許崇玉，王 萍，陳 楊，朱敏立，司少艷，蔡藝靈，馬華松，陳志明

模擬微重力對(duì)獼猴肺組織趨化因子CCL20及其受體CCR6表達(dá)的影響

許崇玉1，王 萍1，陳 楊2，朱敏立2，司少艷3，蔡藝靈4，馬華松5，陳志明5

目的 探討模擬微重力對(duì)獼猴肺組織CC亞族趨化因子配體20（CCL20）及趨化因子受體6（CCR6）mRNA和蛋白表達(dá)的影響。方法 15只獼猴分為3組，每組5只：對(duì)照組、模擬組、恢復(fù)組。HE觀察獼猴肺組織結(jié)構(gòu)，實(shí)時(shí)熒光定量 PCR、免疫組化法檢測(cè)肺組織中CCL20及CCR6 mRNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果 模擬組和恢復(fù)組獼猴肺組織可見(jiàn)肺泡間隔增厚，肺間質(zhì)內(nèi)及支氣管旁可見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，恢復(fù)組較模擬組減輕。模擬組、恢復(fù)組CCL20 mRNA的表達(dá)水平較對(duì)照組增高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模擬組CCR6 mRNA的表達(dá)水平較對(duì)照組、恢復(fù)組顯著增高（P＜0.01）。模擬組CCL20及CCR6蛋白表達(dá)較對(duì)照組、恢復(fù)組顯著升高（P＜0.05）。結(jié)論 中、長(zhǎng)期模擬微重力可引起肺組織結(jié)構(gòu)破壞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，并可引起獼猴肺組織中CCL20及CCR6表達(dá)增強(qiáng)。

模擬微重力；獼猴；肺組織；CCL20；CCR6

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-3-8 8：29：01 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160308.0829.012.htm l

隨著我國(guó)載人航天事業(yè)的深入發(fā)展，空間環(huán)境中機(jī)體防護(hù)顯得尤為重要。由于肺自身特點(diǎn)，導(dǎo)致其對(duì)重力變化極其敏感［1］。研究［2］表明，失重可導(dǎo)致肺組織結(jié)構(gòu)病理?yè)p傷并伴有細(xì)胞因子的變化。CCL20是近期發(fā)現(xiàn)的趨化因子，與其唯一同源性受體CCR6［3］結(jié)合，可誘導(dǎo)多種淋巴細(xì)胞遷移，在炎癥損傷和免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用［4］。研究［5-6］表明CCL20/CCR6可參與多種肺組織疾病，促進(jìn)氣道炎癥的發(fā)生和發(fā)展。湯楚華等［7］發(fā)現(xiàn)，模擬失重可引起獼猴牙齦組織CCL20和CCR6表達(dá)增加，在牙齦組織應(yīng)激過(guò)程中發(fā)揮作用。然而，目前國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)失重狀態(tài)下CCL20/CCR6在肺組織中相關(guān)作用的報(bào)道。該研究以獼猴為對(duì)象，采用模擬微重力模型［8］，觀察失重對(duì)肺組織結(jié)構(gòu)及CCL20、CCR6 mRNA和蛋白表達(dá)的影響，為進(jìn)一步研究空間環(huán)境下肺組織結(jié)構(gòu)及功能變化提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試劑和動(dòng)物模型

1.1.1 主要試劑 一抗為山羊抗人CCL20多克隆抗體、鼠抗人CCR6單克隆抗體（美國(guó)R&G公司）；二抗為抗兔/抗鼠通用型免疫組化試劑盒（丹麥Da-Ko公司）；山羊超敏二步法檢測(cè)試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；TRIzol試劑（美國(guó)Invitrogen公司）；Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit（美國(guó) Thermo公司）；SYBR?Green Real-time PCR Master Mix試劑盒（日本TOYOBO公司）。

