李原，李凡（.浙江省醫(yī)療器械研究所，杭州 30009； .浙江省藥品認證檢查中心，杭州 30009）

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毛細管氣相色譜法測定醫(yī)用可吸收結(jié)扎夾單體乙交酯

李原1，李凡2
（1.浙江省醫(yī)療器械研究所，杭州 310009； 2.浙江省藥品認證檢查中心，杭州 310009）

建立內(nèi)標-氣相色譜法定性定量分析醫(yī)用可吸收結(jié)扎夾中乙交酯單體殘留的方法。以六氟異丙醇為溶劑，在磁力攪拌下充分溶解樣品。采用HP-5毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）為分離柱，檢測器為FID。進樣口溫度為180℃，檢測器溫度為300℃；采用程序升溫，起始溫度為80℃，以10℃/min升至170℃，保持2 min。在選擇的色譜條件下，乙交酯和內(nèi)標物癸內(nèi)酯得到良好的分離。乙交酯線性范圍為0.03～0.15 mg/mL，線性相關(guān)系數(shù)r=0.999 1，檢出限為0.903 μg/mL。測定結(jié)果的相對標準偏差為1.06%（n=6），加標回收率為92.5%～112.7%。該方法樣品前處理簡單，重現(xiàn)性好，分離效率高，可作為醫(yī)用可吸收結(jié)扎夾殘留乙交酯單體的質(zhì)量控制方法。

毛細管氣相色譜法；乙交酯；可吸收結(jié)扎夾；癸內(nèi)酯

可吸收結(jié)扎夾與施夾鉗配套使用，在臨床上主要用于腹腔鏡膽囊切除術(shù)，隨著科技的發(fā)展和進步，可吸收結(jié)扎夾會逐漸取代腹部手術(shù)及婦產(chǎn)科手術(shù)中常用的金屬鈦夾，避免由于金屬鈦夾對血管組織的損壞，且其生物相容性更優(yōu)，減少了術(shù)后局部炎癥反應(yīng)、瘢痕形成等風險。另外，可吸收結(jié)扎夾具有使用方便，結(jié)構(gòu)簡單，容易清洗、消毒等特點［1-8］，但作為一種新型高科技產(chǎn)品應(yīng)用于臨床的長期作用尚需進一歩觀察?？晌战Y(jié)扎夾一般由人工合成可吸收聚脂材料制成，合成工藝多以乙交酯單體為原料經(jīng)開環(huán)聚合制得［9］，例如聚乙交酯（PGA），又名聚羥基乙酸，是一種高結(jié)晶、可生物降解的脂肪族聚合物，降解速度快，主要用于可吸收結(jié)扎夾、手術(shù)縫合線等領(lǐng)域。但PGA樣品可能殘存未反應(yīng)完全的乙交酯，雖然乙交酯本身無毒性，但其在PGA中的殘留會影響PGA的緩控釋效果［10］，故需對其單體殘留量加以檢測和控制。目前，測定交酯類單體的方法主要有氫核磁法、光度法、紅外光譜法和氣相色譜法［11-15］，其中氫核磁法、光度法、紅外法均很難準確定量，因此各實驗室采用比較少，近幾年來氣相色譜法用于交酯類單體含量測定的相關(guān)報道比較多。

目前尚無醫(yī)療器械用可吸收結(jié)扎夾生物材料中殘留單體的分析方法及限量值，筆者結(jié)合相關(guān)報道優(yōu)化了氣相色譜測試條件，采用內(nèi)標法定量，消除系統(tǒng)誤差、儀器誤差、操作誤差等，建立了一種可用于PGA中殘留單體測定的毛細管氣相色譜法，該方法樣品中被檢測成分分離效果好，靈敏度高，受干擾程度小，精密度、準確度滿足檢測要求。

