柏　合，，王　未，李云章，林德貴

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)學院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018；2.牡丹江醫(yī)學院，黑龍江 牡丹江 157013；3.中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，北京 海淀 100193）

ZD制劑對小鼠急性軟組織損傷的毛細血管通透性及血液流變影響的研究

柏合1，2，王未1，李云章1，林德貴3

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)學院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018；2.牡丹江醫(yī)學院，黑龍江 牡丹江 157013；3.中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，北京 海淀 100193）

為了觀察自制外用ZD制劑對小鼠急性軟組織損傷的療效，初步探討其作用機理，分別對小鼠采用腹腔注射醋酸溶液，觀察自制外用ZD制劑對小鼠毛細血管通透性的影響；對小鼠造急性軟組織損傷模型，測定應用自制外用ZD制劑后小鼠血液流變學指標，確定其對血液流變學的影響。結(jié)果ZD制劑抑制毛細血管通透性增加（P<0.01）；降低血液流變學指標（P<0.05或P<0.01）。表明ZD制劑通過抑制毛細血管通透性和降低血液流變學的指標，對急性軟組織損傷修復具有良好的促進作用。

ZD制劑；軟組織損傷；毛細血管通透性；血液流變學

軟組織損傷屬于中醫(yī)“筋傷”范疇，是指外力作用致皮膚、皮下組織、筋膜、肌肉、肌腱、韌帶、滑膜、關(guān)節(jié)囊等軟組織及一部分軟骨和周圍神經(jīng)、血管的損傷。賽馬的運動損傷是影響其經(jīng)濟價值的重要疾病，其肢蹄軟組織損傷疾病是較為常見的。據(jù)統(tǒng)計，馬屬動物肢蹄病占外科病例總數(shù)的70%以上[1]。目前國內(nèi)外常采用非甾體抗炎藥來治療，但臨床研究表明，長期服用這類藥物往往會產(chǎn)生多種不良反應，如胃腸道損害、腎衰竭、心血管疾病等[2]。因此開發(fā)一種藥效好、毒副作用小、攜帶方便的外用中藥制劑就顯得尤為必要。中國傳統(tǒng)醫(yī)學根據(jù)中醫(yī)學理論，對急性軟組織損傷治療積累了豐富的經(jīng)驗，在實際應用中取得了良好的效果[1，3-4]。

ZD制劑是由臨床治療軟組織損傷有良好效果的外用驗方研制而成的，由乳香、沒藥、當歸、紅花等12味中藥組成，加入現(xiàn)代賦形劑和透皮劑制成的一種新型中藥軟膏劑型，具有活血祛瘀、

舒筋活絡、消腫止痛等功效。為探討其活血祛瘀的作用機理，我們從毛細血管通透性和血液流變學角度對其進行實驗研究，對進一步精制及合理應用ZD制劑提供實驗依據(jù)。

1　材料與方法

1.1實驗動物昆明系小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，由內(nèi)蒙古大學實驗動物中心提供，合格證號：SCXK（蒙）2002-0001號。

1.2藥物及試劑ZD制劑（由川椒、茵陳、乳香、沒藥、紅花、伸筋草、海桐皮、地骨皮、白芨、桂枝、當歸、透骨草12味藥材組成，比例為：2∶3∶4∶4∶4∶4∶4∶4∶4∶7∶8∶8），由本院制備；陽性組藥物為按摩乳（濟南全力制藥有限公司，批號：Z37020377）；二甲苯；硫化鈉；冰醋酸；伊文思藍。

1.3儀器電子分析天平；恒溫水浴鍋；分光光度計；血液流變檢測儀。

1.4ZD制劑的制備先對原料藥材經(jīng)粉碎、浸泡、煎煮、過濾、濃縮等處理，后分成油相和水相分別處理，再將水相處理液加入油相處理液中，混勻，加入冰片和氮酮，即形成均勻細膩的半固體的ZD制劑。

1.5藥物分組和給藥劑量ZD制劑分為高、中和低劑量組，各組劑量分別為每1克含有0.064 g、0.032 g、0.016 g生藥的ZD制劑，每組用量0.2 g/ cm2；陽性組為按摩乳0.2 g/cm2；空白對照組給予相同量基質(zhì)0.2 g/cm2。

1.6對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響[5]取昆明系小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只，即外用中藥高、中和低劑量組、陽性對照組（按摩乳）、空白對照組。所給藥物涂于腹部皮膚，給藥時間間隔為1 h，給藥3次。于末次給藥后15 min，經(jīng)尾靜脈注射1%伊文思藍生理鹽水0.2 mL，并同時腹腔注射0.6%醋酸生理鹽水溶液0.2 mL。30 min后處死動物。剪開小鼠腹部皮膚，分離肌肉，暴露腹腔，用5 mL生理鹽水分數(shù)次洗滌腹腔，收集沖洗液。經(jīng)3 000 r/min離心，取上清液用分光光度法在波長590 nm處測定伊文思藍的吸光度值。

1.7對小鼠血液流變學的影響

1.7.1動物造模參考文獻的造模方法[6]，制造急性軟組織損傷模型。試驗前1 d用8%硫化鈉溶液脫去小鼠左側(cè)臂部及大腿部毛。選擇大腿中部外側(cè)軟組織做好標記，將小鼠側(cè)臥式固定于自制軟組織打擊器上，用50 g砝碼從15 cm高度自由落下，連續(xù)擊打2下，打擊后肉眼即見打擊部位腫脹、瘀血、皮膚完整無破損且無骨折，說明造模成功。

