顏曉魯

(甘肅省小隴山林業(yè)實(shí)驗(yàn)局云坪林場(chǎng)，甘肅兩當(dāng)742403)

植物組織培養(yǎng)在林業(yè)育苗實(shí)踐中的應(yīng)用

顏曉魯

(甘肅省小隴山林業(yè)實(shí)驗(yàn)局云坪林場(chǎng)，甘肅兩當(dāng)742403)

植物組織培養(yǎng)育苗就是在無(wú)菌而又適合植物生長(zhǎng)發(fā)育所需營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件下，培養(yǎng)活植物的組織或器官，使之成為一新的獨(dú)立植株。植物的組織或器官可以取自植物的任何部位，如根、莖、葉、花、果實(shí)、種子、胚等任何部位的細(xì)胞、單個(gè)細(xì)胞，甚至細(xì)胞內(nèi)原生質(zhì)體。

目前在我局林業(yè)科研所的生產(chǎn)上采用最多的是植物莖尖(3 mm以下)、胚、花器等的組織培養(yǎng)。組織培養(yǎng)可以迅速擴(kuò)大繁殖系數(shù)，僅用一小塊植物組織，就可在很短時(shí)間內(nèi)繁殖出上萬(wàn)株苗木。植物組織培養(yǎng)所用組織或細(xì)胞很少，對(duì)稀有珍貴而且繁殖極其困難的植物種類(lèi)具有非常重要的意義。

1組織培養(yǎng)條件

1.1實(shí)驗(yàn)室

組織培養(yǎng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，需要一定的實(shí)驗(yàn)室條件，應(yīng)具備的基本條件：

1.1.1化學(xué)實(shí)驗(yàn)室。存放各類(lèi)化學(xué)藥品，配制培養(yǎng)基等。需具備下列物品：藥品柜、玻璃器皿柜、實(shí)驗(yàn)臺(tái)、冰箱、天平、水浴鍋、酸試計(jì)、水池等。其要求與一般化學(xué)實(shí)驗(yàn)室要求相同。

1.1.2洗滌消毒室。用做器皿的洗刷、消毒、干燥等，配有高壓滅菌鍋、烘箱、木架、水池等。

1.1.3無(wú)菌操作室。用于植物材料的消毒、接種、轉(zhuǎn)移、原生質(zhì)體制備等。要求室內(nèi)封閉，保持無(wú)菌。并具有以下物品：超凈工作臺(tái)、紫外燈、解剖鏡、低速離心機(jī)。

1.1.4培養(yǎng)室。是供培養(yǎng)物生長(zhǎng)的場(chǎng)所。要求室內(nèi)整潔，有控溫和照明設(shè)備。室內(nèi)溫度要求恒溫，均勻一致，有自動(dòng)調(diào)節(jié)溫度的設(shè)備，一般要求室溫在25～27℃，或依所培養(yǎng)植物而定。光源以白色熒光燈為好，還應(yīng)有培養(yǎng)架裝置等。

1.2常用藥品

組培所需藥品主要用于培養(yǎng)基的配制，也有部分用于外植體消毒。

1.2.1需要消毒藥品。次氯酸鈣(鋁)、過(guò)氧化氫、漂白精片、溴水、硝酸銀等。

1.2.2無(wú)機(jī)鹽類(lèi)。包括大量元素和微量元素兩類(lèi)。大量元素包括植物生長(zhǎng)發(fā)育所必需的N、P、K、Ca、

社區(qū))和山頭地塊及小班。地方政府牽頭組織有關(guān)部門(mén)(單位)聯(lián)合對(duì)下達(dá)的防控目標(biāo)任務(wù)完成情況開(kāi)展春季、年度和平時(shí)督查指導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，督促整改，及時(shí)通報(bào)結(jié)果?？h重大外來(lái)林業(yè)有害生物防控指揮部安排縣林業(yè)局于每年年底對(duì)各鄉(xiāng)鎮(zhèn)及有關(guān)部門(mén)(單位)防控情況進(jìn)行全面檢查考核，并將考核結(jié)果進(jìn)行通報(bào)。對(duì)領(lǐng)導(dǎo)到位、責(zé)任落實(shí)、防控任務(wù)目標(biāo)完成好的鄉(xiāng)鎮(zhèn)，予以表彰；對(duì)不能認(rèn)真履行責(zé)任，沒(méi)有完成防控任務(wù)目標(biāo)的鄉(xiāng)鎮(zhèn)(場(chǎng))，依法追究有關(guān)責(zé)任人的責(zé)任。

