張芮琪，羅啟慧，陳正禮

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疾病模型研究室，四川 成都 611130)

?

硫酸化黃芪多糖對(duì)雛雞十二指腸黏膜組織形態(tài)和免疫細(xì)胞的影響

張芮琪，羅啟慧，陳正禮

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疾病模型研究室，四川 成都 611130)

[摘要]【目的】 制備硫酸化黃芪多糖(Sulfated astragalus polysaccharide，sAPS)，研究其對(duì)雛雞十二指腸組織發(fā)育及黏膜免疫相關(guān)細(xì)胞分布的影響?！痉椒ā?采用氯磺酸-吡啶法對(duì)黃芪多糖(Astragalus polysaccharid，APS)進(jìn)行硫酸化修飾，制備sAPS，氯化鋇-明膠濁度法測(cè)定sAPS中硫含量，并計(jì)算sAPS的硫酸基取代度。運(yùn)用組織學(xué)制片技術(shù)和染色方法分別觀察APS及sAPS干預(yù)后7 d和14 d雞十二指腸的組織學(xué)特點(diǎn)，對(duì)腸壁黏膜層上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(Intraepithelial lymphocytes，IEL)、柱狀上皮細(xì)胞間杯狀細(xì)胞(Goblet cells，GC)和腸壁內(nèi)肥大細(xì)胞(Mast cells，MC)數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。【結(jié)果】 制得的sAPS中硫含量為14.3%，計(jì)算得到sAPS的硫酸基取代度為1.325。給予APS和sAPS干預(yù)后，sAPS組雛雞十二指腸的絨毛高度及絨毛高度/隱窩深度比值均明顯高于對(duì)照組和APS組，隱窩深度明顯低于對(duì)照組和APS組，sAPS組黏膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞、杯狀細(xì)胞及腸壁肥大細(xì)胞的數(shù)量也明顯高于對(duì)照組和APS組?！窘Y(jié)論】 sAPS對(duì)雛雞十二指腸組織發(fā)育及腸道黏膜免疫的促進(jìn)作用較APS強(qiáng)。

[關(guān)鍵詞]黃芪多糖；硫酸化修飾；十二指腸黏膜；黏膜免疫；雛雞

近年來(lái)，針對(duì)中藥多糖的免疫藥理學(xué)研究成為熱點(diǎn)，中藥多糖具有促進(jìn)免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗輻射、抗衰老及抗寄生蟲等多種生物活性，對(duì)促進(jìn)機(jī)體特異性免疫與非特異性免疫都有廣泛的影響。有些植物多糖如蘆薈多糖、大棗多糖及人參莖葉多糖等還可促進(jìn)動(dòng)物腸道的發(fā)育[1-3]。同時(shí)，多糖為天然產(chǎn)物，具有毒副作用小、無(wú)殘留、不產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，因而應(yīng)用前景廣闊。近年來(lái)的研究證實(shí)，中藥多糖經(jīng)分子修飾后其藥理活性有所增強(qiáng)，而硫酸化修飾是中藥多糖分子修飾方法中應(yīng)用最廣泛、最普遍的一種修飾方法。目前，一般采用氯磺酸-吡啶法、濃硫酸法、三氧化硫-吡啶法、氯磺酸-甲酰胺法等對(duì)中藥多糖的支鏈殘基進(jìn)行硫酸化修飾[4]。研究表明，經(jīng)硫酸化分子修飾后，中藥多糖的免疫調(diào)節(jié)、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤等生物活性明顯增強(qiáng)[4-8]。

