路振香，，張訓(xùn)海，，郭偉娜，，楊　平，徐義巧，劉　暢，（.安徽科技學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院，安徽 鳳陽 3300；.家禽疫病防控監(jiān)測安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 鳳陽 3300）

雞鴨鵝新城疫病毒毒力及生物學(xué)特性的研究

路振香1，2，張訓(xùn)海1，2，郭偉娜1，2，楊平1，徐義巧1，劉暢1，2
（1.安徽科技學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院，安徽 鳳陽 233100；2.家禽疫病防控監(jiān)測安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 鳳陽 233100）

為了測定雞、鴨、鵝新城疫病毒的毒力強(qiáng)弱。測定其血凝價、血凝素?zé)岱€(wěn)定性試驗(yàn)、血凝解脫試驗(yàn)、氯仿敏感性試驗(yàn)、耐酸性試驗(yàn)，并對3株病毒進(jìn)行理化特性測定；測定其1日齡雛鴨腦內(nèi)接種致病指數(shù)、6周齡鴨靜脈接種致病指數(shù)和對13日齡非免疫鴨胚的半數(shù)感染量（EID50）。結(jié)果雞、鴨、鵝新城疫病毒的血凝價依次為29、28、28；血凝素?zé)岱€(wěn)定性指數(shù)分別為5、15、15 min；血凝均為快速解脫型；對氯仿敏感；對pH值3.0、pH值5.0均敏感；1日齡雛鴨腦內(nèi)致病指數(shù)分別為0.59、0.84、1.04；6周齡靜脈接種致病指數(shù)均為0；對13日齡鴨胚的半數(shù)感染量（EID50）分別為：10-5.31/0.1 mL、10-6.5/ 0.1 mL，10-7.79/0.1 mL。表明雞新城疫為中等偏弱毒力毒株，而鴨、鵝新城疫病毒均為中等毒力毒株。

新城疫病毒；生物學(xué)特性；毒力測定

雞新城疫是由雞新城疫病毒（Newcastle dis?ease virus，NDV）引起的一種主要侵害雞、火雞、野禽和觀賞鳥，亦可感染人的高度接觸性、急性、致死性傳染病。以往人們一直認(rèn)為，鵝感染新城疫病毒后一般只帶毒和排毒，但不發(fā)病。自1997以來，鵝發(fā)生新城疫的報道較多，并引起很高的發(fā)病率和死亡率[1]，從而改變了人們認(rèn)為NDV對水禽不致病的觀點(diǎn)。

為了弄清從送檢的疑似新城疫的病死雞、鴨、鵝的腦組織中分離的新城疫病毒的毒力強(qiáng)弱，本文對3株新城疫病毒的毒力及生物學(xué)特性進(jìn)行研究。

1　材料與方法

1.1材料非免疫的13日齡鴨胚180枚，采用血凝抑制試驗(yàn)抽檢其新城疫病毒的抗體效價為0，購自鳳陽武店，在安徽科技學(xué)院畜牧科技園孵化至13日齡；病毒 雞、鴨、鵝新城疫病毒均分別從送檢的疑似新城疫的雞、鴨、鵝的腦組織中分離鑒定得到；9～10日齡SPF雞胚，購自南京藥械廠；1日齡雛鴨50只，購自鳳陽某孵化室，6周齡鴨為購買的1日齡雛鴨經(jīng)隔離飼養(yǎng)獲得。

1.2方法

1.2.1血凝試驗(yàn)按參考文獻(xiàn)[2]方法進(jìn)行。

1.2.2病毒理化特性測定血凝素?zé)岱€(wěn)定性試驗(yàn)參考諸敏等[3]、范根成等[4]方法進(jìn)行；血凝解脫試驗(yàn)參考范根成等[4]、姜平等[2]方法進(jìn)行；氯仿敏感性試驗(yàn)按文獻(xiàn)[1、6]方法進(jìn)行；耐酸性試驗(yàn)按文獻(xiàn)[1]方法進(jìn)行。

1.2.3病毒毒力測定1日齡雛鴨腦內(nèi)致病指數(shù)（ICPI）參考文獻(xiàn)[7]方法進(jìn)行。6周齡鴨靜脈接種致病指數(shù)（IVPI）參考文獻(xiàn)[7]方法進(jìn)行。雞、鴨、鵝新城疫病毒對鴨胚半數(shù)感染量（即EID50）的測定。