3.5加大資金投入，保障防控需要

堅(jiān)持以地方投入為主，上級(jí)補(bǔ)助為輔的原則，縣財(cái)政要優(yōu)先安排防控經(jīng)費(fèi)，并積極爭(zhēng)取上級(jí)部門(mén)對(duì)防控資金的支持，保證防控資金按需要投入。經(jīng)費(fèi)主要包括春秋季兩次松材線蟲(chóng)病疫情普查經(jīng)費(fèi)、重點(diǎn)地帶疫情監(jiān)測(cè)經(jīng)費(fèi)、零星松枯死木清理處理經(jīng)費(fèi)、松墨天牛防治經(jīng)費(fèi)、檢疫執(zhí)法工作經(jīng)費(fèi)、松材線蟲(chóng)病疫情舉報(bào)獎(jiǎng)勵(lì)費(fèi)和林分改造費(fèi)，以及一旦發(fā)生松材線蟲(chóng)病疫情除治費(fèi)等費(fèi)用。加強(qiáng)對(duì)松材線蟲(chóng)病防控資金使用的管理，確保防控成效和資金專用。防控所用農(nóng)藥器械由縣林業(yè)部門(mén)統(tǒng)一采購(gòu)提供。

參考文獻(xiàn)

[1]王玲萍.福建省松材線蟲(chóng)病防控類(lèi)型區(qū)劃與對(duì)策措施[J].生物災(zāi)害科學(xué)，2014(3)：228-231.

[2]詹祖仁，張龍華，詹斐，等．福建省松材線蟲(chóng)病防控的法規(guī)問(wèn)題及建議[J]．中國(guó)林副特產(chǎn)，2013(1)：94-96．

Mg、S等；微量元素包括Fe、Zn、Cu、B、Mo、C等。

1.2.3有機(jī)物。主要是蔗糖、維生素、氨基酸等。

1.2.4植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。用于組培的主要有生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素及赤霉素。

1.2.5有機(jī)附加物。常用的有酵母提取物、椰乳、果汁等及相應(yīng)的植物組織浸提液。

1.2.6水。培養(yǎng)基用水原則上使用蒸餾水、去離子水等。

2培養(yǎng)基的配制

2.1培養(yǎng)基種類(lèi)及成分

培養(yǎng)基分為固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類(lèi)。在培養(yǎng)基中加入一定量的凝固劑(如瓊脂、明膠等)即為固體培養(yǎng)基，而不加入凝固劑的為液體培養(yǎng)基。這兩種培養(yǎng)基的基本成分是類(lèi)似的，一般分為兩部分，即基本培養(yǎng)基和附加成分如激素和天然附加物等。

2.2培養(yǎng)基的配制

2.2.1母液的配制與保存。為減少工作量及便于低溫貯藏，一般配成比所需濃度高10～100倍母液保存在低溫環(huán)境條件下，在配制培養(yǎng)基時(shí)按比例量取即可。母液的配制及保存應(yīng)注意藥品稱量要精確，微量元素化合物精確到0.0001g，大量元素化合物精確到0.01g。母液貯藏時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，一般為幾個(gè)月。要在盛裝母液的容器上注明配制日期，以便定期檢查，出現(xiàn)渾濁等現(xiàn)象時(shí)不能用。母液應(yīng)放在2～4℃的冰箱內(nèi)保存。

2.2.2培養(yǎng)基配制。將母液從冰箱中取出，依次排好，按照需要量定量吸取放入量筒中。稱取瓊脂，培養(yǎng)基中的蔗糖和瓊脂，可依其需要量隨稱取隨用。加少量水煮制。加熱時(shí)要不斷攪拌，使之充分混合。測(cè)定一下配好的培養(yǎng)基pH值，用0.1～1.0的HCI(或NaOH)對(duì)培養(yǎng)基的pH位進(jìn)行調(diào)整，使pH值保持在5.4～ 6.0。再分裝于三角瓶等培養(yǎng)容器內(nèi)封禁包好備用。

