葉　鴻,周青山

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VEGF多態(tài)性與吸煙在急性冠狀動(dòng)脈綜合征中交互作用研究

葉鴻,周青山*

武漢大學(xué)人民醫(yī)院重癥監(jiān)護(hù)科,武漢 430071

[摘要]目的探討VEGF-1154C/T(rs1570360)位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與急性冠狀動(dòng)脈綜合征(ACS)遺傳易感性關(guān)聯(lián)性及與吸煙交互作用。方法采用多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法分析298例ACS患者和636例對照進(jìn)行rs1570360基因分型,非條件Logistic分析rs1570360急性冠狀動(dòng)脈綜合征發(fā)病易感性之間關(guān)聯(lián)性;利用非條件Logistic分析rs1570360與吸煙的交互作用。結(jié)果與VEGF rs1570360位點(diǎn)非T基因攜帶者(CC)相比,T基因攜帶者(TT/CT)的急性冠狀動(dòng)脈綜合征罹患風(fēng)險(xiǎn)明顯增加(OR=1.64,95%CI:1.48,1.86,P=0.003;校正OR=1.61,95%CI:1.44,1.81,P=0.001)。用非條件Logistic校正腰圍、BMI、TG、LDL-C、HDL-C,分析表明，攜帶rs1570360 TT/CT基因型有吸煙史個(gè)體急性冠狀動(dòng)脈綜合征罹患風(fēng)險(xiǎn)是攜帶CC基因非吸煙個(gè)體的3.33倍(OR=3.33,95%CI:2.01,5.39,P<0.001)。結(jié)論rs1570360與急性冠狀動(dòng)脈綜合征患病罹患風(fēng)險(xiǎn)緊密相關(guān),rs1570360與吸煙在急性冠狀動(dòng)脈綜合征發(fā)病中具有協(xié)同效應(yīng)。

[關(guān)鍵詞]VEGF;多態(tài)性;急性冠狀動(dòng)脈綜合征;交互作用

0　引言

急性冠狀動(dòng)脈綜合征(Acute coronary syndrome,ACS)是心臟冠狀動(dòng)脈粥樣出現(xiàn)粥樣硬化時(shí),在各種誘因下冠脈完全或不完全閉塞性血栓,表現(xiàn)出心前區(qū)疼痛等綜合征[1]。近年來隨著人們生活水平改善和工作節(jié)奏加快,急性冠狀動(dòng)脈綜合征發(fā)病率明顯增高?，F(xiàn)已明確急性冠狀動(dòng)脈綜合征發(fā)病主要與氧化應(yīng)激以及炎癥反應(yīng)等因素緊密相關(guān)[2-4]。國內(nèi)外研究表明,急性冠狀動(dòng)脈綜合征呈現(xiàn)家族集聚現(xiàn)象,提示遺傳因素在其發(fā)病過程中起著重要的作用[5]。血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)是一種促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性改變的分子,VEGF可調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激以及炎癥反應(yīng)等生物學(xué)效應(yīng)[6]。研究發(fā)現(xiàn),吸煙不僅加劇機(jī)體炎癥反應(yīng)水平,同時(shí)可導(dǎo)致機(jī)體氧化應(yīng)激水平增加[7]。而調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激以及炎癥反應(yīng)是冠脈綜合征發(fā)病的重要危險(xiǎn)因素[2]。為此,本研究通過采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)，了解VEGF rs1570360多態(tài)性與急性冠狀動(dòng)脈綜合征易感性的關(guān)系。本文亦著重探討rs1570360與吸煙在急性冠狀動(dòng)脈綜合征中的交互作用。

1　對象與方法

1.1研究對象選取2012年10月至2014年9月于黃石中心醫(yī)院老年科住院的急性冠脈綜合征患者，年齡20～70歲，急性冠狀動(dòng)脈綜合征診斷標(biāo)準(zhǔn)符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管分會(huì)頒布的《非ST段抬高急性冠狀動(dòng)脈綜合征診斷與治療指南》。健康對照組選取體檢中心健康個(gè)體。所有納入對象若罹患免疫風(fēng)濕性疾病、嚴(yán)重肝腎疾病、惡性腫瘤、慢性消耗性疾病,嚴(yán)重感染性疾病或近3個(gè)月無服用免疫抑制劑、激素史將被排除。

