牛黎明,董德瓊,楊渝浩

(1.寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，浙江 寧波　312050；2.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，貴州 遵義　563099)

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臨床醫(yī)學(xué)研究

IL-23在體外促進(jìn)肺結(jié)核患者CD4+CD45RO+細(xì)胞增殖及IFN-γ的分泌

牛黎明1,董德瓊2,楊渝浩2

(1.寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，浙江 寧波312050；2.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，貴州 遵義563099)

[摘要]目的 探討白細(xì)胞介素23(interleukin 23，IL-23)在體外對(duì)肺結(jié)核患者CD4+CD45RO+細(xì)胞增殖及其分泌IFN-γ的影響。方法 將40例肺結(jié)核患者和15例健康成人外周血中分離出的外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，分為肺結(jié)核PBMC對(duì)照組、肺結(jié)核PBMC實(shí)驗(yàn)組、健康PBMC對(duì)照組、健康PBMC實(shí)驗(yàn)組及健康PBMC卡介苗組。加入IL-23等不同刺激因子后，在體外用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組PBMC中的CD4+、CD4+CD45RO+，及CD45RO+細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)，用ELISA法測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液IFN-γ的濃度。結(jié)果 肺結(jié)核PBMC實(shí)驗(yàn)組中CD4+、CD4+CD45RO+、CD45RO+ 3種細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及IFN-γ的含量分別為：8.645%、24.406%、7.721%、(156.921±152.800)pg/mL，明顯高于肺結(jié)核PBMC對(duì)照組的5.530%、15.811%、5.746%、(93.421±88.728)pg/mL(P<0.05)。健康PBMC實(shí)驗(yàn)組中的CD4+、CD4+CD45RO+、CD45RO+ 3種細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及IFN-γ的含量分別為：7.551%、23.778%、11.971%、(111.000±104.771)pg/mL，高于健康PBMC對(duì)照組的4.884%、20.512%、9.615%、(38.287±30.530)pg/mL(P均>0.05)；肺結(jié)核PBMC對(duì)照組的CD45RO+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(5.746%)明顯低于健康PBMC對(duì)照組(9.615%)(P>0.05)；肺結(jié)核PBMC實(shí)驗(yàn)組的CD45RO+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(7.721%)也明顯低于健康PBMC實(shí)驗(yàn)組(11.971%)(P>0.05)。肺結(jié)核PBMC對(duì)照組的IFN-γ含量(93.421±88.728)pg/mL顯著高于健康PBMC對(duì)照組(38.287±30.530)pg/mL(P<0.05)。結(jié)論 體外細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，IL-23可以促進(jìn)肺結(jié)核患者外周血中CD4+T、CD4+CD45RO+、CD45RO+細(xì)胞的增殖，且促進(jìn)T淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ，參與了對(duì)結(jié)核感染的免疫。

[關(guān)鍵詞]IL-23；肺結(jié)核；T淋巴細(xì)胞；CD4+；CD4+CD45RO+；γ-干擾素

2015年，全國(guó)法定傳染病疫情概況顯示，肺結(jié)核發(fā)病數(shù)居第2位，僅次于病毒性肝炎，死亡數(shù)也居第2位。傳統(tǒng)的結(jié)核診斷方法特異性及敏感性不能滿足臨床需求，化療方案毒副作用大，療程長(zhǎng)。對(duì)于嚴(yán)峻的結(jié)核疫情，肺結(jié)核診療手段極需改進(jìn)。IL-23與結(jié)核分枝桿菌的研究近期主要集中在IL-23與受結(jié)核桿菌感染后的巨噬細(xì)胞的關(guān)系。本研究利用密度梯度離心法分離肺結(jié)核患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng)，再用流式細(xì)胞儀及ELISA的方法，明確IL-23是否可促進(jìn)正常人及結(jié)核病患者的CD4+(主要是CD4+T)和CD4+CD45RO+細(xì)胞(主要是CD4+CD45RO+T細(xì)胞)增殖及T淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ，可為進(jìn)一步了解IL-23在體內(nèi)是否參與了人體對(duì)結(jié)核感染的免疫，以及是否可作為臨床治療結(jié)核的免疫輔助因子提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1研究對(duì)象肺結(jié)核患者的納入：門診和住院病人依據(jù)第6版內(nèi)科學(xué)教材1998年中華醫(yī)學(xué)會(huì)結(jié)核病學(xué)分會(huì)公布的中國(guó)結(jié)核病分類法[1]確認(rèn)為Ⅲ型肺結(jié)核初治患者40例，其中，男22例，女18例，最大年齡為77歲，最小為16歲，平均(39.450±19.327)歲；健康者納入：門診體檢健康成人15例，其中男7人，女8人，最大年齡為63歲，最小為22歲，平均(37.933 ± 13.745)歲；兩組間年齡、性別等臨床信息兩組間相匹配，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。40例肺結(jié)核患者和15例健康成人外周血中分離出的PBMC，在體外培養(yǎng)時(shí)分為肺結(jié)核PBMC對(duì)照組、肺結(jié)核PBMC實(shí)驗(yàn)組、健康PBMC對(duì)照組、健康PBMC實(shí)驗(yàn)組及健康PBMC卡介苗組。本實(shí)驗(yàn)符合所在地區(qū)負(fù)責(zé)人體試驗(yàn)的委員會(huì)所制定的倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)并得到該委員會(huì)的批準(zhǔn)，已取得受試對(duì)象或其親屬的知情同意。