黃芪多糖(Astragalus polysaccharide，APS)是黃芪的主要有效成分，其具有調(diào)節(jié)免疫、抑制病毒、抗衰老等作用[9]。近年來(lái)，黃芪多糖因其顯著的免疫增強(qiáng)和抗病毒效應(yīng)，加上來(lái)源豐富、價(jià)格低廉、毒性較低以及無(wú)耐藥性等[10]特性，而廣泛應(yīng)用于獸醫(yī)臨床、畜牧及水產(chǎn)動(dòng)物的養(yǎng)殖中。本試驗(yàn)采用氯磺酸-吡啶法對(duì)黃芪多糖進(jìn)行硫酸化修飾，通過(guò)體內(nèi)試驗(yàn)進(jìn)一步研究硫酸化黃芪多糖對(duì)雛雞十二指腸組織發(fā)育及黏膜免疫相關(guān)細(xì)胞分布的影響，以期為黃芪資源的開(kāi)發(fā)和綜合利用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試多糖黃芪多糖，購(gòu)自陜西寶雞方晟生物開(kāi)發(fā)有限公司。

1.1.2試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理1日齡非免疫羅曼公雞60只，購(gòu)自四川省天全縣隆生集團(tuán)孵化場(chǎng)，飼喂日糧為綿陽(yáng)正大小雞配合飼料。試驗(yàn)雞采用立體籠養(yǎng)，自由采食和飲水。

1.1.3主要試劑與儀器蘇木色精、甲苯胺藍(lán)(上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司)，堿性品紅(Solarbio公司)，伊紅(醇溶性，Solarbio公司)。LEICA RM 2126型旋轉(zhuǎn)石蠟切片機(jī)(徠卡儀器有限公司)，Motic數(shù)碼顯微鏡(廈門麥克奧迪實(shí)業(yè)有限公司)，電熱恒溫水浴鍋(北京市長(zhǎng)風(fēng)儀器儀表公司)，GTK-2002自動(dòng)攤片烤片機(jī)(西安瑞豐儀器設(shè)備有限公司)。

1.2方法

1.2.1黃芪多糖的硫酸化修飾采用氯磺酸-吡啶法[11]進(jìn)行，根據(jù)文獻(xiàn)[12]確定黃芪多糖的硫酸化條件為：反應(yīng)溫度95 ℃，V(氯磺酸)∶V(吡啶)=1∶6、反應(yīng)時(shí)間1 h。反應(yīng)完成后，將反應(yīng)產(chǎn)物加入到100 mL預(yù)冷的蒸餾水中，用5 g/L的NaOH調(diào)節(jié)pH至7.0，用3倍體積的無(wú)水乙醇沉淀靜置24 h。取沉淀裝入透析袋，用自來(lái)水透析48 h，蒸餾水透析24 h，透析液經(jīng)冷凍干燥得到sAPS。采用氯化鋇-明膠濁度法[11]測(cè)定sAPS中硫含量,計(jì)算硫酸基取代度(degree of substitution,DS)(指多糖中每個(gè)糖單位上的活性羥基被硫酸根所取代的數(shù)量)：DS=(1.62×S硫含量)/(32-1.02×S硫含量)。

1.2.2動(dòng)物分組及處理將1日齡羅曼公雞飼養(yǎng)至14日齡，隨機(jī)分為5組，每組12只，對(duì)照組(CK)飼喂基礎(chǔ)日糧，其余4個(gè)試驗(yàn)組分別飼喂在基礎(chǔ)日糧中添加高(500 mg/kg)、低(300 mg/kg) 劑量黃芪多糖(高劑量組表示為APSH，低劑量組表示為APSL)和高(500 mg/kg)、低(300 mg/kg) 劑量硫酸化黃芪多糖(高劑量組表示為sAPSH，低劑量組表示為sAPSL)的日糧，試驗(yàn)期14 d，常規(guī)飼養(yǎng)管理。

1.2.3樣品采集分別于給藥后的7 d(即21日齡)和14 d(即28日齡)，每組隨機(jī)選取6只雛雞，顱面動(dòng)脈放血致死，迅速取十二指腸，用新配制的生理鹽水沖洗，放入Bouin’s液中固定48 h以上。

1.2.4腸壁組織形態(tài)觀察固定好的十二指腸組織按常規(guī)組織學(xué)方法制備石蠟切片，腸管連續(xù)橫切，制得3套切片，分別行HE染色、PAS染色和肥大細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色。

