楊登勇

（平塘縣農(nóng)村工作局貴州 平塘 568300）

膠體金免疫層析法快速診斷牛布魯氏菌病

楊登勇

（平塘縣農(nóng)村工作局貴州 平塘 568300）

目的：分析膠體金免疫層析法快速診斷牛布魯氏菌病的價值。方法：選取健康牛血清30份與布魯氏菌病牛血清30份，采用膠體金免疫層析法對布魯氏菌病牛與健康牛進(jìn)行對比測試，在不同血清用量的檢驗方式下，明確最佳血清用量，建立快速診斷牛布魯氏菌病的方式。結(jié)果：膠體金免疫層析法在牛布魯氏菌病臨床檢驗中應(yīng)用的最佳血清用量為10μl，檢測敏感度為90%（27/30），特異性為96.67%（29/30）。結(jié)論：膠體金免疫層析法在快速診斷牛布魯氏菌病中的應(yīng)用價值較為突出，具有敏感性較高、特異性較強(qiáng)的特點，血清用量較小，實際檢驗的方式較為便利，建議廣泛推廣和應(yīng)用。

膠體金免疫層析法；快速診斷牛布魯氏菌??；血清檢驗

布魯氏菌?。˙rucellosis）是由布魯氏菌屬的細(xì)菌侵入機(jī)體，誘發(fā)傳染變態(tài)反應(yīng)性的人畜共患傳染病。近些年來，牛布魯氏菌病的發(fā)病幾率呈現(xiàn)出逐年遞增的趨勢，加強(qiáng)對疾病檢驗方式的研究，有助于降低布魯氏菌病的傳播幾率，保證社會的穩(wěn)定與經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展。近些年來，隨著醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的不斷發(fā)展，膠體金免疫層析法逐漸在布魯氏菌病實踐檢驗中得到應(yīng)用，為了深入研究膠體金免疫層析法的實踐應(yīng)用價值，文章選取健康牛血清30份與布魯氏菌病牛血清30份，采用膠體金免疫層析法對布魯氏菌病牛與健康牛進(jìn)行對比測試，現(xiàn)總結(jié)內(nèi)容如下。

1 材料與方法

1.1 實驗試劑

氯金酸（AuCI3HCI.4H2O）采用上海試劑一廠的產(chǎn)品，硝酸纖維素膜（NC）采用上海醫(yī)藥工業(yè)研究院的產(chǎn)品。牛血清白蛋白Sino-American Biotechnology Co產(chǎn)品；金萄菌A蛋白（SPA）中國生物技術(shù)集團(tuán)公司產(chǎn)品[1]。使用實驗室培養(yǎng)的牛種布魯氏菌抗體抗原，采用浙江學(xué)院研制的DIGFA診斷試劑以及中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院流行病學(xué)微生無研究所研制的SAT診斷試劑[2]。

1.2 血清樣本

病牛血清樣本、健康牛血清來自于平塘縣動物疫病預(yù)防控制中心。

1.3 方法

取實驗室培養(yǎng)的牛種布魯氏菌菌體進(jìn)行實驗研究，大致1萬億個牛種布魯氏菌菌體，融入到生理鹽水10ml中，超聲粉碎、冰凍和冷藏后，高速離心取上清液，測量蛋白濃度為200μg/mL[3]。采用Frens檸檬酸鈉還原法制備膠體金，結(jié)合Horisbeger方法，標(biāo)記膠體金蛋白。在加樣孔中融入帶檢血液，滲入之后，融入生理鹽水100μL，3min后觀察結(jié)果。檢測線與質(zhì)控線如果都出現(xiàn)紅色，則表明為陽性，如果檢測線沒有顏色，質(zhì)控線變成紅色，代表為陰性[4]。分別取布魯氏菌病病牛和健康牛血清5μL、10μL與20μL進(jìn)行測試，結(jié)合yonden指數(shù)明確最佳血清用量[5]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件實施數(shù)據(jù)的計算與整理，計數(shù)資料采用x2進(jìn)行檢驗，采用%表示，p＜0.05則代表差異對比具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 膠體金免疫層析法檢驗不同血清用量牛布魯氏菌病的敏感性與特異性分析

在不同劑量5μL、10μL與20μL病牛血清與健康牛血清檢驗中，在檢測血清用量為5μL的時候，陽性率為83.33%；在檢測血清用量為10μL的時候，陽性率為90%；在檢測血清用量為20μL的時候，陽性率為86.67%，膠體金免疫層析法在牛布魯氏菌病臨床檢驗中應(yīng)用的最佳血清用量為10μL。詳見表1。