1.2主要試劑Recombinant Human IL-23產(chǎn)品批號(hào)為GB1094111，購(gòu)于R&D systems, Inc公司；淋巴細(xì)胞分離液，批號(hào)041126，購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；Mouse Anti-Human CD4/PE標(biāo)記抗體(FC230422 100test)和Mouse Anti-Human CD45RO/FITC標(biāo)記抗體(F1150415 100test)均購(gòu)于晶美生物工程有限公司。

1.3主要設(shè)備Universal Microplate Reader, 型號(hào)ELx800，購(gòu)于美國(guó)Bio-Tek Instruments公司；流式細(xì)胞儀，型號(hào)FACSC alibur，購(gòu)于美國(guó)BECTON DICKINSON公司。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1淋巴細(xì)胞的分離淋巴細(xì)胞分離液的比重為(1.076±0.001)，采用密度梯度離心法常規(guī)分離出PBMC。加入2 mL含15%小牛血清的RPMI1640(健康各組為3 mL)，調(diào)淋巴細(xì)胞濃度至1.0×106個(gè)/mL，用此方法分離出的PBMC主要是淋巴細(xì)胞，吸出985 μL加入培養(yǎng)板的培養(yǎng)孔，肺結(jié)核PBMC分為2個(gè)培養(yǎng)孔，對(duì)照孔內(nèi)加10 μg PHA和5 μL RPMI1640，實(shí)驗(yàn)組孔內(nèi)加入10 μg PHA和50 ng IL-23。健康人PBMC分為3個(gè)培養(yǎng)孔，第1孔加入10 μg PHA和5 μL RPMI1640；第2孔加入10 μg PHA和50 ng IL-23；第3孔加入10 μg PHA、50 ng IL-23和0.25 g BCG，補(bǔ)充因溶解BCG而損失的體積30 μL，混勻。每孔終末體積均為1 mL。

1.4.2PBMC的培養(yǎng)將1.4.1節(jié)的培養(yǎng)板置于37 ℃，5% CO2孵育箱72 h后，輕輕吸出培養(yǎng)孔內(nèi)上清液50 μL，再加入等量新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48 h。

1.4.3CD4+、CD4+CD45RO+、CD45RO+陽(yáng)性PBMC百分?jǐn)?shù)的檢測(cè)取出培養(yǎng)板，反復(fù)吹吸3～4次，吸出全部液體，裝入1 mL玻皮管內(nèi)，離心后吸出850 μL上清液至另一玻皮管內(nèi)，-29 ℃保存?zhèn)溆谩Ｈ∈Ｏ碌?50 μL含淋巴細(xì)胞的懸液用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)：CD4/PE標(biāo)記抗體和CD45RO/FITC標(biāo)記抗體按說(shuō)明書(shū)操作。24 h內(nèi)用流式細(xì)胞儀測(cè)1萬(wàn)個(gè)PBMC中CD4+、CD4+CD45RO+、CD45RO+3種陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。