腸道形態(tài)觀察參照Fleming等[13]的方法進(jìn)行，具體步驟：挑選5張染色清晰的切片，每張切片選取10根最長(zhǎng)且走向平直、伸展良好的絨毛，通過(guò)Motic數(shù)碼顯微圖像處理系統(tǒng)進(jìn)行定量分析，測(cè)量其絨毛高度(Villum heigh，VH)及與之相連的隱窩深度(Crypt depth，CD)，并計(jì)算絨毛高度與隱窩深度之比值(VH/CD)。十二指腸黏膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(Intraepithelial lymphocyte，IEL)、杯狀細(xì)胞(Goblet cell，GC)和肥大細(xì)胞(Mast cell，MC)數(shù)量的統(tǒng)計(jì)參考文獻(xiàn)[14]介紹的方法進(jìn)行。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件的One Way Anova程序進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，比較各組雛雞十二指腸絨毛高度、隱窩深度及二者比值，以及腸壁組織內(nèi)黏膜免疫相關(guān)細(xì)胞(IEL、GC和MC)數(shù)量的差異，以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2結(jié)果與分析

2.1黃芪多糖的硫酸化修飾

經(jīng)測(cè)定，本試驗(yàn)得到的硫酸化黃芪多糖產(chǎn)物sAPS中硫含量為14.3%，根據(jù)公式計(jì)算，得到該硫酸化黃芪多糖產(chǎn)物sAPS的硫酸基取代度是1.325。

2.2硫酸化黃芪多糖對(duì)雛雞十二指腸發(fā)育的影響

給藥后7 d，sAPS組、APS組和對(duì)照組雛雞十二指腸絨毛分布均勻、排列整齊，隱窩較淺，鏡下差異不大；給藥后14 d，sAPS組和APS組雛雞十二指腸絨毛高度較對(duì)照明顯增大，但其隱窩深度均小于對(duì)照組。經(jīng)Nikon數(shù)碼顯微圖像處理系統(tǒng)測(cè)量各組雛雞的絨毛高度(VH)及與之相連的隱窩深度(CD)，并計(jì)算絨毛高度與隱窩深度的比值(VH/CD)，結(jié)果如表1 所示。由表1可知，21 d時(shí)高、低劑量的APS和sAPS組雛雞十二指腸絨毛高度、隱窩深度均顯著(P<0.05)高于對(duì)照組， APSH和高、低劑量的sAPS組絨毛高度與隱窩深度比值均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。28 d時(shí)，APS組雛雞十二指腸絨毛高度顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而隱窩深度顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；高、低劑量的sAPS組雛雞十二指腸絨毛高度均顯著高于對(duì)照組(P<0.05或P<0.01)，其隱窩深度均極顯著低于對(duì)照組(P<0.01)；APS、sAPS組絨毛高度與隱窩深度比值分別顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)高于對(duì)照組。上述結(jié)果表明，硫酸化修飾后的黃芪多糖明顯提高了雛雞十二指腸的絨毛高度、降低了隱窩深度，從而使絨毛高度與隱窩深度比值明顯增大。

表 1　硫酸化黃芪多糖對(duì)雛雞十二指腸絨毛高度、隱窩深度及二者比值的影響Table 1　Effect of sulfated astragalus polysaccharide (sAPS) on villus height (VH), crypt depth (CD) and VH/CD ratio in chicken duodenum

注：*表示與對(duì)照組相比差異顯著(P<0.05)；**表示與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01)。下表同。

Note:Compared with the control group,“*” means significant difference (P<0.05),and “**” means extremely significant difference (P<0.01).The same below.