2.2 GICA、DIGFA與SAT檢測牛布魯氏菌病敏感性、特異性對比

GICA檢測牛布魯氏菌病的敏感性為90%，特異性為96.67%，DIGFA檢測牛布魯氏菌病的敏感性為86.67%，特異性為93.33%，SAT檢測牛布魯氏菌病的敏感性為90%，特異性為93.33%，三組之間的差異對比不具有統(tǒng)計學(xué)意義（p＞0.05）。詳見表2。

3 討論

當(dāng)前我國常用的牛布魯氏菌病檢測方式為試管凝集試驗方式（SAT），實踐檢驗效果比較突出，但是由于這種方式操作行為較為繁雜，故而存在著檢驗速度較慢的問題[6]。膠體金免疫層析法是近些年來新興的一種標(biāo)記方式，逐漸在病毒檢驗、細(xì)菌與寄生蟲病免疫檢驗中得到廣泛應(yīng)用。

表1 膠體金免疫層析法檢驗不同血清用量牛布魯氏菌病的敏感性與特異性分析

表2 GICA、DIGFA與SAT檢測牛布魯氏菌病敏感性、特異性對比

在本次實踐研究中，GICA檢測牛布魯氏菌病的敏感性為90%，特異性為96.67%，DIGFA檢測牛布魯氏菌病的敏感性為86.67%，特異性為93.33%，SAT檢測牛布魯氏菌病的敏感性為90%，特異性為93.33%，三組之間的差異對比不具有統(tǒng)計學(xué)意義（p＞0.05）。結(jié)合數(shù)據(jù)對比結(jié)果能夠看出，膠體金免疫層析法的實踐應(yīng)用價值比較突出，實踐檢出率與敏感性較高，可以作為一種有效的牛布魯氏菌病實踐檢驗方式，及時檢驗、明確診斷，為牛布魯氏菌病的有效控制奠定良好的基礎(chǔ)。

同時，在本次實踐研究中，不同劑量5μL、10μL與20μL病牛血清與健康牛血清檢驗中，在檢測血清用量為5μL的時候，陽性率為83.33%；在檢測血清用量為10μL的時候，陽性率為90%；在檢測血清用量為20μL的時候，陽性率為86.67%，膠體金免疫層析法在牛布魯氏菌病臨床檢驗中應(yīng)用的最佳血清用量為10μl?；跀?shù)據(jù)對比結(jié)果能夠看出，在少用量的血清中，膠體金免疫層析法能夠?qū)崿F(xiàn)快速、有效的牛布魯氏菌病檢驗，具有較高的試劑敏感性與特異性特點。膠體金免疫層析法相較于DIGFA與SAT檢驗方式，血清用量較少，操作方式較為便利，在牛布魯氏菌病實踐檢驗中應(yīng)用的價值比較突出，能夠在牛布魯氏菌病診斷、流行病學(xué)調(diào)查或者是現(xiàn)場診斷中應(yīng)用，是一種有效的牛布魯氏菌病檢驗方式，有助于牛布魯氏菌病的全面防治。

綜上所述，膠體金免疫層析法在快速診斷牛布魯氏菌病中的應(yīng)用價值較為突出，具有敏感性較高、特異性較強(qiáng)的特點，血清用量較小，實際檢驗的方式較為便利，建議廣泛推廣和應(yīng)用。

[1]董浩，孫雨，王曉英，等.虎紅平板凝集試驗和膠體金免疫層析法診斷布魯氏菌病效果的比較[J].畜牧與獸醫(yī)，2016，03（48）：121～122.

[2]朱明東，楊蓉，洪林娣，等.膠體金免疫層析法在布魯氏菌病不同流行地區(qū)的現(xiàn)場應(yīng)用[J].疾病監(jiān)測，2008，05（23）：274～276.

[3]王振東，姜超，楊宇，等.貝氏柯克斯體重組抗原P1表達(dá)純化及膠體金免疫層析方法的建立[J].中國媒介生物學(xué)及控制雜志，2012，04（11）：285～288.

[4]錢紅，石峰，陳創(chuàng)夫，等.伯氏疏螺旋體外膜蛋白OspA膠體金免疫層析法快速檢測技術(shù)的建立[J].中國病原生物學(xué)雜志，2014，12（9）：1075～1078+1083.

[5]徐正才，陳芳建，祝進(jìn)，等.快速膠體金免疫層析法在惡性瘧原蟲感染診斷中的應(yīng)用[J].中國預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2013，03（14）：233～234.

[6]高錦，徐愛芳.上轉(zhuǎn)發(fā)光免疫層析技術(shù)在臨床疾病病原體檢測中的應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2013，17（23）：3468～3470.

S858.23

A

1004-7344（2016）16-0166-02

2016-5-20