1.4.4細(xì)胞培養(yǎng)上清液IFN-γ的定量檢測(cè)取1.4.3節(jié)-29 ℃?zhèn)溆玫募?xì)胞培養(yǎng)上清液，按所檢測(cè)IFN-γ的ELISA試劑盒中所附產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)操作。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析對(duì)于肺結(jié)核PBMC對(duì)照組與肺結(jié)核PBMC實(shí)驗(yàn)組分離出的PBMC，最終比較兩組間CD4+、CD4+CD45RO+、CD45RO+和IFN-γ采用配對(duì)t檢驗(yàn)；肺結(jié)核PBMC對(duì)照組和健康PBMC對(duì)照組上述4個(gè)指標(biāo)的比較、肺結(jié)核PBMC實(shí)驗(yàn)組與健康PBMC實(shí)驗(yàn)組上述4個(gè)指標(biāo)的比較均使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；健康PBMC實(shí)驗(yàn)組與PBMC對(duì)照組、卡介苗組T淋巴細(xì)胞亞群及上清液IFN-γ濃度的兩兩比較，運(yùn)用方差分析，方差齊運(yùn)用Dunnett檢驗(yàn)，P值(雙尾)，方差不齊用Tamhane’T2檢驗(yàn)。設(shè)P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有數(shù)據(jù)均采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 12.0處理。

2結(jié)果

2.1肺結(jié)核PBMC實(shí)驗(yàn)組與肺結(jié)核PBMC對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群及上清液IFN-γ濃度的比較肺結(jié)核PBMC實(shí)驗(yàn)組CD4+、CD45RO+、CD4+CD45RO+陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)以及細(xì)胞培養(yǎng)上清液IFN-γ濃度明顯高于對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05, 見(jiàn)表1)。

表1肺結(jié)核PBMC實(shí)驗(yàn)組與肺結(jié)核PBMC對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群及上清液IFN-γ濃度的比較(n=20)

組別CD4+CD4+CD45RO+CD45RO+IFN-γ肺結(jié)核PBMC對(duì)照組5.530±4.36215.811±14.8945.746±4.30693.421±88.728肺結(jié)核PBMC實(shí)驗(yàn)組8.645±6.31124.406±25.1117.721±6.914156.921±152.800t2.6772.4842.1732.620P0.0150.0220.0430.017

2.2健康PBMC實(shí)驗(yàn)組與健康PBMC對(duì)照組、健康PBMC卡介苗組T淋巴細(xì)胞亞群及上清液IFN-γ濃度的比較健康PBMC實(shí)驗(yàn)組的CD4+、CD4+CD45RO+、CD45RO+3種陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及細(xì)胞培養(yǎng)上清IFN-γ含量均高于健康PBMC對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。健康PBMC實(shí)驗(yàn)組CD4+CD45RO+百分?jǐn)?shù)及上清液IFN-γ含量低于健康PBMC卡介苗組；而健康PBMC實(shí)驗(yàn)組CD4+、CD45RO+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)低于健康PBMC卡介苗組，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05, 見(jiàn)表2)。

表2健康PBMC實(shí)驗(yàn)組與健康PBMC對(duì)照組、健康PBMC卡介苗組T淋巴細(xì)胞亞群及上清液IFN-γ濃度的比較(n=15)

組別CD4+CD4+CD45RO+CD45RO+IFN-γ健康PBMC對(duì)照組 4.844±4.54120.512±8.5089.615±7.71138.287±30.530健康PBMC實(shí)驗(yàn)組 7.551±6.01323.778±10.05511.971±8.362111.000±104.771健康PBMC卡介苗組5.796±4.96025.192±13.44810.297±8.067120.223±102.451F1.7163.4580.3239.497P0.283*雙0.719*0.640*雙0.058*P0.558﹫雙0.984﹫0.794﹫雙0.993﹫

組內(nèi)比較，都與健康PBMC實(shí)驗(yàn)組各值比較。標(biāo)有“*”的數(shù)值表示行為健康PBMC對(duì)照組與健康PBMC實(shí)驗(yàn)組比較的P值，標(biāo)有“﹫”的數(shù)值表示行為健康PBMC卡介苗組與健康PBMC實(shí)驗(yàn)組比較的P值，除標(biāo)明為“雙”外，余P值均為單尾。

2.3肺結(jié)核PBMC對(duì)照組與健康PBMC對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群及上清液IFN-γ濃度的比較肺結(jié)核PBMC對(duì)照組CD4+、CD4+CD45RO+2種陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)百分?jǐn)?shù)均高于健康PBMC對(duì)照組，而CD45RO+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)低于健康PBMC對(duì)照組，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；肺結(jié)核PBMC對(duì)照組PBMC細(xì)胞培養(yǎng)上清液IFN-γ含量明顯高于健康PBMC對(duì)照組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表3)。

表3肺結(jié)核PBMC對(duì)照組與健康PBMC對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群及上清液IFN-γ濃度的比較