2.3硫酸化黃芪多糖對(duì)雛雞十二指腸黏膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞和杯狀細(xì)胞數(shù)量的影響

HE染色可見(jiàn)，黏膜上皮內(nèi)杯狀細(xì)胞(GC)呈高腳玻璃杯狀，細(xì)胞質(zhì)著色淺淡，細(xì)胞核位于細(xì)胞基部；黏膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(IEL)則散布于柱狀細(xì)胞之間，細(xì)胞核圓形、大而深染；PAS染色后，杯狀細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)呈紫紅色。對(duì)各組雛雞十二指腸黏膜上皮中淋巴細(xì)胞和杯狀細(xì)胞的數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果如表2所示。

由表2可知，21 d時(shí)APSH和sAPSL組雛雞黏膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(IEL)數(shù)量均顯著高于對(duì)照組 (P<0.05)，sAPSH組IEL數(shù)量極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)；sAPSH組黏膜上皮內(nèi)杯狀細(xì)胞(GC)數(shù)量顯著(P<0.05)高于對(duì)照組。28 d時(shí)，APS組雛雞黏膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而sAPS組雛雞IEL數(shù)量均極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)，APSH組GC數(shù)量顯著(P<0.05)高于對(duì)照組，高、低劑量的sAPS組GC數(shù)量均極顯著(P<0.01)高于對(duì)照組。這充分說(shuō)明，APS、sAPS的添加均可通過(guò)刺激IEL和GC數(shù)量的增加來(lái)增強(qiáng)腸道黏膜免疫與防御屏障。

表 2　硫酸化黃芪多糖對(duì)雛雞十二指腸黏膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞和杯狀細(xì)胞數(shù)量的影響Table 2　Effect of sAPS on number of intraepithelial lymphocytes (IEL) and goblet cells (GC) in duodenum epithelium mucosa of chicken

注：細(xì)胞計(jì)數(shù)方法：以統(tǒng)計(jì)100個(gè)黏膜上皮柱狀細(xì)胞間IEL和GC的數(shù)量為準(zhǔn)。

Note:Cell counting method: the number of GC and IEL were counted between 100 columnar cells in epithelium mucosa.

2.4硫酸化黃芪多糖對(duì)雛雞十二指腸腸壁肥大細(xì)胞數(shù)量的影響

十二指腸壁中肥大細(xì)胞主要位于腸壁的黏膜固有層和黏膜下層，少量散布于肌層之間。肥大細(xì)胞呈圓形或卵圓形，經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色后，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)充滿藍(lán)紫色顆粒，細(xì)胞核呈空泡狀、弱嗜堿性。對(duì)各組雛雞十二指腸腸壁中肥大細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果如表3所示。

表 3　硫酸化黃芪多糖對(duì)雛雞十二指腸腸壁肥大細(xì)胞數(shù)量的影響Table 3　Effect of sAPS on number of mast cells (MC) in chicken duodenum wall

由表3可知，21 d時(shí)APSH和高、低劑量的sAPS組腸壁肥大細(xì)胞數(shù)量均顯著高于對(duì)照組 (P<0.05)；28 d時(shí)APSL組腸壁肥大細(xì)胞數(shù)量顯著高于對(duì)照組 (P<0.05)，而APSH組和高、低劑量的sAPS組腸壁肥大細(xì)胞數(shù)量均極顯著高于對(duì)照組 (P<0.01) 。由此可以看出，APS和sAPS的添加均可顯著增加肥大細(xì)胞的數(shù)量，從而加強(qiáng)腸道黏膜免疫。

