田志祥，王　偉，劉　藝，韓春超山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南250300

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不同生長(zhǎng)月份女貞子中特女貞苷含量的動(dòng)態(tài)差異

田志祥，王偉△，劉藝，韓春超
山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東濟(jì)南250300

目的：探討不同月份女貞子中特女貞苷的含量差異。方法：采收10～12月份的女貞子，陰干后，分別稱取20 g女貞子，先經(jīng)石油醚脫脂2次，0.5 h/次，然后以80%乙醇提取2次，3 h/次，合并提取液并濃縮，將濃縮后的提取液經(jīng)D-101大孔樹脂柱純化，分離得到目標(biāo)成分，進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：11月份女貞子中特女貞苷含量達(dá)到最高。

女貞子；特女貞苷；含量差異

女貞子（Fructus Ligustri Lucidi）是木犀科常綠喬木女貞Liustrum lucidum Ait.的干燥成熟果實(shí)。初始記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，上品，為扶正固本藥。其味甘苦，性涼，歸肝腎經(jīng)，有滋補(bǔ)肝腎和明目烏發(fā)之功效，用于治療肝腎陰虛、眩暈耳鳴、腰膝酸軟、須發(fā)早白、目暗不明、內(nèi)熱消渴、骨蒸潮熱等癥［1］。因其有保護(hù)肝臟，降血壓，降血糖，抗病毒，消炎等功效而越來越受到人們的重視。

女貞子化學(xué)成分有醚萜類、揮發(fā)油、苯乙醇類、三萜類、黃酮類、多糖、氨基酸、脂肪酸及微量元素等，而在女貞子中分離得到的主要化合物是三萜類和環(huán)烯醚萜苷類［2-3］。女貞子中的一種活性有效成分——特女貞苷具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)和抗氧化作用［4-5］，可以與亞適量刀豆球蛋白A（Con A）協(xié)同提高正常鼠脾T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，并能顯著提高由環(huán)磷酞胺抑制的自然殺傷細(xì)胞協(xié)膠的殺傷功能，減輕由地塞米松引起的N K活性低下的作用［6］。特女貞苷結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1　特女貞苷的結(jié)構(gòu)式

2010版的藥典中［1］記載女貞子為成熟果實(shí)，冬季時(shí)采收。經(jīng)過查閱文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)女貞子的果實(shí)采收期為10～12月份［7］。在現(xiàn)有文獻(xiàn)中并沒有關(guān)于采收月份與特女貞苷含量之間關(guān)系的報(bào)道。本研究比較女貞子中特女貞苷在10～12不同月份的含量差異。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1植物材料及其樣品的制備供試植物為野生大葉女貞，分別于10～12月底，采其果實(shí)部分，于室溫暗處干燥至恒重。

1.1.2使用儀器和試劑UV9000紫外分光光度計(jì)（上海元析儀器有限公司）；萬分之一天平（上海菁海儀器有限公司FA2004N型）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮RE-52）；二兩裝高速中藥粉碎機(jī)（瑞安市永歷制藥機(jī)械有限公司）；層析柱（上海禾汽玻璃儀器有限公司）；D-101大孔樹脂（安徽三星樹脂科技有限公司）；無水乙醇（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；石油醚（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；GF-254薄層硅膠（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；特女貞苷標(biāo)準(zhǔn)品純度為98%（南京森貝伽生物科技有限公司）；蒸餾水。

1.2特女貞苷的提取及分離

1.2.1特女貞苷的提取精確稱量10、11、12月份的女貞子各20.00g共3份，粉碎后用石油醚在70℃下脫脂2次，0.5h/次，濾去石油醚，將女貞子粉末取出，揮干石油醚。然后用10倍量80%乙醇提取，提取條件為：水浴熱提，提取溫度定為70℃，提取2次，3h/次［8］。合并2次提取液，在50℃下減壓濃縮，干燥，得到特女貞苷粗提取物。1.2.2特女貞苷的分離將10、11、12月份的特女貞苷粗提取物各用100mL蒸餾水溶解，將粗提物水溶液分別經(jīng)預(yù)先處理好的D-101大孔樹脂柱分離純化。先用蒸餾水沖至洗脫液無色且mol ish反應(yīng)為陰性；接著用400m L40%乙醇洗脫，除雜；最后用70%乙醇洗脫，收集洗脫液。