1　實驗部分

1.1主要儀器與試劑

氣相色譜儀：Agilent 7890A型，配有氫火焰離子化檢測器（FID）和ALS Chemstation色譜工作站，美國安捷倫科技公司；

離心機：DL-5-B型，上海安亭科學儀器廠；

恒溫水浴：HH-2型，常州國華電氣有限公司；

電子天平：BSA224S型，分度值為0.1 mg，賽多利斯科學儀器（北京）有限公司；

六氟異丙醇：色譜純，美國TEDIA試劑公司；

乙交酯：純度為99.5%，瑪雅試劑有限公司（中國）；

癸內(nèi)酯：色譜級，瑪雅試劑有限公司（中國）；

實驗用水為MilliQ超純水。

1.2溶液配制

乙交酯儲備液：3 mg/mL，取外部干燥的10 mL容量瓶兩個，加超純水數(shù)毫升，稱量，準確至0.1 mg。加入約30 mg乙交酯，精密稱量，前后兩次稱量之差，即為乙交酯質(zhì)量，加超純水至標線，混勻。

內(nèi)標溶液：稱取癸內(nèi)酯約45 mg，精密稱量，置于25 mL容量瓶中，加入六氟異丙醇溶解并定量稀釋至標線。

乙交酯對照品溶液：0.15 mg/mL，精密移取5 mL乙交酯儲備溶液，置于100 mL容量瓶中，精密加入2 mL癸內(nèi)酯內(nèi)標溶液，用六氟異丙醇溶劑稀釋至標線。

1.3樣品處理

精確稱量100 mg可吸收結(jié)扎夾外夾檢測樣品置于10 mL容量瓶中，加入攪拌棒并加入六氟異丙醇至容量瓶容積的90%，充分攪拌使樣品完全溶解。然后加入200 μL內(nèi)標溶液，用第二磁體將攪拌棒提到刻度線以上，再用六氟異丙醇溶劑定容至標線，將攪拌棒下降到溶液中充分攪拌均勻。

1.4色譜條件

色譜柱：HP-5 毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm，美國安捷倫科技公司）；色譜柱進樣口溫度：180℃；分流比：30∶1；樣品流速：2.0 mL/min；升溫程序：起始溫度為80℃，以10℃/min升至170℃，保持2 min；檢測器溫度：300℃；H2流量：30.0 mL/min；壓縮空氣流量：400 mL/min；氮氣補氣流量：35 mg/mL；進樣體積：1 μL。

2　結(jié)果與討論

2.1內(nèi)標物的選擇

分別以乙酰乙酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、癸內(nèi)酯為內(nèi)標物進行考察試驗。結(jié)果顯示，以乙酰乙酸為內(nèi)標物時，其內(nèi)標色譜峰拖尾因子過大；以乙酸乙酯及乙酸丁酯為內(nèi)標物時，分離度不理想；以癸內(nèi)酯為內(nèi)標物時，各項指標均符合要求，故選擇癸內(nèi)酯為內(nèi)標物。

2.2色譜柱及升溫速率的選擇

對HP-5，DB-WAX，HP-INNOWAX毛細管柱進行試驗，結(jié)果顯示，HP-5柱［填料為（5%苯基）甲基聚硅氧烷］溫度上限較高，可用溶劑進行沖洗，用于非極性乙交酯的測試，峰型好，且分離度大于2.0，因此試驗選擇HP-5毛細管柱。

毛細管柱采用程序升溫，選擇升溫速率5，10，20，30℃/min進行試驗。結(jié)果表明，升溫速率越高，雜質(zhì)峰重合越明顯；隨著升溫速率降低峰型逐漸變寬，當升溫速率為10℃/min時，分離度符合要求，且峰型較好，因此實驗選擇升溫速率為10℃/min。

2.3系統(tǒng)適用性考察

取對照品溶液、某吸收結(jié)扎夾（批號為14036070）樣品制備的供試品溶液及六氟異丙醇溶劑，按1.4色譜條件分別進樣分析，色譜圖見圖1、圖2。試驗結(jié)果表明，乙交酯在2.74 min出峰，分離度k=2.32；癸內(nèi)酯在6.79 min出峰，分離度k=7.25，理論塔板數(shù)達到100 000以上。可見內(nèi)標物癸內(nèi)酯、殘留單體乙交酯能得到有效分離，而且六氟異丙醇不干擾乙交酯的測定。