按參照文獻(xiàn)[1]的方法進(jìn)行。將病毒液進(jìn)行10倍遞進(jìn)梯度稀釋，即病毒的稀釋倍數(shù)依次為1∶ 10，1∶102，……，至1∶1012，每一稀釋度病毒液接種5枚鴨胚，接種部位為絨毛尿囊腔內(nèi)，每胚接種0.1 mL，另設(shè)對照組，即每枚鴨胚接種0.1 mL生理鹽水。接種后將鴨胚繼續(xù)置于37.5℃孵化，每天上、下午各照蛋1次，棄去24 h內(nèi)死亡的鴨胚，觀察至小鴨出殼，對死亡鴨胚進(jìn)行記錄。死亡鴨胚，置4℃過夜，然后觀察鴨胚病變。

2　結(jié)果

2.1雞、鴨、鵝新城疫病毒的血凝價依次為：29、28、28。

2.2病毒理化特性測定結(jié)果。

2.2.1血凝素?zé)岱€(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1　血凝素?zé)岱€(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

由表1可看出，雞、鵝新城疫病毒的血凝價在56℃，5 min內(nèi)迅速下降，前者在20 min后血凝性完全消失，后者則在40 min后血凝性完全消失；鴨新城疫病毒在56℃，5 min內(nèi)僅下降1個滴度，15 min內(nèi)迅速下降，40 min后血凝性完全消失。以血凝價下降21的最短受熱時間作為該毒株的血凝素?zé)岱€(wěn)定性指數(shù)，所以雞、鴨、鵝新城疫病毒的血凝素?zé)岱€(wěn)定性指數(shù)分別為5、15、15 min。

2.2.2血凝解脫試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2　血凝解脫試驗(yàn)結(jié)果

由表2可以看出，雞、鴨、鵝新城疫病毒在第1次懸浮過夜和第2次懸浮2 h后的血凝價均變?yōu)?，表明3種病毒均不凝集，可判定這3株病毒為快速解脫型。

2.2.3氯仿敏感性試驗(yàn)結(jié)果見表3。

從表3可看出，3株病毒與對照組相比，試驗(yàn)組血凝價均明顯下降，說明雞、鴨源、鵝新城疫病毒均對氯仿敏感。

2.2.4耐酸性試驗(yàn)結(jié)果見表4。

表4　耐酸性試驗(yàn)結(jié)果

由表4可看出，3株病毒經(jīng)pH值5.0、pH值3.0處理后，試驗(yàn)組的血凝價均比對照組明顯下降，表明3株病毒對pH值5.0、pH值3.0均敏感。

2.3病毒毒力測定結(jié)果

2.3.11日齡雛鴨腦內(nèi)致病指數(shù)（ICPI）測定結(jié)果

雞、鴨、鵝新城疫病毒的1日齡雛鴨腦內(nèi)致病指數(shù)分別為0.59、0.84和1.04。

2.3.26周齡鴨靜脈接種致病指數(shù)（IVPI）測定結(jié)果3株新城疫病毒的6周齡靜脈接種致病指數(shù)均為0，接種后小鴨均未發(fā)病。

2.3.3雞、鴨、鵝新城疫病毒對鴨胚的EID50的測定結(jié)果分別為：10-5.31/0.1 mL、10-6.5/0.1 mL和10-7.79/0.1 mL。

2.3.4雞、鴨、鵝新城疫病毒感染鴨胚后，死亡鴨胚的病理變化3株新城疫病毒致死的鴨胚病理變化基本相同：死亡鴨胚的喙、頭、頸出血較嚴(yán)重（呈出血斑），爪出血最嚴(yán)重（基本上都出血），背部彌漫性點(diǎn)狀出血。

接近29日齡死亡的鴨胚，剖檢后可見有大量白色尿酸鹽沉積，而且胚體出血。接種病毒未致死的鴨胚孵出的小鴨，體型較小，發(fā)育不良。

3株新城疫病毒使鴨胚致死的時間集中在第2天至第7天，即接種后36～168 h之間，接種后36 h開始死亡，36～108h之間出現(xiàn)死亡高峰，接種204 h后停止死亡，接種病毒組共孵化出9只小鴨。