1.1.2 模型制備 健康雄性獼猴15只，年齡4～8歲，體重約8 kg，由北京協(xié)爾鑫生物資源研究所提供。獼猴按體重配對(duì)，隨機(jī)均等分為3組，即對(duì)照組：在籠內(nèi)自由活動(dòng)6周；模擬組：在特制的頭低位模擬失重效應(yīng)裝具上生活6周；恢復(fù)組：在特制的頭低位模擬失重效應(yīng)裝具上生活6周，隨后在籠內(nèi)自由活動(dòng)4周。以獼猴臥床頭低位-10°模擬微重力效應(yīng)。所有獼猴用標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物飼料喂養(yǎng)，室溫（22± 2）℃，人工控制室內(nèi)照明，保持12 h光照（8：00～20：00）和黑暗（20：00～次日8：00）交替循環(huán)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用及操作過(guò)程全部符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，且通過(guò)了中國(guó)人民解放軍第306醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 取材與切片制作 飼養(yǎng)周期結(jié)束后，獼猴在麻醉狀態(tài)下放血處死。取獼猴肺組織標(biāo)本，分別置于10%福爾馬林溶液、RNAlater溶液及凍存于液氮中備用。按常規(guī)石蠟切片制作方法制作4μm連續(xù)切片，進(jìn)行后續(xù)的HE及免疫組化染色。

1.2.2 HE染色觀察肺組織病理學(xué)變化 將上述石蠟切片按常規(guī)HE染色法染色，即二甲苯脫蠟后經(jīng)無(wú)水乙醇、90%酒精、80%酒精、75%酒精下行至蒸餾水；蘇木精染色；1%鹽酸酒精分化；伊紅染色；從低至高梯度酒精脫水，二甲苯透明，光學(xué)樹(shù)膠封片。Leica顯微鏡觀察，拍照。

1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Q-PCR）法檢測(cè)肺組織CCL20、CCR6 mRNA的表達(dá)

1.2.3.1 引物的設(shè)計(jì)與合成 根據(jù)GenBank中獼猴 CCL20及CCR6 mRNA序列，以Primer Premier 3.0軟件設(shè)計(jì)特異性引物，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，以 GAPDH為內(nèi)參照，引物序列見(jiàn)表1。

表1 Q-PCR使用的特異性引物序列

1.2.3.2 總RNA的提取 取凍存于-80℃冰箱RNAlater溶液中的肺組織，應(yīng)用TRIzol試劑盒，按照說(shuō)明書提取總RNA。以ND-1000核酸定量檢測(cè)儀（美國(guó)Thermo公司）測(cè)定總RNA的濃度及吸光度（absorbance，A）值即A260、A280，以 1.8≤A260/A280≤2.0為合格?？俁NA經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定，可見(jiàn)明顯的18 S、28 S兩條區(qū)帶，所有樣本總 RNA均為1.8≤A260/A280≤2.0，證明所提取的總 RNA質(zhì)量較好。

1.2.3.3 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 吸取2μg總RNA，按RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit說(shuō)明書操作步驟逆轉(zhuǎn)錄合成 cDNA。逆轉(zhuǎn)錄條件：65℃、5 min；42℃、60 min；70℃、5 min；-20℃保存。

1.2.3.4 Q-PCR法檢測(cè) 反應(yīng)體系：SYBR?Green Real-time PCR Master Mix 10μl，上游引物（10 μmol/L）0.4μl，下游引物（10μmol/L）0.4μl，cDNA 1μl，RNase Free Water 8.2μl；以GAPDH為內(nèi)參。反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性30 s；95℃、5 s；60℃、34 s；共40個(gè)循環(huán)；95℃、15 s；60℃、1 min；95℃、15 s。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用2-ΔΔCt進(jìn)行處理，計(jì)算各樣本平均Ct值及ΔCt值（ΔCt=Ct目的基因-CtGAPDH），計(jì)算2-ΔΔCt，其數(shù)值表示CCL20、CCR6 mRNA相對(duì)于GAPDH的表達(dá)倍數(shù)。

