來自母體的獲得性免疫在逐步消失有關(guān)。該統(tǒng)計(jì)可為疫苗接種年齡段提供參考。其余病毒由于病例數(shù)較少，是否具有明顯的易感年齡段及季節(jié)性發(fā)病高峰還需要進(jìn)一步觀察研究。

［1］ ParasharUD，BreseeJS，GlassRI.The global burdenofdiarrhoealdiseaseinchildren ［J］.Bull World Health Organ，2003，81（4）：236.

［2］王瓊，林廣裕，高珺，等.應(yīng)用GeXP遺傳分析系統(tǒng)檢測(cè)病毒性腦炎患兒腦脊液中的人類鼻病毒［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2015，12（13）：1828-1831.

［3］梁連錦.小兒腹瀉病的治療進(jìn)展［J］.中外醫(yī)學(xué)研究，2011，（23）：155-156.

［4］NguyenTA，YagyuF，OkameM，eta1.Diversityofvirusesassociatedwithacutegastroenteritisinchildrenhospitalizedwithdiarrhea inHoChi Minh City，Vietnam［J］.Med Virol，2007，79（5）：582-590.

［5］Parashar UD，Hummelman EG，BreseeJ S，et al.Global illness and deaths caused by rotavirus disease in children［J］.Emerging Infectious Diseases，2003，9（5）：565-572.

［6］Moreno S.Human caliciviruses and pediatric gastroenteritis.［J］.Seminars in PediatricInfectiousDiseases，2004，15（4）：237-245.

［7］吳疆，高志勇，劉桂榮，等.北京地區(qū)諾如病毒感染的流行病學(xué)調(diào)查［J］.中華流行病學(xué)雜志，2007，28（7）：667-670.

［8］方肇寅，謝華萍，呂紅霞，等.1999～2005年我國(guó)嬰幼兒人杯狀病毒腹瀉研究 ［J］.病毒學(xué)報(bào)，2007，23（1）：9-15.

10.3969/j.issn.1671-0800.2016.07.011

R725.7

A

1671-0800（2016）07-0865-02

金華市科技局重點(diǎn)項(xiàng)目（2013-3-011）

321000浙江省金華，金華市中心醫(yī)院（馬擁軍、胡少龍、鄭雅萍、李小兵）；寧波海爾施基因科技有限公司（陳真）

馬擁軍，Email：jhmyj71@ sina.cn

2016-04-01（本文編輯：姜曉慶）