另外，5枚接種生理鹽水的對照組鴨胚全部孵出健康小鴨。

3　討論

近些年來，國內(nèi)陸續(xù)報道發(fā)生鴨、鵝副黏病毒病，從而改變了NDV不引起水禽發(fā)病的觀點(diǎn)。本試驗(yàn)從血凝素?zé)岱€(wěn)定性、血凝解脫速度、胰蛋白酶消化、氯仿敏感性及對酸敏感性等方面對雞、鴨、鵝新城疫病毒株進(jìn)行理化特性研究，結(jié)果表明，3株毒株血凝素?zé)岱€(wěn)定性指數(shù)分別為5、15、15 min；血凝均為快速解脫型；對胰蛋白酶、氯仿均敏感；對pH值3.0，pH值5.0均敏感。這些符合新城疫病毒的特性。

雞、鴨、鵝新城疫病毒腦內(nèi)接種1日齡雛鴨致病指數(shù)（ICPI）分別為0.59、0.84、1.04；6周齡靜脈接種致病指數(shù)（IVPI）均為0，表明6周齡鴨對3株新城疫病毒均具有抵抗力。從上述兩項(xiàng)結(jié)果可判定，雞新城疫病毒屬于中等偏弱毒力毒株，鴨、鵝新城疫病毒屬于中等毒力毒株。從3株新城疫病毒對鴨胚的EID50可知，鵝新城疫病毒的致病力最強(qiáng)，鴨新城疫病毒的致病力次之，雞新城疫病毒的致病力最弱，但它們對鴨胚的致病力都很強(qiáng)。

[1]殷震，劉景華.動物病毒學(xué)[M].2版.北京：科學(xué)出版社，1997：743-750，736-766.

[2]姚火春.獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].2版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002：105-106.

[3]諸敏，陳昌.鴿新城疫病毒QL株一些理化及培養(yǎng)特性[J].中國獸藥雜志，2001，35（5）：9-10.

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[6]孫泉云，周錦萍，張?zhí)K華，等.蛋雞新城疫病毒的分離與鑒定[A].中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第五界全國會員代表大會暨第九次學(xué)術(shù)研討會論文集[C].山東省煙臺市2001：609-609.

[7]鄭明球.家畜傳染病學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].3版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001：107-108.

Experimental Research on Virulent Biological Characteristics of thechicken and duck and gooseNewcastlediseasevirus

LU Zhen-xiang1，2，ZHANG Xun-hai1，2，GUO Wei-na1，2，YANG Ping1，XU Yi-qiao1，LIU Chang1，2
（1.Anhui Science and Technology University，Animal Science College，F(xiàn)engyang 233100，China；2.Anhui Key Laboratory of Poultry Infectious Disease Prevention and Control，F(xiàn)engyang 233100，China）

To test NDV from chicken，duck and goose.The biological characteristics of three NDVs were tested by digesting trypsin test，thermostability of haemagglutinin test，Hemagglutinin hot stability test，Hemagglutination free trial of strains to chloro?form，and hydrochloric acid test.Their virulences were analyzed by intracerebral pathogenicity index（ICPI）for one-day-old ducks and intravenous pathogenicity index（IVPI）in 6-week-old ducks，and 13-day-old non-immune infection of duck embryo（EID50）. The haemagglutinin index of NDV from chicken，duck and goose was 29，28，and 28，respectively.Thermostability index of three strains was 5 minutes，15minutes，and 15 minutes at 56℃，respectively.The haemagglutination elution test showed their rapid elut?ing pattern.There were sensitive to choloroform and trypsin，pH3.0 and pH5.0.The intracerebral pathogenicity index（ICPI）for oneday-old chicks was 0.59，0.84，and 1.04，respectively.Intravenoous pathogenicity index（IVPI）in 6-week-old ducks of all the three NDV strains was 0.The duck embryo'EID50 infected by NDV from chicken，duck and goose were10-5.31/0.1 mL，10-6.5/0.1 mL，and 10-7.79/0.1 mL，respectively.chick NDV was moderate to weak strain，but duck and goose NDV were moderate strains.

NDV；biological characteristics；Virulent measure

S852.65+9.5

A

0529-6005（2016）07-0006-02

2015-03-06

國家自然科學(xué)基金（30671556）；安徽科技學(xué)院重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)基金（YZD2004-12）；安徽科技學(xué)院校級重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目（AKZDXK205A04）

路振香（1964-），女，副教授，碩士，主要從事動物微生物學(xué)的教學(xué)與科研工作，E-mail：luzhenxiang2002@126.com