1.2.4 免疫組織化學(xué)染色 采用SP免疫組化法，切片按常規(guī)經(jīng)二甲苯脫蠟后經(jīng)無(wú)水乙醇、90%酒精、80%酒精、75%酒精下行至蒸餾水；0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液熱抗原修復(fù)；30%H2O2室溫封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶30 min；蒸餾水洗3次；山羊血清封閉30 min；滴加CCL20抗體（1∶1 000）或CCR6抗體（1∶2 000），4℃，過(guò)夜；蒸餾水、1×PBS分別洗3次；滴加抗山羊或抗鼠/抗兔二抗，室溫孵育1 h；蒸餾水、1×PBS分別洗3次；DAB顯色；蘇木精染色；1%鹽酸酒精分化；從低至高梯度酒精脫水，二甲苯透明，光學(xué)樹(shù)膠封片。Leica顯微鏡觀察獼猴肺組織中CCL20/CCR6的表達(dá)情況。以肺組織和（或）結(jié)締組織胞膜或胞質(zhì)中有黃色或棕黃色顆粒為CCL20/CCR6陽(yáng)性反應(yīng)。

采用雙盲法觀察切片，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野（×200），主動(dòng)排除“邊緣效應(yīng)”的干擾，分別對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞的百分比和染色強(qiáng)度給予評(píng)分，總分為兩者之積，半定量判斷結(jié)果。陽(yáng)性細(xì)胞的百分比：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51% ～75%為 3分，76% ～100%為 4分。染色強(qiáng)度：無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以±s表示。多樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析；兩組間差異性比較，方差齊性者采用LSD法檢驗(yàn)，方差不齊則采用Dunnett t檢驗(yàn)；變量間的相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 肺組織病理結(jié)構(gòu)改變 對(duì)照組獼猴肺組織肺泡壁形態(tài)、大小均勻，肺泡腔內(nèi)未見(jiàn)淤血、水腫；模擬組肺組織部分肺泡間隔增寬，肺間質(zhì)內(nèi)及支氣管旁可見(jiàn)淋巴細(xì)胞團(tuán)塊狀浸潤(rùn)；恢復(fù)組上述病理改變較模擬組稍減輕。見(jiàn)圖1。

圖1 獼猴肺組織HE染色A：對(duì)照組；B：模擬組；C：恢復(fù)組；1：×100；2：×400

2.2 肺組織CCL20、CCR6 mRNA表達(dá)情況 QPCR結(jié)果顯示，對(duì)照組（8.48±5.36）、模擬組（7.27 ±2.43）、恢復(fù)組（6.61±1.51）獼猴肺組織CCL20 mRNA表達(dá)呈增高趨勢(shì)，模擬組是對(duì)照組的2.31倍，恢復(fù)組是對(duì)照組的3.65倍，但各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.36）。各組獼猴肺組織CCR6 mRNA表達(dá)分別為對(duì)照組（8.22±1.93）、模擬組（5.10 ±1.46）、恢復(fù)組（8.56±1.32），模擬組是對(duì)照組的9.63倍，恢復(fù)組是對(duì)照組的0.87倍，模擬組表達(dá)CCR6較對(duì)照組、恢復(fù)組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F =7.19，P＜0.01），但對(duì)照組和恢復(fù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=7.19）。對(duì)CCL20和CCR6 mRNA在各組獼猴肺組織中表達(dá)變化進(jìn)行相關(guān)性分析顯示，兩者之間無(wú)顯著相關(guān)性（rs=0.48）。見(jiàn)圖2。

2.3 肺組織CCL20免疫組化結(jié)果 CCL20免疫組化染色結(jié)果表明，各組獼猴肺組織均可見(jiàn)CCL20弱陽(yáng)性表達(dá)，呈黃色或棕黃色，陽(yáng)性細(xì)胞既可分布于支氣管上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞，胞質(zhì)、胞核均有表達(dá)，胞質(zhì)多見(jiàn)，亦可見(jiàn)于肺組織中浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞中（圖3）。各組CCL20免疫組化評(píng)分結(jié)果分別為：對(duì)照組（1.20±1.10）分、模擬組（3.20± 0.84）分、恢復(fù)組（1.60±1.14）分。與對(duì)照組、恢復(fù)組比較，模擬組CCL20免疫組化評(píng)分顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.25，P＜0.05），對(duì)照組、恢復(fù)組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=5.25）。