3討論

3.1硫酸化黃芪多糖對(duì)雛雞十二指腸黏膜形態(tài)的影響

動(dòng)物小腸壁的腔面從大到小依次形成環(huán)形皺襞、小腸絨毛和上皮細(xì)胞微絨毛(紋狀緣)等三級(jí)可增大小腸黏膜吸收表面積的微細(xì)結(jié)構(gòu)，其中環(huán)形皺襞是由黏膜和黏膜下層突向管腔形成的永久性結(jié)構(gòu)，小腸絨毛則是黏膜上皮和固有膜突向管腔所形成的指狀突起，而腸絨毛的表面是密集微絨毛組成的紋狀緣[15]。小腸的絨毛高度、腸隱窩深度、絨毛高度與隱窩深度比值及絨毛表面積是目前用于衡量小腸消化和吸收功能的重要指標(biāo)。絨毛變短，其所含腸黏膜上皮中柱狀細(xì)胞數(shù)量減少，預(yù)示對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力降低；腸隱窩則是腸絨毛基部上皮向固有層內(nèi)下陷形成的單管狀腺體結(jié)構(gòu)，其深度的增減提示隱窩細(xì)胞生長(zhǎng)速度的快慢，在一定程度上可影響機(jī)體的消化吸收機(jī)能[16]。而絨毛高度與隱窩深度比值可更好地反映小腸黏膜的吸收功能狀況，兩者比值的降低提示腸壁黏膜受損，機(jī)體的消化吸收功能降低而影響機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育；比值升高則表明黏膜得到修復(fù)改善，機(jī)體消化吸收功能得以增強(qiáng)而促進(jìn)機(jī)體的生長(zhǎng)發(fā)育[17]。有研究表明，植物多糖可促進(jìn)動(dòng)物腸道組織的發(fā)育。王留等[2]的研究顯示，飼料中添加大棗多糖能夠促進(jìn)仔豬腸道內(nèi)雙歧桿菌和乳酸桿菌的繁殖，并可通過(guò)顯著增加仔豬小腸各段的絨毛長(zhǎng)度和降低腸道的隱窩深度提高腸道的消化吸收能力。給仔豬日糧中添加蘆薈多糖后可提高十二指腸段、空腸前段和空腸后段的絨毛高度[1]。張勇等[18]的研究也證實(shí)，在雛雞飼料中添加不同劑量的黃芪多糖能增加肉雞十二指腸絨毛高度、降低隱窩深度。本研究結(jié)果表明，日糧中添加黃芪多糖和硫酸化黃芪多糖后7和14 d，各試驗(yàn)組雛雞十二指腸絨毛高度均顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)高于對(duì)照組；當(dāng)添加后14 d時(shí)各組隱窩深度顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)低于對(duì)照組；當(dāng)添加7和14 d時(shí)，除7 d APSL組外，其他組雛雞十二指腸絨毛高度及隱窩深度比值也均顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)高于對(duì)照組；統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，硫酸化修飾后黃芪多糖明顯提高了雛雞十二指腸的絨毛高度及絨毛高度與隱窩深度的比值，顯著降低了隱窩深度，表明黃芪多糖和硫酸化黃芪多糖干預(yù)在一定程度上能促進(jìn)雛雞十二指腸對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，從而有利于雛雞的生長(zhǎng)發(fā)育。