組別例數(shù)CD4+CD4+CD45RO+CD45RO+IFN-γ肺結(jié)核PBMC對(duì)照組205.530±4.36215.811±14.8945.746±4.30693.421±88.728健康PBMC對(duì)照組 154.844±4.54120.512±8.5089.615±7.71138.287±30.530t0.4261.0931.7492.526P0.6730.2820.0950.019

2.4肺結(jié)核PBMC實(shí)驗(yàn)組與健康PBMC實(shí)驗(yàn)組T淋巴細(xì)胞亞群及上清液IFN-γ濃度的比較肺結(jié)核PBMC實(shí)驗(yàn)組CD4+、CD4+CD45RO+2種陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及細(xì)胞培養(yǎng)上清液IFN-γ含量均高于健康PBMC實(shí)驗(yàn)組，而CD45RO+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)低于健康PBMC實(shí)驗(yàn)組，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見(jiàn)表4)。

表4肺結(jié)核PBMC對(duì)照組與健康PBMC對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群及上清液IFN-γ濃度的比較

組別例數(shù)CD4+CD4+CD45RO+CD45RO+IFN-γ肺結(jié)核PBMC實(shí)驗(yàn)組208.645±6.31124.406±25.1117.721±6.914156.921±152.800健康PBMC實(shí)驗(yàn)組 157.551±6.01323.778±10.05511.971±8.362111.000±104.771t0.5180.1011.6000.993P(雙尾)0.6080.9200.1210.328

3討論

IL-23與IL-12、IL-27、p80(p40的同二聚體)共同構(gòu)成IL-12家族。IL-23主要由體內(nèi)激活的樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)和巨噬細(xì)胞(macrophage，Mφ)產(chǎn)生。Oppmann等[2]發(fā)現(xiàn)IL-23在體外可刺激PHA激活的T細(xì)胞，以及記憶性T細(xì)胞(CD4+CD45RO+T細(xì)胞)增殖和產(chǎn)生IFN-γ。多個(gè)實(shí)驗(yàn)證明IL-23在結(jié)核免疫中起重要作用[3-4]。IL-23在結(jié)核免疫中的主要作用是促進(jìn)激活的T淋巴細(xì)胞(主要是CD4+CD45RO+T淋巴細(xì)胞)分泌IFN-γ，促進(jìn)激活的CD4+T淋巴細(xì)胞增殖及原始的CD4+T淋巴細(xì)胞分泌IL-17。IL-17再作用于靶細(xì)胞刺激其分泌抗結(jié)核因子如IL-12、IL-2和IFN-γ[5]。IFN-γ是體內(nèi)早期誘發(fā)T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化的重要因子，CD4+T細(xì)胞和CD4+CD45RO+T細(xì)胞在抗結(jié)核等胞內(nèi)菌感染方面發(fā)揮了重要作用，而患結(jié)核病時(shí)，患者體內(nèi)CD4+T/CD8+T比例減小，這可能與結(jié)核患者存在免疫功能低下或異常有關(guān)。最近臨床上發(fā)現(xiàn)一些結(jié)核病例，是因?yàn)槠洧裥图?xì)胞因子(如IL-12、IL-23、IFN-γ等)系統(tǒng)出現(xiàn)缺陷引起[6]。IL-23與肺結(jié)核的研究，目前國(guó)內(nèi)外仍較少，我們的結(jié)果進(jìn)一步表明，在體外實(shí)驗(yàn)中，IL-23顯著促進(jìn)肺結(jié)核患者CD4+T、CD4+CD45RO+、CD45RO+細(xì)胞的增殖，且促進(jìn)T淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ，參與結(jié)核患者對(duì)肺結(jié)核分枝桿菌感染的免疫。

