徐　勇

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正交試驗(yàn)優(yōu)選強(qiáng)心顆粒提取工藝

徐勇

目的優(yōu)選我院制劑強(qiáng)心顆粒的提取工藝。方法以加水量、煎煮時(shí)間和提取次數(shù)為考察因素，丹酚酸B含量及干膏率為試驗(yàn)指標(biāo)，采用L9(34)正交試驗(yàn)優(yōu)選強(qiáng)心顆粒提取工藝。結(jié)果強(qiáng)心顆粒最佳提取工藝為8倍水，煎煮1小時(shí)，提取2次。結(jié)論該研究為強(qiáng)心顆粒劑型改革和制劑工藝研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

正交試驗(yàn)；強(qiáng)心顆粒；提取工藝；丹酚酸B

強(qiáng)心顆粒是我院研制的純中藥制劑，該制劑由黃芪、丹參、太子參、茯苓、白術(shù)、葶藶子、麥冬、紅花等8味中藥組成，具有益氣養(yǎng)陰、活血通絡(luò)之功效，用于氣陰兩虛、瘀血阻絡(luò)所致的胸痹，癥見胸悶隱痛，時(shí)作時(shí)止，心悸氣短，倦怠懶言，面色少華，頭暈?zāi)垦?，遇勞則甚，冠心病、肺心病、擴(kuò)展性心肌病見上述證候者。原方以湯劑用于臨床多年，療效確切。但湯劑煎煮、攜帶、使用均不方便，口感亦不佳。因此，為方便患者，我院考慮更改劑型，根據(jù)本方的功能主治，在保持原有療效的前提下，結(jié)合劑型三效、三小、五方便的原則，同時(shí)考慮到穩(wěn)定性及對(duì)藥物的容納量大、制劑工藝工業(yè)化程度等因素，最終確定該劑型為顆粒劑[1，2]。顆粒劑是目前最為常用的固體劑型之一，其既保持了湯劑吸收快、作用迅速的優(yōu)點(diǎn)，又克服了湯劑煎煮、攜帶不便，易霉敗變質(zhì)等缺點(diǎn)，受到廣大患者的歡迎[3]。為了保證臨床用藥的質(zhì)量與療效，須對(duì)其制備工藝進(jìn)行研究。文獻(xiàn)顯示[4，5]，水煎提取工藝中加水量、提取次數(shù)、提取時(shí)間等因素直接影響浸出物及有效成分的溶出。為優(yōu)選水煎提取工藝，以加水量、提取次數(shù)、提取時(shí)間3 個(gè)影響因素為考察因素，丹酚酸B含量及干膏率為試驗(yàn)指標(biāo)，按正交試驗(yàn)法優(yōu)選最佳提取工藝，為強(qiáng)心顆粒的制備有效性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。以期為強(qiáng)心顆粒的開發(fā)和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1　儀器與試藥

1.1儀器日本島津LC-10AD高效液相色譜儀，SPD-10Avp紫外-可見檢測(cè)器，Anastar工作站，AUW220D型島津分析天平。

1.2試劑丹酚酸B(中國食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用，批號(hào)：111810-201304；中藥材均由河北祁?yuàn)W中藥飲片有限公司提供，經(jīng)本溪市藥檢所鑒定，符合《中華人民共和國藥典》2010年版一部項(xiàng)下規(guī)定[6]。甲醇、乙腈為色譜純，水為純化水。其他化學(xué)試劑均為分析純。

2　工藝設(shè)計(jì)

根據(jù)處方中所含8味中藥材的成分分析[7]，均可用水提法提取有效成分，用正交試驗(yàn)對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。

2.1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)考慮水提取工藝的主要影響因素，選擇加水量(A)、煎煮次數(shù)(B)、煎煮時(shí)間(C)為考察因素，按L9(34)正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，以丹酚酸B含量及干膏率為試驗(yàn)指標(biāo)，因素與水平見表1。

表1　提取工藝的因素水平表

2.2樣品制備按處方比例稱取9份處方中各藥味，每份樣品按正交表安排的條件進(jìn)行煎煮，合并煎煮液，濃縮，定容至200ml，備用。

2.3丹酚酸B含量測(cè)定

2.3.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充刻;流動(dòng)相:甲酸-水(1∶59)與甲醇、乙腈的比例為64∶27∶9;流速1.0ml/min;檢測(cè)波長:286nm;柱溫:25℃;理論塔板數(shù)按丹酚酸B計(jì)算應(yīng)不低于2000。主峰與其他物質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定。

2.3.2對(duì)照品溶液的制備取丹酚酸B對(duì)照品適量，精密稱定，加75%甲醇制成每1ml含0.190mg的溶液，即得。

2.3.3供試品的制備精密量取上述2.2中煎煮液10mL, 加水30ml稀釋，置分液漏斗中，用乙酸乙酯振搖提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，殘?jiān)舆m量75%甲醇使溶解，微孔濾膜濾過，濾液定容至10ml，作為供試品溶液。

2.3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取丹酚酸B對(duì)照品溶液(C=0.190mg/ml)2，4，6，8，10μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定峰面積，以丹酚酸B峰面積積分值為縱坐標(biāo)(y),進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(x),進(jìn)行線性回歸，得同歸方程y=109580x+31130，r=0.9995。結(jié)果表明，丹酚酸B在0.380-1.900μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液2μl,于0、2、4、6、8h分別進(jìn)樣,測(cè)定峰面積,測(cè)得的峰面積RSD值為1.92%,試驗(yàn)結(jié)果表明,樣品供試液在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.6精密度試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液2 ul,連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)定其峰面積,計(jì)算其RSD為0.96+%(n=6),表明儀器精密度良好。