1.2研究方法

1.2.1一般資料的收集通過詢問及形態(tài)學(xué)測量，收集受試者的年齡、性別以及血壓、體重、腰圍、身高等一般資料。近1年來,每天至少吸煙1根定義為吸煙。

1.2.2生化指標(biāo)檢測抽取受試者空腹靜脈血,全部采用羅氏日立7600全自動(dòng)生化分析儀測定所有受試者的血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)。

1.2.3rs1570360性檢測采取經(jīng)典酚-氯仿法提取外周血基因組DNA。根據(jù)VEGF以及VEGF基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)各個(gè)位點(diǎn)的擴(kuò)增引物使用PCR擴(kuò)增目的基因片段。PCR擴(kuò)增引物序列：rs1570360上游5′-CTTCCTAGGCTGGTCCTTACTGA-3′,下游：5′-CTGAGACCTGAAGA CCTAAAGAGCT-3′ PCR反應(yīng)體系(25 μL)包含100 ng提取DNA,1.0 U Taq酶(Takara,Dalian,China),2 μL上游以及下游引物2×PCR buffer。PCR反應(yīng)條件:94 ℃ 5 min;94 ℃ 30 s，30個(gè)循環(huán)；58 ℃(rs1570360),72 ℃ 45 s; 72 ℃ 10 min。采用XspI(rs1570360)限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切，酶切產(chǎn)物進(jìn)行3%瓊脂糖電泳;EB染色成像,以此判定基因型。

2　結(jié)果

2.1一般情況一般臨床資料如表1所示。與健康對照組相比，急性冠狀動(dòng)脈綜合征組(病例組)在性別、年齡、TC等資料上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而腰圍、BMI、TG、LDL-C、HDL-C、吸煙等變量兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1　ACS與健康對照組一般臨床資料

2.2rs1570360與急性冠狀動(dòng)脈綜合征易感性rs1570360在病例組以及健康對照組基因型頻率分布如表2所示,健康對照組和病例組均符合Hardy-Weinberg平衡法(rs1570360:χ2=0.14,P=0.710,χ2=0.16,P=0.688)。利用非條件Logistic校正腰圍、BMI、TG、LDL-C、HDL-C、吸煙等變量后,與VEGF rs1570360基因型CC個(gè)體相比,CT個(gè)體罹患急性冠狀動(dòng)脈綜合征風(fēng)險(xiǎn)增加(OR=1.32,95%CI:1.00～1.73,P=0.048)；TT基因型個(gè)體罹患急性冠狀動(dòng)脈綜合征風(fēng)險(xiǎn)增加(OR=1.61,95%CI:1.02～2.47,P=0.034);與非T基因攜帶者(CC)相比,T基因攜帶者(TT/CT)的急性冠狀動(dòng)脈綜合征罹患風(fēng)險(xiǎn)明顯增加(OR=1.43,95%CI:1.08～1.90,P=0.012;校正OR=1.51,95%CI:1.05～1.81,P=0.021)。

表2　rs1570360與ACS易感性關(guān)聯(lián)性分析

注：a:腰圍,BMI,LDL-C,HDL-C

表3　rs1570360與吸煙在急性冠狀動(dòng)脈綜合征中交互作用

注：a:校正腰圍、BMI、TG、LDL-C、HDL-C等變量;Padd:相加交互作用P值;Pmulti:相乘交互作用P值

3　討論

近年來，流行病學(xué)證實(shí)遺傳因素在急性冠狀動(dòng)脈綜合征發(fā)病中發(fā)揮著重要作用[8]。從遺傳易感性角度確定ACS高危人群，對易感人群有針對性的預(yù)防是目前降低ACS風(fēng)險(xiǎn)的有效措施之一。本文通過病例對照實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，VEGF rs1570360位點(diǎn)T基因攜帶者(TT/CT)與非T基因攜帶者(CC)的急性冠狀動(dòng)脈綜合征罹患風(fēng)險(xiǎn)明顯增加,為排除腰圍、BMI、TG、LDL-C、HDL-C、吸煙等變量等混雜因素對研究的影響,本文采用非條件Logistic回歸分析予以校正。排除上述因素后結(jié)果亦未見明顯變化。迄今為止,關(guān)于rs1570360與急性冠狀動(dòng)脈綜合征易感性關(guān)聯(lián)性研究鮮見報(bào)道。我國學(xué)者發(fā)現(xiàn)，廣州地區(qū)VEGF rs2010963多態(tài)性與冠心病風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān)[9];而印度學(xué)者發(fā)現(xiàn)，rs1570360與冠心病發(fā)病無明顯相關(guān)性[10]。