圖2 CCL20 m RNA和CCR6 mRNA在獼猴肺組織中表達(dá)的相關(guān)性分析

圖3 各組獼猴肺組織CCL20免疫組化染色結(jié)果 SP×400 A：對(duì)照組；B：模擬組；C：恢復(fù)組

2.4 肺組織CCR6免疫組化結(jié)果 CCR6主要表達(dá)于支氣管上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)域，胞質(zhì)、胞核均可著色，以胞質(zhì)為主，呈黃色或棕黃色（圖4）。各組獼猴肺組織CCR6免疫組化評(píng)分結(jié)果分別為：對(duì)照組（1.20± 0.45）分、模擬組（5.20±1.79）分、恢復(fù)組（2.00± 1.87）分。與對(duì)照組、恢復(fù)組比較，模擬組CCR6免疫組化評(píng)分分值顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 9.74，P＜0.01），對(duì)照組、恢復(fù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=9.74）。

3 討論

趨化因子是一組有相似結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、低分子量（8～10 ku）細(xì)胞因子家族，由多種組織細(xì)胞及炎性細(xì)胞產(chǎn)生，有多種生物學(xué)活性，能夠趨化多種免疫細(xì)胞的遷移，在多種疾病的炎癥損傷和免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用［9-10］。根據(jù)其N末端保守的半胱氨酸殘基的排列方式，趨化因子可分為4類：CC亞族、CXC亞族、C亞族和CX3C亞族［11］。趨化因子受體屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族，主要表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞和免疫細(xì)胞。根據(jù)結(jié)合的配體不同，亦可分為4類：CCR類、CXCR類、CR類和CX3CR類。趨化因子與其相應(yīng)受體結(jié)合，對(duì)多種免疫細(xì)胞發(fā)揮趨化作用，在特異性和非特異性免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，同時(shí)在生理及病理?xiàng)l件下也參與機(jī)體多種生物學(xué)功能［7］。CCL20是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的CC亞族新成員，CCR6是CCR類趨化因子受體，是一個(gè)高度保守的G蛋白偶聯(lián)受體，主要表達(dá)于未成熟的樹(shù)突狀細(xì)胞，也可表達(dá)于T細(xì)胞、NKT細(xì)胞、B細(xì)胞及肺、腸和肝等組織［3，12］，CCL20和CCR6間相互作用可介導(dǎo)上述免疫細(xì)胞向黏膜組織的轉(zhuǎn)移，參與局部炎癥反應(yīng)及免疫應(yīng)答。

圖4 各組獼猴肺組織　CCR6免疫組化染色結(jié)果 SP×400A：對(duì)照組；B：模擬組；C：恢復(fù)組

目前，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)失重或模擬失重狀態(tài)下肺組織CCL20和CCR6表達(dá)情況及CCL20/CCR6是否在失重狀態(tài)下肺組織淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)中發(fā)揮作用的相關(guān)報(bào)道。因此本研究首次采用了在生物進(jìn)化上以及組織器官結(jié)構(gòu)、生理習(xí)性和代謝機(jī)能上同人類相近的獼猴，利用地面模擬微重力模型觀察中、長(zhǎng)期微重力狀態(tài)下獼猴肺組織結(jié)構(gòu)的病理改變及從mRNA和蛋白水平上對(duì)肺組織中CCL20、CCR6的表達(dá)進(jìn)行探討。本研究顯示模擬微重力狀態(tài)下獼猴肺組織間隔增厚、部分肺泡融合，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度較高，呈團(tuán)塊狀浸潤(rùn)，證實(shí)了失重或模擬微重力可引起肺組織結(jié)構(gòu)破壞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)增多，這與王小輝等［13］的研究結(jié)果一致。

