董宏博 賴紅偉 肖 簫 曹宏梅吉林醫(yī)藥學(xué)院化學(xué)教研室董宏博：（1973-）女（漢），副教授，碩士，研究方向：電化學(xué)分析，吉林醫(yī)藥學(xué)院，化學(xué)教研室。

?

槐花中槲皮素快速測(cè)定方法的比較

董宏博 賴紅偉 肖 簫 曹宏梅
吉林醫(yī)藥學(xué)院化學(xué)教研室
董宏博：（1973-）女（漢），副教授，碩士，研究方向：電化學(xué)分析，吉林醫(yī)藥學(xué)院，化學(xué)教研室。

本文針對(duì)中藥主要成分的測(cè)定方法進(jìn)行比較討論，氯化鋁比色法，催化動(dòng)力學(xué)光度法，以及差非常常用的測(cè)定方法，通過對(duì)精密度、回收率等一系列的比較論證，提出更為簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的測(cè)定方法的觀點(diǎn)。在行業(yè)中起到為中藥的檢測(cè)與發(fā)展提供一定的參考和借鑒作用。

點(diǎn)評(píng)人：趙文秀，男，滿族，教授，碩士，吉林醫(yī)藥學(xué)院分析教研室。

link

評(píng)估值

40萬

appraisement

行業(yè)曲線

industry

point

據(jù)報(bào)道，槲皮素具有祛痰、止咳、抗炎、降血壓、擴(kuò)張冠脈、降血脂、抗心律失常、抗血小板聚集、抗氧化、抗腫瘤等廣泛的藥理作用。對(duì)槲皮素含量測(cè)定的方法諸多，本實(shí)驗(yàn)采取氯化鋁比色法、催化動(dòng)力學(xué)、差分脈沖伏安法測(cè)定槲皮素含量，篩選快速測(cè)定槲皮素的最佳方案。

儀器與試劑

紫外分光光度儀（北京瑞利分析儀器公司）；電化學(xué)工作站（南京蘭力科儀器有限公司）。

槲皮素（國(guó)藥集團(tuán)）；氯化鋁、溴酸鉀、甲基紅、乙酸鈉、乙酸、硫酸、石油醚、乙醇均為分析純?；被ㄙ徲谒幏俊?/p>

實(shí)驗(yàn)方法

槲皮素樣品溶液制備

精密稱取85 ℃干燥2 h 的槐花粉末2.0130g，置索氏提取器中， 加石油醚100ml， 加熱回流3h， 棄去石油醚，加入70 %乙醇80 ml，2%的鹽酸20ml，回流提取3 h。將提取液趁熱減壓過濾，濾液轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，用70%乙醇定容，作為供試樣品溶液。

槲皮素對(duì)照品溶液制備

精確稱取槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品0.0210g，加入70 %乙醇定容到100mL，即得0.210 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

三氯化鋁比色法

精密量取對(duì)照品溶液0.6ml和樣品溶液0.3ml，分別置于25ml比色管中，加入30 %乙醇使體積到10 ml；加入1%氯化鋁溶液5 mL、pH=6的醋酸-醋酸鈉緩沖液5ml，用30 %乙醇定容，于40℃恒溫水浴加熱10min，冷卻至室溫后測(cè)定。以不加槲皮素為空白，在300nm～600nm 范圍掃描， 得紫外吸收光譜，結(jié)果見圖1和圖2。標(biāo)準(zhǔn)溶液在428nm處有最大吸收，而樣品溶液在417nm處有最大吸收，二者基本一致，說明此方法可行。

催化動(dòng)力學(xué)

準(zhǔn)確稱取槲皮素對(duì)照品0.0200g，配制成200 ug/ml的儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確移取0.5ml儲(chǔ)備液，定容至100ml，得到1ug/ml的槲皮素標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

在25ml比色管中，加入0.02%甲基紅1ml，1.0mol/ L硫酸0.5ml，用水稀釋至15ml處，加入0.5ml的槲皮素溶液（非催化體系不加槲皮素溶液），再加入0.025mol/L溴酸鉀溶液0.4ml，用水定容。于80℃的恒溫水浴加熱 8 min后，流水冷卻5 min以終止反應(yīng)。以蒸餾水作參比，在400～600nm范圍掃描，繪制吸收曲線如圖3所示。

1.甲基紅+H2SO4

2.甲基紅+H2SO4+KBrO3

3.甲基紅+H2SO4+KBrO3+標(biāo)準(zhǔn)溶液

4.甲基紅+H2SO4+KBrO3+樣品溶液

曲線2說明在硫酸溶液中，溴酸鉀能氧化甲基紅褪色；曲線3說明槲皮素起催化劑的作用，促進(jìn)了溴酸鉀氧化甲基紅褪色；曲線4說明供試品溶液中槲皮素促進(jìn)了溴酸鉀氧化甲基紅褪色。從四條曲線可以看出，各體系幾乎均在518.00nm波長(zhǎng)處有最大吸收，說明此方法可行。