3方法和程序

3.1外植體的選取和滅菌

組培外植體一般分為兩類(lèi)：一類(lèi)是帶芽的外植體，如莖類(lèi)、側(cè)芽、鱗芽、原球莖等，可直接誘導(dǎo)促進(jìn)叢生芽的大量產(chǎn)生；另一類(lèi)是根、莖、葉等營(yíng)養(yǎng)器官及花藥、花瓣、花萼、胚珠、果實(shí)等生殖器官，要經(jīng)過(guò)愈傷組織階段再分化出芽或產(chǎn)生胚珠狀體后形成再生植株。進(jìn)行培養(yǎng)的植物材料大都為植物的莖尖，通常切取莖尖的大小，一般2～5 mm。脫毒組織培養(yǎng)小于3mm。切下的芽應(yīng)分別用流水沖洗30 min，然后放在10%次氯酸鈉溶液或漂白粉溶液中浸泡10～15 min。滅菌的時(shí)間和滅菌液的濃度應(yīng)根據(jù)芽的大小和成熟度及不同種類(lèi)的植物進(jìn)行調(diào)整，做到既要防止菌類(lèi)污染，又要避免滅菌液的殺傷作用引起組織壞死。

滅菌后的芽應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行剝離和切割，體積較大的剝離可以在肉眼下直接操作，太小的要在顯微鏡下進(jìn)行。切出的組織可以直接接種在已準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基上。在瓶上做好標(biāo)記然后移到培養(yǎng)架上。

3.2外植體的增殖

接種后的培養(yǎng)容器放在營(yíng)養(yǎng)室中，一般每天光照16 h，溫度控制在25℃左右，對(duì)外植體進(jìn)行分化培養(yǎng)。在新梢形成后為了擴(kuò)大繁殖系數(shù)，還需要進(jìn)行繼代培養(yǎng)。把材料分株或切斷后轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)1個(gè)月左右后，可視情況再進(jìn)行多次增殖，以增加植株數(shù)量。增殖培養(yǎng)基一般在分化培養(yǎng)基上加以改良，以利于增殖率的提高。

3.3根的誘導(dǎo)

繼代培養(yǎng)形成的不定芽和側(cè)芽等一般沒(méi)有根，必須轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)。生根培養(yǎng)基較多用l/2MS培養(yǎng)基。一般在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)1個(gè)月左右即可獲得健壯根系。此外，生產(chǎn)中也有用具有根原基的試管苗移植，這樣的試管苗只在坐根培養(yǎng)基中培養(yǎng) 7～10d，誘導(dǎo)出根原基或小于1mm的幼根，但其基部切口已愈合，不易感染，栽后能很快生根，亦具較高的成活率。

3.4組培苗的移栽

組培苗一般長(zhǎng)至高5～8 cm，有3～5條根后即可移栽。先將培養(yǎng)容器蓋子打開(kāi)，在室內(nèi)光照下放l～2d，使幼苗的葉片能增強(qiáng)一些抗性。然后取出苗，用自來(lái)水將根系上的瓊脂沖洗干凈，再栽入已準(zhǔn)備好的基質(zhì)中。盆栽苗需放在與培養(yǎng)室溫度差不多的溫室中，溫度25℃左右，相對(duì)濕度90%左右，但基質(zhì)不宜過(guò)濕或積水，以防爛苗。培養(yǎng)4～6周，新梢開(kāi)始生長(zhǎng)，小苗即可轉(zhuǎn)入正常管理。

組織培養(yǎng)育苗，要受到溫度、光照、濕度等物理?xiàng)l件和不同氣體、培養(yǎng)基的組成、pH值、滲透壓等化學(xué)條件，以及外植體的樹(shù)種、部位、大小等生物條件的影響。

中圖分類(lèi)號(hào):S722.3+7

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

作者簡(jiǎn)介：顏曉魯(1988-)，男，林業(yè)助理工程師，E-mail:whh790502@163.com。

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2016.03.027