3.2硫酸化黃芪多糖對(duì)雛雞十二指腸腸壁組織內(nèi)黏膜免疫相關(guān)細(xì)胞分布的影響

腸道黏膜及黏膜下層存在大量的淋巴細(xì)胞和肥大細(xì)胞，它們與黏膜上皮內(nèi)杯狀細(xì)胞一起發(fā)揮重要的黏膜免疫功能。肥大細(xì)胞廣泛存在于機(jī)體各處的結(jié)締組織中，除了參與機(jī)體的過(guò)敏和炎癥反應(yīng)外，在先天性免疫和獲得性免疫中也發(fā)揮著重要作用，因此肥大細(xì)胞也是機(jī)體中一種重要的免疫活性細(xì)胞[19]。腸黏膜上皮中杯狀細(xì)胞的主要功能是分泌黏液(成分主要為黏蛋白)，對(duì)小腸黏膜上皮具有保護(hù)和潤(rùn)滑作用，其分泌的黏蛋白以及柱狀細(xì)胞分泌的復(fù)合糖蛋白共同形成黏膜表面的糖衣，后者與膜分子構(gòu)型中的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)牢固嵌合，形成黏膜表面一道重要的物理屏障。腸黏膜柱狀上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞作為黏膜表面最早接觸外來(lái)抗原的免疫活性細(xì)胞，是黏膜免疫屏障的主要組成部分[20]，上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量增加是機(jī)體腸道黏膜免疫功能狀態(tài)有所提高的反映。有資料報(bào)道，日糧中添加0.20%和0.25%的銀杏葉提取物可顯著提高十二指腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞以及杯狀細(xì)胞的數(shù)量，進(jìn)而有助于增強(qiáng)肉仔雞十二指腸的黏膜免疫功能[21]。黃玉章等[22]研究表明，日糧中添加黃芪多糖可顯著增加羅非魚腸道黏液細(xì)胞和上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞的數(shù)量，表明飼料中添加黃芪多糖可以提高羅非魚機(jī)體的特異性免疫功能。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，日糧中添加APS和sAPS后7 d，高劑量APS組和sAPS組雛雞黏膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量均顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)高于對(duì)照組，sAPSH組黏膜上皮間杯狀細(xì)胞數(shù)量顯著(P<0.05)高于對(duì)照組；添加多糖后14 d，各試驗(yàn)組雛雞黏膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞均顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)高于對(duì)照組，APSH和sAPS組雛雞黏膜上皮間杯狀細(xì)胞均顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)高于對(duì)照組。多糖干預(yù)后7 d，APSH和sAPS組雛雞十二指腸腸壁肥大細(xì)胞數(shù)量均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)；14 d時(shí)APSL組腸壁肥大細(xì)胞數(shù)量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而APSH和sAPS組腸壁肥大細(xì)胞數(shù)量均極顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。結(jié)果表明，硫酸化黃芪多糖可通過(guò)顯著增加雛雞十二指腸腸壁組織黏膜免疫相關(guān)細(xì)胞(IEL、GC和MC)的數(shù)量提高其黏膜免疫屏障功能。

[參考文獻(xiàn)]

[1]喬家運(yùn),高欣,王文杰.日糧添加蘆薈多糖對(duì)斷奶仔豬腸道形態(tài)和血清激素水平的影響 [J].飼料工業(yè),2014,35(1):44-46.

Qiao J Y,Gao X,Wang W J.Effects of aloe vera polysaccharide on gut morphology and serum hormones of weaned piglet [J].Feed Industry,2014,35(1):44-46.

[2]王留,王向國(guó).大棗多糖對(duì)保育豬腸道微生物菌群及腸道組織形態(tài)的影響 [J].養(yǎng)豬,2014(6):7-8.

Wang L，Wang X G.Effect of jujube polysaccharide on piglets intestinal microflora and intestinal morphology [J].Swine Production,2014(6):7-8.

[3]閆曉剛,張芳毓,郎洪彥,等.人參莖葉多糖對(duì)雛雞小腸黏膜組織發(fā)育和免疫細(xì)胞的影響 [J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2015,46(1):144-155.

Yan X G,Zhang F Y,Lang H Y,et al.Effects of ginseng stem and leaf polysaccharide on small intestinal mucous tissue development and immune cells of chicken [J].Acta Veterinariaet Zootechnica Sinica,2015,46(1):144-155.

[4]郭浩杰，楊嚴(yán)格，安樂(lè)，等.中藥多糖的分子修飾及其藥理活性研究進(jìn)展 [J].中草藥，2015,46(7)：1074-1079.

Guo H J,Yang Y G,An L,et al.Research progress in molecular modification and pharmacological activity of Chinese materia medica polysaccharides [J].Chinese Traditional and Herbal Drugs,2015,46(7)：1074-1079.

[5]Qin T,Chen J,Wang D Y,et al.Selenylation modification can enhance immune-enhancing activity of Chinese angelica polysaccharide [J].Carbohydrate Polymers,2013,95(1):183-187.

[6]Zhang J,Hu Y L,Wang D Y,et al.The optimization of sulfation modification conditions for ophiopogonpoly saccharide based on antiviral activity [J].International Journal of Biological Macromolecules,2012,51(4):657-662.