差分脈沖伏安法

精確稱取槲皮素對(duì)照品0.0310g，用70%乙醇溶解定容至100ml。分別取槲皮素標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5ml和樣品溶液1ml，加入10ml的pH=4.6的NaAc-HAc緩沖液和1ml 的1mol/L NaCl于50ml容量瓶中，用30%乙醇定容。以掃速0.1V/s進(jìn)行差分脈沖伏安法測(cè)定，見圖4和圖5。標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰電位為0.34V，而樣品溶液的峰電位為0.48V，有些偏離，這是可能由于樣品成分復(fù)雜所致。

圖1 三氯化鋁比色法測(cè)定槲皮素標(biāo)準(zhǔn)液的掃描圖

圖2 三氯化鋁比色法測(cè)定槐花樣品液的掃描圖

圖3 吸收光譜曲線

圖4 標(biāo)準(zhǔn)品差分脈沖圖

圖5 提取液差分脈沖圖

結(jié)果與分析

標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制

三氯化鋁比色法：移取對(duì)照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml，按2.3方法，在428nm處分別測(cè)其吸光度，分別為：0.250、0.371、0.480、0.605、0.704。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，以吸收度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程：y=0.0687x+0.0196，相關(guān)系數(shù)R2=0.9992，線性范圍（3.36～10.08μg/ml）。

催化動(dòng)力學(xué)：移取槲皮素標(biāo)準(zhǔn)液0、1.0ml、1.5ml、2.0ml、3.0ml、3.5ml，按2.4方法配制標(biāo)準(zhǔn)系列，在最大吸收波長(zhǎng)518nm處測(cè)其吸光度：0.978、0.799、0.699、0.621、0.481、0.401，得到非催化體系A(chǔ)○和催化體系的吸光度A，計(jì)算吸光度差值△A（△A=A○-A）。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸收度差值△A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程：y=3.7337x+0.0532，相關(guān)系數(shù)R2=0.9994，線性范圍（0.04～0.14μg/ml）。

差分脈沖伏安法：移取槲皮素標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml，測(cè)定峰電流分別為：0.6323、0.8491、2.1000、2.8982、3.8725微 安。 以 濃 度 為橫坐標(biāo)，峰電流為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程：y=0.1536x+0.0702，相關(guān)系數(shù)R2=0.9928，線性范圍（3.1～24.8μg/ml）。

樣品含量測(cè)定

三氯化鋁比色法：移取樣品溶液0.3ml3份，測(cè)得吸光度為0.701、0.698、0.699，計(jì)算槲皮素的平均含量為4.10%，RSD為0.22%。

催化動(dòng)力學(xué)：依照“2.1”項(xiàng)方法制備的樣品溶液100ml，再吸取0.5ml定容于100ml容量瓶中，制得供試品溶液。移取樣品溶液0.3ml3份，測(cè)得吸光度為0.692、0.695、0.697，計(jì)算槲皮素的平均含量為3.06%，RSD為1.09%。

差分脈沖伏安法：移取樣品溶液1.0ml3份，測(cè)得峰電流為1.6323、1.6822、1.6691微安，計(jì)算槲皮素的平均含量為2.61%，RSD為3.65%。

回收率

三氯化鋁比色法：移取樣品溶液0.1ml3份，分別加入0.2、0.4、0.6ml槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，計(jì)算平均回收率為99.68%，見表1。

催化動(dòng)力學(xué)：移取樣品溶液0.2ml3份，分別加入1.0、2.0、3.0ml槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，計(jì)算平均回收率為95.67%，見表2。

表1 三氯化鋁比色法回收率

表2 催化動(dòng)力學(xué)回收率

差分脈沖伏安法：移取樣品溶液1.0ml3份，分別加入0.5、1.0、2.0ml槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，測(cè)得峰電流為2.0483、2.5021、3.4510微安，計(jì)算平均回收率為90.47%，見表3。

表3 差分脈沖伏安法回收率

討論

三氯化鋁可與槲皮素的羥基作用生成絡(luò)合物，也可與A環(huán)或B 環(huán)上的鄰二酚羥基作用生成絡(luò)合物。發(fā)生顯色反應(yīng)后，槐花提取液在417nm處有明顯吸收，與標(biāo)準(zhǔn)溶液的最大吸收波長(zhǎng)基本一致。

在稀硫酸介質(zhì)中， 槲皮素對(duì)溴酸鉀氧化甲基紅褪色反應(yīng)有明顯催化作用，此方法適合于測(cè)定痕量槲皮素。

槲皮素在玻碳電極表面發(fā)生了電化學(xué)反應(yīng)，是發(fā)生在B環(huán)上的3′，4′雙羥基的二電子和二質(zhì)子反應(yīng)，可能被氧化為對(duì)應(yīng)的鄰醌。標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液的峰電位有些差異。

表4 槐花中槲皮素測(cè)定方法的考察

從表4中可以看出，三種方法均適合測(cè)定槲皮素的含量。對(duì)比三種測(cè)定方法，三氯化鋁比色法更適于測(cè)定槐花中槲皮素的含量，該方法具有操作簡(jiǎn)單方便、精密度好、含量高，專屬性較強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)， 可為槐花中槲皮素研究和應(yīng)用提供參考。

10.3969/j.issn.101- 8972.2016.12.019