韓佩蓮，游蓉麗（山西振東泰盛制藥有限公司，山西大同037300；山西振東制藥股份有限公司，山西長治04700）

·綜述·

注射用頭孢硫脒細菌內毒素檢查方法學研究

韓佩蓮1，游蓉麗2（1山西振東泰盛制藥有限公司，山西大同037300；2山西振東制藥股份有限公司，山西長治047100）

【摘 要】目的：探討注射用頭孢硫脒細菌內毒素有效檢查方法及效果.方法：依據《中國藥典》（2010版）關于細菌內毒素檢查方法對注射用頭孢硫脒細菌進行檢測，分析頭孢硫脒濃度對內毒素的影響.結果：每1 mg頭孢硫脒所含內毒素含量≤0.075 EU時，可消除鱟試劑對內毒素正常凝集反應的影響.結論：基于《中國藥典》的細菌內毒素檢查方法可行，該方法可實現(xiàn)對頭孢硫脒細菌內毒素含量的控制.

【關鍵詞】注射用頭孢硫脒；細菌內毒素檢查

0　引言

注射用頭孢硫脒為β?內酰胺類抗生素，頭孢菌素類，為白色至微黃色結晶性粉末，幾乎無臭，有引濕性.多用于由敏感菌引起的各類感染、心內膜炎以及敗血癥等［1］.臨用前加滅菌注射用水或氯化鈉注射液適量溶解，再用生理鹽水或5%葡萄糖注射液250 mL稀釋.藥液宜現(xiàn)用現(xiàn)配，配制后不宜久置.偶見治療后血尿素氮、谷丙轉氨酶、堿性磷酸酶升高.少數(shù)患者用藥后可能出現(xiàn)中性粒細胞減少，念珠菌、葡萄球菌等二重感染.對頭孢菌素類抗生素過敏者禁用.有青霉素過敏性休克史者禁忌使用.文獻有報道采用注射用清開靈與注射用頭孢硫脒配合使用治療小兒支氣管肺炎的臨床研究［2］.

本實驗參照“《中國藥典》2010年版細菌內毒素檢查法［3］”和“《中國藥典》2010年版注射劑安全性檢查法指導原則［3］”，探討其在頭孢硫脒細菌內毒素檢查中的可行性及應用價值，旨在為頭孢類藥物細菌內毒素含量控制提供數(shù)據參考.對山西振東泰盛制藥有限公司無菌粉針車間（頭孢線）生產的注射用頭孢硫脒（規(guī)格：1.0 g）依據《中國藥典》提供的檢查手段予以驗證.為確保檢測結果客觀、可靠，我們進行了如下試驗［2-4］：細菌內毒素限值的建立、鱟試劑靈敏度的復核、計算最小有效稀釋濃度（MVC）、供試品干擾預試驗與正式干擾試驗、供試品細菌內毒素檢查等以確定該檢查法的可行性.

注射用頭孢硫脒為無菌粉針制劑，從目前試驗研究來看，僅有細菌內毒素對藥品質量及安全性造成威脅，除此外無其他途徑引起雜質生成.鑒于目前尚無關于注射液頭孢硫脒細菌內毒素檢查方法的文獻報道，關于頭孢硫脒與其內毒素濃度的相關性，甚至頭孢類藥物療效及安全性的影響仍在持續(xù)研究.本研究應用《中國藥典》提供的有關頭孢類細菌內毒素檢查方法對注射用頭孢硫脒進行試驗研究，取得有價值的成果，現(xiàn)報道如下.

1　資料和方法

1.1一般資料

1.1.1試劑 鱟試劑①規(guī)格：0.25 EU/mL?0.5 mL/支，批號：1405232，生產單位：湛江安度斯生物有限公司；②規(guī)格：0.125 EU/mL?0.5 mL/支，批號：1410302，生產單位：湛江博康海洋生物有限公司；③規(guī)格：0.06 EU/mL?0.5 mL/支，批號：1403120，生產單位：湛江博康海洋生物有限公司.

細菌內毒素工作標準品①規(guī)格：80 EU/支，批號：150601-201478，生產單位：中國食品藥品檢定研究院；②規(guī)格：10 EU/支，批號：1408170，生產單位：湛江博康海洋生物有限公司；檢查用水規(guī)格：5 mL/支，批號：1409040，生產單位：湛江博康海洋生物有限公司.

1.1.2供試品 注射用頭孢硫脒，規(guī)格：1.0 g，批號：1501051、1501061、1501091，生產單位：山西振東泰盛制藥有限公司.

1.2方法

1.2.1供試品細菌內毒素限值的確定［3］供試品細菌內確定限值：每1 mg頭孢硫脒中含內毒素的量應小于0.075 EU.