本實(shí)驗(yàn)Q-PCR結(jié)果顯示對(duì)照組、模擬組、恢復(fù)組獼猴肺組織 CCL20 mRNA的表達(dá)水平呈增加趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與CCL20在肺組織本身表達(dá)量較低有關(guān)；與對(duì)照組、恢復(fù)組比較，模擬組肺組織CCR6 mRNA表達(dá)水平顯著增加，但對(duì)照組與恢復(fù)組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫組化結(jié)果表明，CCL20和CCR6在模擬組肺組織中表達(dá)較對(duì)照組及恢復(fù)組顯著增高，表明失重或模擬微重力效應(yīng)可引起獼猴肺組織CCL20、CCR6蛋白表達(dá)增加。Q-PCR和免疫組化結(jié)果提示：模擬微重力狀態(tài)下獼猴肺組織中CCR6 mRNA和蛋白表達(dá)水平增高，而CCL20 mRNA表達(dá)水平未見(jiàn)明顯升高，但蛋白表達(dá)增強(qiáng)。CCR6作為CCL20的唯一同源性受體，兩者mRNA的表達(dá)無(wú)顯著相關(guān)性。模擬微重力引起趨化因子CCL20 mRNA和蛋白水平表達(dá)的不一致性，可能與基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控有關(guān)，具體機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。Conejo-Garcia et al［14］發(fā)現(xiàn)β-防御素是人體內(nèi)能夠作用于CCR6的生物活性物質(zhì)，能夠與CCL20競(jìng)爭(zhēng)CCR6結(jié)合位點(diǎn)，而發(fā)揮相似的作用。Zissel et al［15］的初步研究結(jié)果顯示CCL18也可作用于CCR6而發(fā)揮趨化作用。結(jié)合本研究結(jié)果，考慮CCL20/CCR6可能參與模擬微重力下肺組織中淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)過(guò)程，但通過(guò)何種途徑介導(dǎo)該過(guò)程，還需進(jìn)一步的研究。

綜上所述，中、長(zhǎng)期模擬微重力可引起獼猴肺組織結(jié)構(gòu)破壞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，同時(shí)可引起CCL20及CCR6表達(dá)增強(qiáng)，這可能是介導(dǎo)模擬微重力狀態(tài)下肺組織中淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)增多的原因之一。

［1］ Prisk G K.Mircogravity and the respiratory system［J］.Eur Respir J，2014，43（5）：1459-71.

［2］ 李天志，劉長(zhǎng)庭，李向紅，等.模擬失重對(duì)大鼠血清及肺組織細(xì)胞因子的影響研究［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2007，36（12）：1152-4.

［3］ Ito T，Carson W F 4th，Cavassani K A，et al.CCR6 as amediator of immunity in the lung and gut［J］.Exp Cell Res，2011，317 （5）：613-9.

［4］ Lee A Y，Phan T K，Hulett M D，etal.The relationship between CCR6 and its bidding partners：does the CCR6-CCL20 axis have to be extended？［J］.Cytokine，2015，72（1）：97-101.

［5］ Demedts IK，Bracke K R，Van Pottelberge G，etal.Accumulation of dendritic cells and increased CCL20 levels in the airways of patients with chronic obstructive pulmonary disease［J］.Am JRespir Crit Care Med，2007，175（10）：998-1005.

［6］ PichavantM，Charbonnier A S，Taront S，etal.Asthmatic bronchialepithelium activated by the proteolytic allergen Der p 1 increases selective dendritic cell recruitment［J］.JAllergy Clin Immunol，2005，115（4）：771-8.

［7］ 湯楚華，牛忠英，鄭燕華，等.模擬失重30 d后再超重對(duì)猴牙齦組織趨化因子CCL20及其受體CCR6表達(dá)的影響［J］.上海口腔醫(yī)學(xué)，2014，23（3）：273-9.

［8］ Regnard J，Heer M，Drummer C，et al.Validity of microgravity simulationmodels on earth［J］.Am JKidney Dis，2001，38（3）：668-74.