2.4方法學驗證

2.4.1線性方程、線性范圍及檢出限

精密吸取乙交酯對照品溶液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 mL，分別置于5個10 mL容量瓶中，用六氟異丙醇定容至標線，得到質(zhì)量濃度分別為0.03，0.06，0.09，0.12，0.15 mg/mL的系列標準工作溶液，分別在1.4條件下進行氣相色譜分析。以乙交酯的質(zhì)量濃度（X ）為橫坐標，以對應(yīng)的色譜峰面積（Y ）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程：Y=0.062 1X+0.039，線性相關(guān)系數(shù)r=0.999 1，線性范圍為0.03～0.15 mg/mL。

圖2　供試品溶液氣相色譜圖

以基線噪聲的3倍對應(yīng)待測物濃度作為方法的檢出限，得檢出限D(zhuǎn)L=0.903 μg/mL；以5倍檢出限作為方法定量下限，MDL=4.515 μg/mL。

2.4.2精密度試驗

配制乙交酯對照溶液120 μg/mL，按1.4條件進行色譜分析，連續(xù)進樣測定6次；同一標準溶液，每天分別進樣1次，連續(xù)6 d。依據(jù)2.4.1校準曲線計算實際測定值，得實驗精密度及日間重復性（RSD）分別為1.06%，1.38%，見表1，結(jié)果表明方法精密度良好。

表1　精密度及日間重復性試驗結(jié)果（n=6）

2.4.3回收試驗

精確稱取50 mg可吸收結(jié)扎夾外夾樣品，置于10 mL容量瓶中，按照1.3方法進行樣品處理，得到樣品溶液，按實驗方法進行測定。然后加入不同量的乙交酯對照品溶液，進行加標回收試驗，每一濃度連續(xù)測定6次，結(jié)果見表2。由表2可知，加標回收率為92.5%～112.7%，說明方法的準確度較高。

表2　回收試驗結(jié)果（n=6）

3　結(jié)語

采用毛細管氣相色譜法測定醫(yī)用結(jié)扎夾外夾中殘留單體乙交酯的含量。在選擇的色譜條件下，內(nèi)標物與殘留單體均能有效分離，色譜系統(tǒng)的精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性好，且專屬性強，該方法適宜長期對可吸收結(jié)扎夾進行質(zhì)量控制。

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Determination of Glycolide Monomer in Medical Absorbable Ligating Clip by Capillaty Gas Chromatography

Li Yuan1， Li Fan2
（1. Zhejiang Institute for the Research of Medical Device， Hangzhou 310009， China；2. Zhejiang Center for Drug Certification and Inspection， Hangzhou 310009， China）

The determination of glycolide monomer in medical absorbable ligating clip by capillaty gas chromatography was established. The sample was dissolved by magnetic stirring，with hexafluoroisopropanol as solvent，HP-5 column （30 m×0.32 mm，0.25 μm） and FID were used. The injector temperature was 180℃， FID temperature was 300℃. Column temperature programming: initial temperature was at 80℃， then increased to 170℃ at 10℃/min for 2 minute. Under the selected chromatographic conditions，glycolide and decalactone could get good separation. The linear range of glycolide was 0.03-0.15 mg/mL， correlation coefficient was 0.999 1， and the detection limit was 0.903 μg/mL. The relative standard deviation of detection results was 1.06%（n=6）， standard addition recovery was 92.5%-112.7%. This method is simple in sample tratement，has good reproducibility and high separation efficency， it can be used for mass control of glycolide monomer in medical absorbable ligating clip.

capillaty gas chromatography； glycolide； absorbable ligating clip； decalactone

O657.7

A

1008-6145（2016）04-0069-03

10.3969/j.issn.1008-6145.2016.04.018

聯(lián)系人：李原；E-mail: fancyzl11@163.com

2016-04-28