1.3特女貞苷的含量鑒別方法采用薄層色譜法比較女貞子提取液上柱后特女貞苷含量的差異。

1.3.1硅膠G薄層板的制備使用表面光滑平整的5cm×10cm的玻璃板，洗凈晾干。把硅膠G F254與0.3%的羧甲基纖維素鈉水溶液按1∶3的比例在研缽中調(diào)勻后，將研好的漿液傾倒于玻璃板上，形成硅膠薄層板，室溫下晾干，在105℃下活化半小時(shí)以上后，即可使用。

1.3.2展開劑與顯色劑使用乙酸乙酯-甲醇（3∶1）為展開劑；使用10%硫酸乙醇溶液作為顯色劑。

1.3.3比較方法將收集到的大孔樹脂洗脫液濃縮5m L進(jìn)行點(diǎn)板，并用展開劑分離，待展開劑揮干后用顯色劑顯色。

1.4紫外法測(cè)定比較特女貞苷的含量

1.4.1對(duì)照品溶液的制備精密稱取0.01g對(duì)照品，用蒸餾水溶解并定容至200mL。

1.4.2測(cè)定對(duì)照品吸光度查文獻(xiàn)得知特女貞苷的最大吸收波長(zhǎng)為224nm［9］，可通過紫外分光光度計(jì)測(cè)定出對(duì)照品的吸光度。

1.4.3測(cè)定大孔樹脂柱后浸膏的重量將收集到的大孔樹脂洗脫液蒸干，測(cè)浸膏重量。

1.4.4測(cè)定樣品的吸光度將浸膏用蒸餾水溶解并定容至5000mL，通過紫外分光光度計(jì)測(cè)定樣品的吸光度。

1.5高效液相法比較特女貞苷含量差異采用agilent C18（4.6mm×150mm，5m）色譜柱，流動(dòng)相為乙腈∶水=32∶68，檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm，流速1m L/min，對(duì)特女貞苷進(jìn)行檢測(cè)。

2　結(jié)果

2.1薄層色譜法測(cè)定結(jié)果由薄層色譜圖可知，11月份的特女貞苷的量達(dá)到最大，10月份次之，12月份最少，見圖2。

圖2　特女貞苷薄層圖

2.2紫外法對(duì)照品的吸光度為0.475，10月份樣品的吸光度為0.484，11月份樣品的吸光度為0.541，12月份樣品的吸光度為0.441。樣品濃度=標(biāo)準(zhǔn)品的濃度×樣品吸光度/標(biāo)準(zhǔn)品吸光度，依據(jù)該公式分別求得其濃度。接著用（濃度×溶解的體積）/浸膏重量，得上柱后樣品的含量，見表1、圖3。

表1　不同月份女貞子中特女貞苷含量（紫外法）

圖3　不同月份女貞子中特女貞苷含量柱狀圖（紫外法）

2.3高效液相色譜圖由外標(biāo)法算得10月份女貞子中特女貞苷的含量為36.6%，11月份女貞子中特女貞苷的含量為53.2%，12月份女貞子中特女貞苷的含量為23.9%，見圖4—8。