1.2.2鱟試劑靈敏度的復核［2-3］以鱟試劑靈敏度的標示值（λ）為依據，將符合國家標準的細菌內毒素進行水溶解，于漩渦混合器攪勻15 min，制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四個濃度的細菌內毒素標準溶液.取復溶后的鱟試劑加入0.1 mL不同濃度的細菌內毒素標準溶液，平行做4管；陰性對照加入0.1 mL細菌內毒素檢查用水，平行2管.再緩緩搖勻溶液并密封管口，垂直置入溫度為37℃左右的恒溫器中，恒溫60 min.

1.2.3最小有效稀釋濃度（MVC）的計算［3-4］MVC=λ/L（L為本品的細菌內毒素限值，λ為鱟試劑標示靈敏度，通常為0.03～0.5 EU/mL），則本品對應的MVC為0.4～7 mg/mL.

1.2.4供試品干擾預試驗 取供試品適量（批號：1501051），制備各系列干擾預試驗溶液（表1）.

表1　干擾預試驗溶液的制備［5］

1.2.5供試品正式干擾試驗 加BET水溶解并稀釋供試品至所需濃度（0.8 mg/mL），將內毒素標準品制成0.5、0.25、0.125、0.0625、0.031 EU/mL的系列濃度，4個重復.

2　結果

2.1鱟試劑靈敏度的復核 3批次鱟試劑用細菌內毒素工作標準品檢查λc均在2λ～0.5λ之間［6-8］，表明鱟試劑靈敏度復核試驗符合規(guī)定（表2）.

2.2供試品干擾預試驗 預試驗結果表明，注射用頭孢硫脒在0.8 mg/mL及其以下濃度時對鱟試劑的凝集反應無增強或抑制作用（表3）.

2.3正式干擾試驗 應用2個廠家的鱟試劑對供試品的干擾情況表明，本品稀釋至0.8 mg/mL對鱟試劑的凝集反應無增強或抑制作用（表4、5）.

2.4供試品細菌內毒素檢查 按照劉海疆等［9］的方法對該廠家共3批注射用頭孢硫脒進行限量檢查，結果表明，注射用頭孢硫脒按限值0.075 EU/mg進行細菌內毒素檢查，3批供試品結果均符合規(guī)定（表6）.

表2　鱟試劑靈敏度復核

表3　預試驗結果（供試品批號：1501051）

表4　干擾試驗結果（湛江安度斯生物有限公司Lot No.1405232，λ=0.25EU/mL）

表5　干擾試驗結果（湛江安度斯生物有限公司Lot No.1405232，λ=0.25 EU/mL）

表6　注射用頭孢硫脒內毒素檢查結果（湛江博康海洋生物有限公司Lot No.1403120，λ=0.06 EU/mL）

4　討論

通過鱟試劑靈敏度復核、預試驗、正式干擾試驗，結果顯示注射用頭孢硫脒在0.8mg/mL對鱟試劑的凝集反應無增強或抑制作用［9-10］；注射用頭孢硫脒進行細菌內毒素檢查方法可行.

【參考文獻】

［1］陳小珍，謝冬梅，王 群.注射用頭孢硫脒細菌內毒素檢查方法探討［J］.中國現(xiàn)代藥物應用，2012，6（15）：10-11.

［2］王婷婷，樸晉華.注射用鹽酸米托蒽醌細菌內毒素檢查方法學研究［J］.山西醫(yī)科大學學報，2007，38（3）：240-242.

［3］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2010年版）二部〔S〕.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010，411.

［4］劉海疆，陳志勇，田 冰，等.長春西汀氯化鈉注射液細菌內毒素檢查法的研究［J］.黑龍江醫(yī)學，2014，26（1）：108-110.

［5］吳 志，張仁劍，閆 明，等.丙泊酚注射液細菌內毒素檢查法研究［J］.中國醫(yī)藥導報，2012，9（6）：36-37.

［6］趙 昕，賀康洪，趙文軍，等.碘化鈉注射液細菌內毒素檢查方法的研究［J］.實用藥物與臨床，2014，17（10）：1295-1297.

［7］劉志武，武會芝，王 霞，等.注射用埃索美拉唑鈉無菌及細菌內毒素檢查方法學的研究［J］.中國醫(yī)藥指南，2014，12（22）：10-12.

［8］國 明，祝清芬，鄭力真.無菌、微生物限度及細菌內毒素檢查方法學驗證中常見問題及分析［J］.中國藥品標準，2008，9（1）：46-49.

【中圖分類號】R927

【文獻標識碼】A

文章編號：2095?6894（2016）06?61?03

收稿日期：2016-04-06；接受日期：2016-04-23

作者簡介：韓佩蓮.本科，主管藥師.研究方向：藥物分析技術. E?mai1：sxtshp1@163.com