2.4干膏率的測(cè)定精密量取上述2.2中煎煮液25mL，置干燥恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃干燥箱中干燥3小時(shí)，取出，置干燥器內(nèi)冷卻30分鐘，取出，迅速精密稱定重量，計(jì)算干膏率。[干膏率=干膏重(g)/藥材總重(g)×100%]

2.5正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析根據(jù)經(jīng)驗(yàn)知道，丹酚酸B含量比出膏率更重要，因此，兩個(gè)指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)分別取為ω1=0.6和ω2=0.4。為使各指標(biāo)單位統(tǒng)一，把試驗(yàn)結(jié)果的每項(xiàng)指標(biāo)中最好的指標(biāo)定為60分和40分，綜合評(píng)分為100分。在統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)下加權(quán)評(píng)分為：干膏率：y1=(y1÷32.12×100)×0.4，丹酚酸B含量：y2=(y2÷6.98×100)×0.6，綜合評(píng)分：y= y1+y2，正交試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2　正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

以綜合評(píng)分值為指標(biāo)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行方差分析，列出方差分析表，見表3。

表3　方差分析表　 F0.05(2,2)=99,F0.01(2,2)=19

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果看7號(hào)(A3B1C3)最好，即10倍水，煎煮1小時(shí)，提取3次。直觀分析中，最優(yōu)組合為A3B3C2，即10倍水，煎煮2小時(shí)，提取2次。方差分析表明，因素C對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有顯著影響(P>0.05)，結(jié)合直觀分析選擇C2；因素A、B均為不顯著因素，可根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)情況確定加水量和煎煮時(shí)間。直觀分析中，A因素最優(yōu)應(yīng)選A3，但A因素?zé)o顯著影響，A2與A3差別又較小，考慮到實(shí)際生產(chǎn)中加水10倍量，后期濃縮及受熱時(shí)間較長，為省時(shí)節(jié)能，選擇A2較好；同樣，B因素?zé)o顯著影響，B1、B2與B3的試驗(yàn)結(jié)果相差不大，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果看A3B1C3最好，選B1為好，從生產(chǎn)實(shí)際出發(fā)考慮，煎煮時(shí)間越長能耗越大且易煎出更多雜質(zhì)，給后期分離帶來困難，選B1較為合適，故B1為優(yōu)選。因此最佳工藝為A2B1C2，即8倍水，煎煮1小時(shí)，提取2次。

2.6工藝驗(yàn)證試驗(yàn)按處方比例稱取各藥材，共3份，按優(yōu)選的最佳工藝分別進(jìn)行提取，按“2.3”“2.4”項(xiàng)下方法測(cè)定提取液中丹酚酸B含量和干膏率。該驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果理想，表明優(yōu)選工藝合理、可行，可用于強(qiáng)心顆粒提取。結(jié)果見表4。

表4　驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3　討論

提取工藝是制劑生產(chǎn)過程中最重要的環(huán)節(jié)之一，對(duì)于中藥質(zhì)量、療效有著舉足輕重的影響。眾所周知，中藥多組分多靶點(diǎn)的整體調(diào)節(jié)效應(yīng)，使得中藥具有廣泛的藥理活性。為保證中藥產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定，療效可靠，必須對(duì)中藥提取進(jìn)行研究，建立的標(biāo)準(zhǔn)化提取過程。

本工藝的篩選指標(biāo)確定為2個(gè)。丹參系方中君藥，丹參的主要活性成分丹酚酸B在心血管疾病的治療方面有著較強(qiáng)的藥理活性，其為水溶性成分。本方采用傳統(tǒng)的水煎煮法提取藥材，因此，選擇以丹酚酸B含量作為提取工藝主要的評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。而干浸膏是藥物治療疾病的物質(zhì)基礎(chǔ)，故也應(yīng)作為檢測(cè)指標(biāo)[8]。本試驗(yàn)以多指標(biāo)控制和評(píng)價(jià)中藥制劑質(zhì)量，使試驗(yàn)結(jié)果更科學(xué)、合理、全面，獲得的提取工藝更適合實(shí)際生產(chǎn)條件并且操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定可行。

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Optimization of Extraction Technology of Qiangxin Granules by Orthogonal Experiment

XU Yong

(Department of Pharmacy, Benxi Hospital of Traditional Chinese Medicine, Liaoning, Benxi 117000, China)

ObjectiveTo study the abstraction procedure of Qiangxin granules. MethodsThe optional extraction process was selected for the yields of extracts & salvianolic acid B by using L9 (34) orthogonal design. The effects of water addition, duration of decoction and times of extraction were observed. ResultsThe optimal extraction process was determined by 8 times water addition, reflux extracting 2 times, decoction 1 hour. ConclusionThe study provided experimental basis for dosage reform and pharmaceutical technology of Qiangxin granules.

Orthogonal experiment; Qiangxin granules; Extraction technology; Salvianolic acid B

遼寧省本溪市中醫(yī)院藥劑科(本溪 117000)

10.3969/j.issn.1003-8914.2016.16.020

1003-8914(2016)-16-2343-03

(本文校對(duì)：張葉2015-12-30)