圖4　 10月份女貞子測(cè)得特女貞苷的色譜圖

圖5　 11月份女貞子測(cè)得特女貞苷的色譜圖

圖6　 12月份女貞子測(cè)得特女貞苷的色譜圖

圖7　特女貞苷對(duì)照品的高效液相圖

圖8　不同月份女貞子中特女貞苷含量比較（高效液相結(jié)果）

3　討論

藥典收錄的中藥材女貞子在生長(zhǎng)和成熟的過程中，其有效成分之一——特女貞苷的含量，除了受到外界環(huán)境的影響和自身遺傳因子的調(diào)控外，還可能受到加工以及采收的影響，采收期為影響其含量的重要因素。本研究通過薄層色譜法、紫外分光光度法、高效液相色譜法對(duì)不同月份的女貞子中特女貞苷的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果準(zhǔn)確，靈敏度高。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，女貞子中的特女貞苷含量在11月份達(dá)到最高，隨著果實(shí)的成熟反而呈現(xiàn)緩慢下降的趨勢(shì)，通過測(cè)定10～12月份女貞子中特女貞苷含量，得出10～12月份的女貞子中特女貞苷含量從高到低為11月＞10月＞12月。原因可能是10月份的女貞子未達(dá)到最佳時(shí)期，而由于特女貞苷的光不穩(wěn)定性，在12月后，特女貞苷的含量有所降低。由于僅靠女貞子中特女貞苷一個(gè)成分的變化來確定女貞子的采收季節(jié)，具有一定的局限性。但是，鑒于藥典中以特女貞苷這一有效成分為檢測(cè)指標(biāo)，因此本研究能為女貞子的最佳采收期提供一定的依據(jù)?？梢猿醪酱_定，由于11月份女貞子中特女貞苷含量達(dá)到最高，女貞子的最佳采收期應(yīng)為11月份。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:43.

［2］黃新蘋，王武朝.中藥女貞子的化學(xué)成分研究進(jìn)展［J］.國際藥學(xué)研究雜志，2011，38（l）:47-51.

［3］張興輝，石力夫.中藥女貞子化學(xué)成分研究（1）［J］.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，25（3）：333-334.

［4］Guo N1，Yu Y，Ablajan K，et al.Seasonal var iations in metabol i te prof i l ing of the f ruits of l igust rum lucidum Ai t［J］.Rapid Commun Mass Spec t rom，2011，25（12）:1701-1714.

［5］He ZD，But PPH，Chan TW，et al.Antioxidative glucosides f rom the f rui ts of Ligustrum lucidum［J］.Chem Pharm Bul l（Tokyo），2001，49（6）:780-784.

［6］蔡漆，石力夫，胡晉紅，等.特女貞甙體外對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和自然殺傷細(xì)胞活性的影響［J］.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1995，19（1）:76-78.

［7］戴啟金，楊林，朱正普.女貞子綜合利用及栽培技術(shù)［J］.林業(yè)實(shí)用技術(shù)，2005（6）:38-40.

［8］He ZD，Dong H，Xu HX，et al.Secoiridoid consti tuents f rom the f ruits of ligustrum lucidum［J］.Phytochemistry，2001，56（4）：327-330.

［9］張學(xué)蘭，侯杰，李慧芬，等.炮制對(duì)女貞子中特女貞苷含量的影響［J］.中藥材，2009，32（4）：498-500.

Dynamic Differencesof the Contentsof Specnuezhenide in NvZhenZi in DifferentGrowth Months

TIAN Zhixiang，WANGWei△，LIU Yi，HAN Chunchao
Pharmacy School of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250300，China

Objective:To study the contentsofspecnuezhenide in NvZhenZi（Fructus Ligustri Lucidi）in differ-entgrow thmonths.Methods:NvZhenZi grew from Octomber to December were collected and dried in the shade，20g NvZhenZi wasweighed，degreased with petroleum ether twice，30min every time，extracted with 80%ethanol twice，threehourseach time.The extractswere concentrated，the concentrated extractwaspurified by D-101macroporous resin column to obtain the target ingredients，contents of the the ingredientswere determined.Results:The contentsof specnuezhenide contained in NvZhenZi grew in November reach thehighest.

NvZhenZi；specnuezhenide；contentdifference

R284.1

A

1004-6852（2016）03-0037-04

2015-01-27

田志祥（1991—），男，在讀碩士研究生。研究方向：中藥活性物質(zhì)與新劑型。

△王偉（1978—），男，博士學(xué)位，講師。研究方向：中藥制劑。