郭曄/中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所王秀敏 侯曉礁 秦俊杰/北京生泰爾科技股份有限公司馬志軍 宋彥軍 劉曉冬/北京市動物疫病預(yù)防控制中心

黃芪多糖粉對犬瘟熱和細(xì)小病毒抗體效價影響的研究

郭曄/中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所
王秀敏 侯曉礁 秦俊杰/北京生泰爾科技股份有限公司
馬志軍 宋彥軍 劉曉冬/北京市動物疫病預(yù)防控制中心

本研究開展了黃芪多糖粉對犬瘟熱、細(xì)小病毒二聯(lián)活疫苗免疫效果的影響試驗，本實驗的目的旨在觀察黃芪多糖粉對犬瘟熱、細(xì)小病毒二聯(lián)活疫苗免疫效果的影響，以評價黃芪多糖粉對犬臨床的有效性。

一、試驗材料

（一）試驗藥品

黃芪多糖粉，由愛迪森（北京）生物科技有限公司提供，生產(chǎn)批號：1208041，產(chǎn)品批準(zhǔn)文號：獸藥字（2011）010125236。

（二）試驗動物

門診進(jìn)行免疫的健康犬，雌雄不限，品種不限，其中未做任何免疫的幼犬共30只，已免疫的成年犬10只。

（三）疫苗

Nobivac? DHPPi犬瘟熱、細(xì)小病毒病二聯(lián)活疫苗，由荷蘭英特威國際有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：A082A01；Nobivac? DHPPi犬瘟熱、傳染性肝炎、細(xì)小病毒病、副流感四聯(lián)活疫苗，由荷蘭英特威國際有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：A369B01；Nobivac? 稀釋液，由荷蘭英特威國際有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：C383001，用于稀釋凍干的Nobivac? DHPPi犬活疫苗；用疫苗稀釋液稀釋后，每只接種1頭份。

（四）細(xì)胞

VERO細(xì)胞，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

（五）陰、陽性血清

犬瘟熱病毒（CDV）血清為本實驗室自制高免血清，其中和抗體的效價達(dá)1∶512，CDV陰性血清為實驗室保存的健康犬血清。

（六）主要試劑

DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清，購自邁晨科技（北京）有限公司；青霉素、鏈霉素、谷氨酰胺、1 ml注射器、5 ml注射器、1 ml離心管，25 cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板、96孔V型血凝板，均購自北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限公司。

豬紅細(xì)胞懸液：從健康豬頸靜脈采血10～20 ml，與4倍量的阿氏液混勻，置于4℃冰箱保存。使用時先用0.015 mol/L pH6.5的PBS稀釋液將保存的豬紅細(xì)胞離心洗滌3次，最后1次以3000 rpm離心10 min，棄上清液，取紅細(xì)胞1 ml，加PBS稀釋液100 ml，再加經(jīng)56℃30 min滅活的牛血清白蛋白0.1g （防止豬紅細(xì)胞發(fā)生自凝），即為1%豬紅細(xì)胞懸液。

其余化學(xué)試劑均為分析純。

（七）主要試驗儀器

倒置顯微鏡（Olympus），高速臺式離心機(jī)（Sigma公司），CO2培養(yǎng)箱（SANYO），恒溫水浴鍋（北京醫(yī)療設(shè)備廠）。

二、試驗方法

（一）分組與給藥方法

將門診進(jìn)行免疫的健康犬按入院免疫順序編號，分為2組，試驗1組（奇數(shù)號，即黃芪多糖粉組），試驗2組（偶數(shù)號，即對照組），每組20只。免疫與給藥方法見表1。

（二）觀察指標(biāo)

1.犬瘟熱中和抗體效價。于幼犬首免的第30天和成年犬免疫的第30天時，對其進(jìn)行無菌靜脈采血，以3 000 rpm離心10 min分離血清，將血清56℃滅活30 min，采用固定病毒稀釋血清法測定血清CDV的中和抗體效價，具體操作步驟同前所述。

表1　免疫與給藥方法

2.犬細(xì)小病毒抗體效價。于幼犬首免的第30天和成年犬免疫的第30天時，對其進(jìn)行無菌靜脈采血，以3 000 rpm離心10 min分離血清，將血清56℃滅活30 min，采用HA-HI試驗測定血清細(xì)小病毒（CPV）的抗體效價，具體操作步驟同前所述。

（三）統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)以SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，結(jié)果用抗體幾何平均滴度（GMT）表示，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

三、試驗結(jié)果

（一）犬瘟熱中和抗體檢測結(jié)果

幼犬首免第30天犬瘟熱抗體效價的檢測結(jié)果見表2，由表2可知黃芪多糖粉組和對照組犬瘟熱抗體的幾何平均滴度分別為1∶761和1∶681，差異顯著（P＜0.05）；成年犬免疫30 d血清犬瘟熱抗體效價的檢測結(jié)果見表3，由表3可知黃芪多糖粉組和對照組犬瘟熱抗體的幾何平均滴度分別為1∶762和1∶688，差異顯著（P＜0.05）。

表2　幼犬犬瘟熱中和抗體檢測結(jié)果

表3　成年犬犬瘟熱中和抗體檢測結(jié)果

（二）犬細(xì)小病毒抗體檢測結(jié)果

幼犬首免第30天細(xì)小病毒抗體效價的檢測結(jié)果見表4，由表4可知黃芪多糖粉組和對照組犬細(xì)小病毒抗體的幾何平均滴度分別為1∶724和1∶537，差異顯著（P＜0.05）；成年犬免疫30 d血清細(xì)小病毒抗體效價的檢測結(jié)果見表5，由表5可知黃芪多糖粉組和對照組細(xì)小病毒抗體的幾何平均滴度分別為1∶891和1∶676，差異顯著（P＜0.05）。

表4　幼犬細(xì)小病毒抗體檢測結(jié)果

表5　成年犬細(xì)小病毒抗體檢測結(jié)果

四、討論

綜上所述，從幼犬的抗體檢測結(jié)果看，黃芪多糖粉組犬瘟熱抗體和細(xì)小病毒抗體效價均顯著高于對照組；從成年犬的抗體檢測結(jié)果看，黃芪多糖粉組犬瘟熱抗體和細(xì)小病毒抗體效價均顯著高于對照組。表明無論幼犬或成年犬，均于免疫當(dāng)天以0.1 g/kg·bw劑量喂服黃芪多糖粉，每天1次，連續(xù)6 d，可提高抗犬瘟熱病毒抗體和抗細(xì)小病毒抗體的效價。

五、結(jié)論

于免疫當(dāng)天開始喂服0.1 g/kg·bw的黃芪多糖粉，每天1次，連續(xù)6 d，可增強(qiáng)免疫應(yīng)答，提高抗犬瘟熱病毒抗體和抗細(xì)小病毒抗體的效價。

（略）