用本次實(shí)驗(yàn)方法分離出的PBMC，以T淋巴細(xì)胞為主。在PBMC中，外周血CD4+單陽(yáng)性細(xì)胞主要為輔助性T 細(xì)胞、T細(xì)胞亞群及少量單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；而CD4+CD45RO+雙陽(yáng)性細(xì)胞及CD45RO+主要為T細(xì)胞亞群及少量單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；此外，流式細(xì)胞儀在計(jì)數(shù)過(guò)程中也可區(qū)分、篩選出淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或單核細(xì)胞。因而本次實(shí)驗(yàn)表明，IL-23在體外可以促進(jìn)肺結(jié)核患者的CD4+細(xì)胞(主要是CD4+T細(xì)胞)、CD4+CD45RO+細(xì)胞(主要是CD4+CD45RO+T細(xì)胞)增殖及其分泌IFN-γ(在PBMC中，只有T淋巴細(xì)胞才能分泌)，因此提高結(jié)核患者細(xì)胞免疫力。而且與對(duì)照組細(xì)胞相比，差異是顯著的。在健康人組的PBMC，這種作用并不顯著。其原因可能是本實(shí)驗(yàn)對(duì)正常人的淋巴細(xì)胞處理與國(guó)外的實(shí)驗(yàn)不同：國(guó)外培養(yǎng)的時(shí)間較長(zhǎng)為14 d，并加入了不同的刺激因子如IL-2、CD23、CD28、CD3[7]。然而，在本實(shí)驗(yàn)中，健康實(shí)驗(yàn)組和健康BCG組的4個(gè)主要指標(biāo)(CD4+、CD4+CD45RO+、CD45RO+、IFN-γ)與對(duì)照組相比均有提高，且有一些具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，如IFN-γ的P值為0.058。因此本實(shí)驗(yàn)表明在一定的培養(yǎng)環(huán)境中，IL-23對(duì)健康人T淋巴細(xì)胞及健康人PBMC受BCG感染情況的影響不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肺結(jié)核患者的淋巴細(xì)胞在體內(nèi)已受結(jié)核桿菌的多種致病因子和體內(nèi)多種免疫因子的長(zhǎng)期刺激而被活化或致敏，推測(cè)是造成肺結(jié)核實(shí)驗(yàn)組4個(gè)指標(biāo)明顯高于肺結(jié)核對(duì)照組(P<0.05)，但健康各組間無(wú)明顯變化(P>0.05)的原因之一。

資料表明，只有5%人群因初次感染結(jié)核分枝桿菌后，細(xì)胞免疫力降低而發(fā)生繼發(fā)型結(jié)核病。傳染病的復(fù)發(fā)，一般認(rèn)為與記憶性T細(xì)胞功能異常有關(guān)。本研究表明IL-23在體外能促進(jìn)結(jié)核病患者CD4+CD45RO+T細(xì)胞增殖，可能具有降低發(fā)生繼發(fā)型結(jié)核病風(fēng)險(xiǎn)的作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證明，缺乏IL-23的小鼠對(duì)結(jié)核桿菌的長(zhǎng)期免疫力受影響[8]。體內(nèi)注射IL-23是否可以促進(jìn)肺結(jié)核患者，尤其是復(fù)治結(jié)核患者的CD4+CD45RO+T細(xì)胞增殖，增強(qiáng)記憶性T細(xì)胞功能，提高治愈率，有待于進(jìn)一步研究。

結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液中IL-23水平明顯升高，也進(jìn)一步證明IL-23可能參與了結(jié)核的免疫[9]。

IL-23受體多態(tài)性的異常，也與患者對(duì)肺結(jié)核的免疫有關(guān)。IL-23受體的一些多態(tài)性，影響了活動(dòng)性肺結(jié)核的嚴(yán)重程度[10]。有病例報(bào)道表明，墨西哥的兩個(gè)家庭因有先天性IL-12/IL-23β1受體缺陷，造成3名家庭成員未成年就死于卡介苗及念珠菌感染[11]。而另有報(bào)道一名患者由于先天性IL-12/IL-23β1受體缺陷而導(dǎo)致她患有輕度的卡介苗感染[12]。這從另外一個(gè)角度證明IL-23與肺結(jié)核患者對(duì)結(jié)核分枝桿菌的免疫有關(guān)。

IL-23還通過(guò)影響分泌IL-17( producing interleukin -17 T helper cells，Th17 )的輔助性T細(xì)胞的形成，進(jìn)一步影響小鼠對(duì)結(jié)核分枝桿菌或卡介苗感染的反應(yīng)[13-14]。腸結(jié)核患者腸黏膜及外周血中IL-23、IL-12、IL-17和IFN-γ的mRNA表達(dá)均增加[15]。IL-23、IL-12、IL-17和IFN-γ是重要的影響宿主對(duì)結(jié)核分枝桿菌免疫的細(xì)胞因子。但在活動(dòng)性肺結(jié)核的兒童中，與健康對(duì)照組相比，外周單個(gè)核細(xì)胞分泌TNF-α、 IL-4、IL-13、IL-17A、IL-21、IL-23水平，并沒(méi)有明顯升高[16]。