［9］ Balkwill F R.The chemokines system and cancer［J］.JPathol，2012，226（2）：148-57.

［10］Blanchet X，Langer M，Weber C，et al.Touch of chemokines［J］. Front Immunol，2012，3：175.

［11］Zlotink A，Yoshie O.Chemokines：a new classification system and their role in immunity［J］.Immunity，2000，12（2）：121-7.

［12］Elgueta R，Marks E，Nowak E，et al.CCR6-dependent positioning ofmemory B cells is essential for their ability tomounta recall response to antigen［J］.J Immunol，2015，194（2）：505-13.

［13］王小輝，王 萍，朱敏立，等.N-乙酰半胱氨酸對(duì)模擬失重肺炎大鼠的保護(hù)性研究［J］.安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，49（11）：1544-8.

［14］Conejo-Garcia JR，Benencia F，CourregesM C，et al.Tumor-infiltrating dendritic cell precursors recruited by a beta-defensin contribute to vasculogenesis under the influence of Vegf-A［J］.Nat Med，2004，10（9）：950-8.

［15］Zissel G，Hohne K，Kilic A，et al.CCR6 is a receptor for CCL18 expressed on human lung fibroblasts from IPF lungs［J］.Eur Respir J，2011，38（Suppl 55）.

Effect of simulated weightlessness on the expression of chemokine CCL20 and it′s receptor CCR6 in lung of rhesusmonkey

Xu Chongyu1，Wang Ping1，Chen Yang2，et al
（1The 306th Hosptial of PLA Cinical College of Anhui Medical University，Beijing 100101；
2Deptof Respiratory and Critical Care Medicine，The306th Hosptial of PLA，Beijing 100101）

Objective To investigate the effect of simulated weightlessness on themRNA and protein expression of chemokine CCL20 and it′s receptor CCR6 in lung of rhesusmacaque.Methods Fifteen healthy youngmale rhesus monkeyswere randomly divided into3 groups：control group，simulated group and recovery group.HE stainingwas used to observe the histopathological structure changes of pul-monary tissues.And themRNA and protein expression of CCR6 and CCL20 in lung tissue were detected by immunohistochemistry and quantitative real-time PCR（QPCR）.Resu lts Compared with the control group，histopathological examination revealed alveolar septal thickening，and alveolar and interstitial lymphocytic infiltration in simulated group and recovery group，and the pathological changes in recovery group were lighter than those in simulated group.The expressions of CCL20mRNA in simulated group and the recovery group were higher than that in the control group，but there was no significant difference；the expression of CCR6 mRNA in simulated group was significantly higher than that in the control group and the recovery group（P＜0.01），but there was no significant difference between the control group and the recovery group.Immunohistochemistry results showed that CCL20 and CCR6 were expressed in the lung tissues of each group，but the expression of CCL20 was weak.The positive cells were found mainly in the cytopl-asm of bronchial and alveolar epithelial cellsand vascular endothelial cells.The protein expression of CCL20 and CCR6 in simulated group were significantly higher than that in the control group and the recovery group（P＜0.05）.Conclusion Medium or long term simulated weightlessness can induce the destruction of lung tissue structure and infiltration of lymphocytes，and it can also significantly enhance the mRNA and protein expression of CCL20 and its receptor CCR6 in lung tissues.

simulated weightlessness；rhesusmacaque；lung；CCL20；CCR6

R 563.9；V 7

A

1000-1492（2016）04-0484-05

2016-01-18接收

總裝備部試驗(yàn)技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目（編號(hào)：SMFA13K02）

1安徽醫(yī)科大學(xué)解放軍306臨床學(xué)院，北京 100101
解放軍第306醫(yī)院2呼吸與危重癥學(xué)科、3特種醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中心、4神經(jīng)內(nèi)科、5骨科，北京 100101

許崇玉，男，碩士研究生；
王 萍，女，教授，碩士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：pingwang306hpbj@163.com