[7]Wang X M,Zhang Z S,Yao Q,et al.Phosphorylation of low-molecular-weight polysaccharide fromEnteromorphalinzawith antioxidant activity [J].Carbohydrate Polymers,2013,96(2):371-375.

[8]Yang J Y,Li X,Xue Y.Anti-hepatoma activity and mechanism of corn silk polysaccharides in H22 tumor-bearing mice [J].Int J Biol Macromol,2013,64(4):276-280.

[9]Wang D Y,Hu Y L,Sun J L,et al.Comparative study on adjuvanticity of compound Chinese herbal medicinal ingredients [J].Vaccine,2005,23:3704-3708.

[10]張小梅.黃芪多糖的免疫調(diào)節(jié)作用及抗腫瘤作用研究進(jìn)展 [J].大連大學(xué)學(xué)報(bào),2003,6(24):101-104.

Zhang X M.Research progress of immune regulation and anti-tumor effect of astragalus polysaccharide [J].Journal of Dali-an University, 2003,6(24):101-104.

[11]Huang X Y,Wang D Y,Hu Y L,et al.Effect of sulfated astragalus polysaccharide on cellular infectivity of infectious bursal disease virus [J].International Journal of Biological Macromolecules,2008,42(2):166-171.

[12]黃小燕,胡元亮，盧宇 ,等.正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選黃芪多糖硫酸化修飾條件及修飾產(chǎn)物抗IBDV活性測(cè)定 [J].中藥材，2008,31(4)：588-592.

Huang X Y,Hu Y L,Lu Y,et al.Sulfated modification conditions optimization of astragalus polysaccharide by orthogonal test and anti-IBDV activity determination of the modifiers [J].Journal of Chinese Medicine Materials,2008,31(4):588-592.

[13]Fleming S E,Zambell K L,Fitch M D.Glucose and glutamine provide similar proportions of energy to mucosal cells of rat small intestine [J].American Journal of Physiology:Gastrointestinal and Liver Physiology,1997,4(36):968-978.

[14]中華醫(yī)學(xué)會(huì).臨床技術(shù)操作規(guī)范-病理學(xué)分冊(cè) [M].北京:人民軍醫(yī)學(xué)出版社,2008.

Chinese Medical Association.Clinical technical operation spec-ification-pathology section [M].Beijing:People’s Military Me-dical Press,2008.

[15]沈霞芬.卿素珠.家畜組織學(xué)與胚胎學(xué) [M].5版，北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2015.

Shen X F,Qing S Z.Histology and embryology of domestic animals [M].5th ed.Beijing:China Agricultural Press,2015.

[16]張吉鹍.粗飼料分級(jí)指數(shù)參數(shù)的模型化及粗飼料科學(xué)搭配的組合效應(yīng)研究 [D].呼和浩特:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué),2004.

Zhang J K.The model based on the parameters of the roughage classification index and the combination effect of the science collocation on roughage [D].Hohhot:Inner Mongolia Agricultural University,2004.

[17]肖曼,高振華,李興華,等.酵母培養(yǎng)物對(duì)肉仔雞生長(zhǎng)性能、腸黏膜結(jié)構(gòu)及腸道菌群的影響 [J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2013,25(7):1624-1631.

Xiao M,Gao Z H,Li X H,et al.Effects of yeast culture on growth performance，intestinal mucosal structure and intestinal microflora of broilers [J].Chinese Journal of Animal Nutrition,2013,25(7):1624-1631.

[18]張勇，李冰，朱宇旌，等.黃芪多糖對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能和小腸黏膜形態(tài)的影響 [J].沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009,40(4):453-457．

Zhang Y,Li B,Zhu Y J,et al.Effect of astragalus polysaccharides on growth and small intestine mucosal morphology of broilers [J].Journal of Shenyang Agricultural University,2009,40(4):453-457．

[19]Stenton G R,Vliagoftis H,Befus A D.Role of intestinal mast cells in modulating gastrointestinal pathophysiology [J].Ann Allergy Asthma Immunol,1998,81(1):1-11.