本研究表明, 肺結(jié)核對(duì)照組的CD45RO+細(xì)胞數(shù)均少于健康對(duì)照組，肺結(jié)核實(shí)驗(yàn)組的CD45RO+細(xì)胞比值也少于健康實(shí)驗(yàn)組，但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然而，試驗(yàn)的結(jié)果會(huì)因處理因素的不同而存在差異，所以不可排除在其它因素作用下，比如增加入組患者樣本量或者患者體內(nèi)的實(shí)際CD45RO+細(xì)胞計(jì)數(shù)，兩組之間差異的程度會(huì)有所改變。HIV病毒的靶細(xì)胞是CD4+T細(xì)胞，感染HIV的病人CD4+T細(xì)胞明顯低于正常人，因而推測(cè)：CD45RO+細(xì)胞可能是結(jié)核分枝桿菌在血液中作用的靶細(xì)胞，此種CD45RO+細(xì)胞很可能是某種亞型巨噬細(xì)胞。

本次實(shí)驗(yàn)結(jié)核患者及健康人外周血PBMC中的CD4+T百分率與正常人全血相比較低(流式術(shù)測(cè)出值為28%～58%)，原因可能是體外培養(yǎng)中缺乏一些促進(jìn)CD4+T細(xì)胞生長(zhǎng)的因子，但與國(guó)內(nèi)其他類似實(shí)驗(yàn)相近[17]。

此外，IL-23還與多種肺部疾病、感染性疾病及肺部纖維化有關(guān)，如：肺炎克雷白桿菌肺炎、百日咳[18]、慢性阻塞性肺疾病[19]等，并可作為判斷哮喘嚴(yán)重程度的指標(biāo)[20]。人樹(shù)突細(xì)胞分泌的IL-23還參與對(duì)十二指腸賈第鞭毛蟲(chóng)感染的細(xì)胞免疫[21]。前列腺素E2促進(jìn)樹(shù)人樹(shù)突細(xì)胞分泌的IL-23，但會(huì)抑制單核細(xì)胞分泌IL-23[22]。

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[收稿2015-12-30;修回2016-03-10]

(編輯：王福軍)

[基金項(xiàng)目]貴州省衛(wèi)生廳科技基金資助項(xiàng)目(NO: D-237[2005])。

[中圖法分類號(hào)]R521

[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

[文章編號(hào)]1000-2715(2016)03-0270-05

IL-23 induced proliferation of CD4+CD45RO+cells and secretion of IFN-γ in tuberculosis patients

NiuLiming1,DongDeqiong2,YangYuhao2

(1.Department of Respiratory Medicine,Affiliated Hospital of Medical School, Ningbo University, Ningbo Zhejiang 315020, China; 2. Department of Respiratory Medicine,Affiliated Hospital of Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563099, China)

[Abstract]Objective To study the effects of IL-23 on the secretion of IFN-γ and proliferation of CD4+ cells, CD4+CD45RO+cells of patients with pulmonary tuberculosis in vitro.Methods PBMC were isolated from tuberculosis patients and the health adults by centrifugation over Ficoll-Hypaque. PBMC from tuberculosis patients were divided into two groups: TB PBMC control,TB PBMC IL;PBMC from health people were divided into three groups:healthy PBMC control,healthy PBMC IL and healthy PBMC BCG. The percentages of CD4+T,CD4+CD45RO+ and CD45RO+ cells of PBMC were detected by means of FACSC. IFN-γ was measured in supernatants using ELISA method.Results PBMC from TB PBMC IL-23 group produced more IFN-γ than that of the control; there was significant difference in proliferation of CD4+cells, CD4+CD45RO+ cells and CD45RO+ cells between TB PBMC IL-23 and the control: IFN-γ (156.921±152.800)pg/ml, CD4+cells (8.645%), CD4+CD45RO+ cells (24.406%) and CD45RO+ cells (7.721%) versus (93.421±88.728)pg/ml, 5.530%, 15.811%, 5.746%, respectively (P < 0.05). PBMC from TB control group produced more IFN-γ than the cells from healthy PBMC control:(93.421±88.728)pg/ml versus (38.287±30.530)pg/ml (P<0.05). There were no significant differences of CD45RO+ T cell proliferation between TB control group and healthy PBMC control group: 7.721% versus 11.971% (P>0.05).Conclusion We discovered that IL-23 could stimulate significantly secretion of IFN-γ and proliferation of the CD4+ T cells, memory T cells and CD45RO+ cells of tuberculosis patients in vitro. IL-23 may be involved in the immunity against the mycobacterium tuberculosis.

[Key words]IL-23; pulmonary tuberculosis; T cell; CD4+; CD4+CD45RO+; IFN-γ