1.7.2分組及給藥動物分為6組，即外用中藥高、中和低劑量組、陽性對照組（按摩乳）、空白對照組及模型組，各組按劑量涂抹相應藥物，模型組不給藥。

1.7.3對小鼠血液流變學的影響取昆明系種小鼠60只，雌雄各半，隨機分為6組，每組10只。造模后，于小鼠損傷處涂抹相應藥物，每天涂藥2次，連續(xù)治療4 d，第5天采用摘除眼球采血1 mL，迅速注入肝素抗凝管內(nèi)，測定血液流變學各項指標。

1.8統(tǒng)計學方法數(shù)據(jù)采用SAS9.0軟件處理。試驗數(shù)據(jù)以X±SD表示，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響結(jié)果表明，與空白對照組比較，外用中藥各劑量組均可明顯抑制醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性（P<0.01），其中，高劑量組的效果接近于按摩膏組。見表1。

表1　各處理組對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響（X±SD，n=10）

2.2對小鼠血液流變學的影響結(jié)果表明，模型組小鼠各項指標均明顯高于空白組（P<0.05或P< 0.01），說明造模是成功的。與模型組比較，外用中藥膏劑各劑量組均可使全血黏度、血漿黏度等指標明顯降低，有顯著差異（P<0.05或P<0.01），表明外用中藥膏劑可使血瘀模型之黏、濃、凝、聚狀態(tài)明顯恢復，有活血化瘀之功效。見表2。

3　討論

軟組織損傷屬于中醫(yī)“筋傷”范疇，中國傳統(tǒng)獸醫(yī)學認為，軟組織損傷的本質(zhì)是血瘀，損傷之后脈絡破損，血離經(jīng)而成瘀，瘀而化熱，瘀積不散，為腫為痛。現(xiàn)代醫(yī)學研究表明，血液流變性的改變是血液循環(huán)和微循環(huán)障礙發(fā)生的原因和基礎。軟組織損傷使局部毛細血管破裂，血液循環(huán)破壞，出血組織細胞壞死，血管通透性增加[5]，血管內(nèi)液滲到組織間隙，引起血液的高黏、高凝、高濃[7]等血液流變學改變。

表2　各處理組對小鼠血液流變學指標的影響?。╔±SD，n=10）

中藥外用是藥物通過透皮吸收作用于創(chuàng)傷局部，從而維持局部相對穩(wěn)定的血藥濃度，起到散瘀、消腫和止痛的功效[8]。通過活血化瘀治療，可以改善局部及全身血液循環(huán)，以此達到活血化瘀的目的，其病因及療效可能與血液流變性相關(guān)[9]。

ZD制劑是在傳統(tǒng)驗方的基礎上研制而成。外用中藥膏劑中的紅花能抑制血小板的聚集，從而起到抗凝作用防止血栓形成；當歸具有增強特異性和非特異性免疫功能及鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗炎作用；乳香具有降低血小板粘附、鎮(zhèn)痛作用[10]。ZD制劑中各種成分都不同程度降低毛細血管的通透性，減少炎癥滲出及紅細胞外漏，降低全血和血漿黏度，減輕紅細胞的聚集，改善紅細胞變形能力，使局部血液循環(huán)恢復，改善血液的流變性，從而達到消腫止痛的作用。方劑中又加入了冰片和氮銅作為透皮劑，使藥物更好的滲透進組織中，發(fā)揮藥效。ZD制劑能顯著降低毛細血管通透性和改善血液的流變性，對急性軟組織損傷的修復有良好的作用，從而為治療賽馬肢蹄軟組織損傷，提高其經(jīng)濟價值，提供了重要的實驗室依據(jù)。

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A Research on Capillary permeability and Hemorrheology of ZD Preparation treating acutesoft tissueinjuries in mice

BAI He1，2，WANG Wei1，LI Yun-zhang1，LIN De-gui3
（1.College of Veterinary Medicine，Inner Mongolia Agricultural University，Hohhot 010018，China；2.MuDanJiang Medical University，Mudanjiang 157013，China；3.College of Veterinary Medicine，China Agricultural University，Beijing 100193，China）

To observe the therapeutical effect of self-made topical ZD Preparation on mice with acute soft tissue injury and preliminary study its mechanism of action.Observation of the effect of self-made topical ZD Preparation on the capillary permeabili?ty of mice which were given acetic acid solution by intraperitoneal injection respectively.And acute soft tissue injury model mice were measured the effect of self-made topical ZD Preparation on hemorheology.The results showed that ZD preparations inhibited the increased capillary permeability（P<0.01）and reduced Hemorheology（P<0.05 or P<0.01）.ZD preparations promote the repair of acute soft tissue injury by inhibiting capillary permeability and lower indicators hemorheology.

ZD Preparation；soft tissue injury；Capillary permeability；Haemorheology

LI Yun-zhang

S853.7

A

0529-6005（2016）07-0025-03

2015-01-29

國家自然科學基金項目（31360629）；中國農(nóng)業(yè)大學-內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學校際合作項目（ZN201004）

柏合（1987-），女，碩士，研究方向為獸醫(yī)外產(chǎn)科學，E-mail：568789575@qq.com

李云章，E-mail：liyunzhang1956@163.com