[20]馬巖,李運(yùn)曼.中藥對(duì)腸道黏膜免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用的研究進(jìn)展 [J].臨床合理用藥,2013,6(6):168-169.

Ma Y,Li Y M.The research progress of regulation of Chinese herbal medicine on intestinal mucosal immune system [J].Chin J of Clinical Rational Drug Use,2013,6(6):168-169.

[21]黃其春,陳彤,鄭新添,等.銀杏葉提取物對(duì)肉仔雞十二指腸黏膜免疫的調(diào)節(jié)作用 [J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2011,39(11):25-30.

Huang Q C,Chen T,Zheng X T,et al.Modulatory effects ofGinkgobilobaextract on duodenum mucosal immunity of broilers [J].Journal of Northwest A&F University(Nature Science Edition),2011,39(11):25-30.

[22]黃玉章,林旋,王全溪,等.黃芪多糖對(duì)羅非魚腸絨毛形態(tài)結(jié)構(gòu)及腸道免疫細(xì)胞的影響 [J].動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),2010,22(1):108-116.

Huang Y Z,Lin X,Wang Q X,et al.Effects of astragalus polysaccharide on structure of intestinal villus and intestinal immunocyte of tilapia [J].Chinese Journal of Animal Nutrition,2010,22(1):108-116.

DOI：網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間:2016-06-0816:2110.13207/j.cnki.jnwafu.2016.07.010

[收稿日期]2015-11-04

[基金項(xiàng)目]國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2014BAI03B01)；國(guó)家重大科學(xué)儀器設(shè)備開(kāi)發(fā)專項(xiàng)(2013YQ49085906)；四川省青年科技創(chuàng)新研究團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2013TD0015)

[作者簡(jiǎn)介]張芮琪(1994-)，女，山西芮城人，本科在讀，主要從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疾病模型研究。E-mail:380779444@qq.com [通信作者]陳正禮(1975-)，男，四川簡(jiǎn)陽(yáng)人，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物疾病模型研究。E-mail:chzhli75@163.com

[中圖分類號(hào)]S852.16+2

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

[文章編號(hào)]1671-9387(2016)07-0064-06

Influence of sulfated astragalus polysaccharide on histology and immune cells of duodenum mucosa of chicken

ZHANG Ruiqi,LUO Qihui,CHEN Zhengli

(LaboratoryofAnimalDiseaseModel,CollegeofVeterinaryMedicine,SichuanAgriculturalUniversity,Chengdu,Sichuan611130,China)

Abstract:【Objective】 This study prepared the sulfated astragalus polysaccharide (sAPS) and evaluated its effect on duodenum histology and mucosal immunity related cells.【Method】 Sulfated modification of astragalus polysaccharide (APS) was done by chlorosulfonicacid-pyridine method,sulfur content of sAPS was detected by Barium chloride-gelatin turbidity method,and degree of substitution (DS) was calculated.The histological structure of duodenum,distribution of both intraepithelial lymphocytes (IEL),goblet cells (GC) in mucosa and mast cells (MC) in whole intestinal wall were observed using common histological technologies on days 7 and 14 after the polysaccharide treatment.【Result】 The sulfur content of sAPS was 14.3% and its DS was 1.325.Compared with the blank control group and APS group,sAPS increased the villus height (VH) and the ratio of villus height to crypt depth (VH/CD),while decreased the crypt depth (CD).The numbers of IEL,GC in mucosa and MC in whole intestinal wall were also increased.【Conclusion】 The role of sAPS in prompting duodenum development and enhancing intestinal mucosal immunity of chicken was stronger than that of APS.

Key words:astragalus polysaccharide;sulfated modification;duodenal mucosa;mucosal immunity; chicken

網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1390.S.20160608.1621.020.html