急性冠狀動(dòng)脈綜合征是一種由遺傳與環(huán)境因素及其相互作用所致的復(fù)雜疾病?，F(xiàn)已明確吸煙明顯增加ACS罹患風(fēng)險(xiǎn)[11-13]。為探討基因與吸煙在急性冠狀動(dòng)脈綜合征的交互作用，本文亦將吸煙作為環(huán)境因素納入研究,探討rs1570360與吸煙在急性冠狀動(dòng)脈綜合征中的交互作用，Rothman認(rèn)為，基于相加模型的RERI、API、S三項(xiàng)指標(biāo)在生物學(xué)交互作用評價(jià)中具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。RERI與Index S評價(jià)兩因素同時(shí)存在時(shí)的聯(lián)合作用與單獨(dú)存在之和的差別;API則評價(jià)兩因素同時(shí)存在的病例中可歸因于兩因素交互作用的病例所占的比例。非條件Logistic回歸分析表明，攜帶rs1570360 TT/CT基因型有吸煙史個(gè)體急性冠狀動(dòng)脈綜合征罹患風(fēng)險(xiǎn)是攜帶CC基因非吸煙個(gè)體的3.33倍(OR=3.33,95%CI:2.01,5.39,P<0.001)。RERI、API、S三項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果提示，rs1570360與吸煙在急性冠狀動(dòng)脈綜合征有協(xié)同作用,然而機(jī)制難以闡明。目前有關(guān)rs1570360與環(huán)境交互作用在急性冠狀動(dòng)脈綜合征中交互作用機(jī)制尚未明確。近年來文獻(xiàn)報(bào)道，VEGF多態(tài)性與吸煙在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎以及食道癌中亦存在交互作用[14-15]。本研究存在一定不足,最顯著的是健康對照組并非絕對意義的“健康”,部分對照組對象攜帶其他代謝性疾病。其次,本研究僅僅將吸煙這一環(huán)境因素納入,而忽略了其他環(huán)境因素的影響。最后,研究中樣本量較小,需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量。

總之,VEGF rs1570360與急性冠狀動(dòng)脈綜合征罹患風(fēng)險(xiǎn)密切相關(guān),rs1570360和吸煙在急性冠狀動(dòng)脈綜合征發(fā)病中發(fā)揮著協(xié)同作用。本研究提示，攜帶rs1570360 TT/CT,特別是有吸煙史個(gè)體屬急性冠狀動(dòng)脈綜合征高危險(xiǎn)人群，在急性冠狀動(dòng)脈綜合征防治方案中應(yīng)加以重視。本研究亦存在一定不足,為更好地研究rs1570360在急性冠狀動(dòng)脈綜合征的易感性以及與急性冠狀動(dòng)脈綜合征的交互作用，尚需要開展更大樣本量、設(shè)計(jì)更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯俊?/p>

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收稿日期：2015-11-06

基金項(xiàng)目：湖北省自然基金資助項(xiàng)目(2013CDZ029)

*通信作者

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201603011

Study on interaction between VEGF polymorphism and smoking in acute coronary syndrome

YE Hong,ZHOU Qing-shan*

(1.Desect1ment of Intensive Care,People′s Hospital of Wuhan University,Wuhan 430071,China)

【Abstract】ObjectiveTo study whether vascular endothelial growth factor (VEGF)-1154C/T (rs1570360) polymorphism is associated with susceptibility in acute coronary syndrome (ACS) and its interaction with smoking.MethodsTotally 298 patients with ACS and 636 healthy control subjects were genotyped by polymerase chain reaction-based restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP).The unconditional logistic regression (ULR) was performed to assess the association between rs1570360 and ACS risk.Gene-environment interactions on the risk of ACS was explored by unconditional logistic regression methods.ResultsThe case-control analysis indicated that increased risk of ACS which was found in patients with VEGF rs1570360.The data from ULR method indicated that smoking-positive subjects with genotype CT/TT had 3.33 times risk of ACS compared to smoking-negative subjects with genotype CC(OR=3.33,95%CI:2.01-5.39,P<0.001) after adjusting for covariates.ConclusionVEGF rs1570360 is associated with risk of ACS,and that rs1570360 together with smoking has synergistic effects on risk of ACS.

Key words：VEGF;Polymorphism;ACS;Interaction