曲昆鵬　張　倩　楊家昶　胡希怡　曹丙健　宋志剛*　程宗佳

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，泰安271018；2.黃島出入境檢驗檢疫局，青島266555；3.比利時綠賽集團上海有限公司，上海200120)

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β-葡聚糖對肉仔雞生長性能、免疫功能和腸道微環(huán)境的影響

曲昆鵬1張倩2楊家昶1胡希怡1曹丙健1宋志剛1*程宗佳3

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，泰安271018；2.黃島出入境檢驗檢疫局，青島266555；3.比利時綠賽集團上海有限公司，上海200120)

摘要：本試驗旨在研究飼糧中添加β-葡聚糖對肉仔雞生長性能、免疫功能和腸道微環(huán)境的影響。選取1日齡愛拔益加(AA)肉仔雞672只，隨機分為4個組，每組14個重復(fù)，每個重復(fù)12只雞。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧上添加100、150和200 g/t β-葡聚糖的試驗飼糧。試驗期為42 d。結(jié)果表明：1)150 g/t劑量組1～21日齡肉仔雞體增重顯著高于對照組(P<0.05)。2)150 g/t劑量組肉仔雞血清免疫球蛋白含量高于對照組(P>0.05)。3)21日齡時，150 g/t劑量組肉仔雞盲腸內(nèi)乳酸菌數(shù)量顯著高于對照組(P<0.05)，空腸和回腸內(nèi)沙門氏菌數(shù)量顯著低于對照組(P<0.05)；42日齡時，150和200 g/t劑量組肉仔雞盲腸內(nèi)沙門氏菌數(shù)量顯著低于對照組和100 g/t劑量組(P<0.05)。4)飼糧添加β-葡聚糖對42日齡肉仔雞空腸絨毛高度與隱窩深度比值影響顯著(P<0.05)。由此可見，飼糧中添加適量的β-葡聚糖可提高肉仔雞出欄重，改善肉仔雞生長性能，增加盲腸內(nèi)乳酸菌數(shù)量，減少空腸、回腸和盲腸內(nèi)沙門氏菌數(shù)量。

關(guān)鍵詞：β-葡聚糖；肉仔雞；生長性能；免疫功能；腸道微環(huán)境

β-葡聚糖是一類非淀粉性多糖(NSP)，普遍存在于細(xì)菌、真菌、酵母和植物中[1]。有研究認(rèn)為β-葡聚糖中可能具有提高免疫功能的活性基團，作為一種廣譜的免疫調(diào)節(jié)劑促進免疫器官的發(fā)育并強化免疫系統(tǒng)[2]，具有降血脂、降血糖、保護肝臟、抗炎、抗氧化等作用，能提高小鼠對病毒的抵抗能力[3]。我國β-葡聚糖資源豐富，因我國啤酒等發(fā)酵行業(yè)發(fā)展迅速，大量含有β-葡聚糖的酵母泥作為發(fā)酵副產(chǎn)物可被利用，既防止了污染又產(chǎn)生了經(jīng)濟效益[4]。β-葡聚糖有增強動物免疫功能的效果，Sang等[5]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加一定水平的β-葡聚糖可提高小龍蝦的免疫力，提高小龍蝦的成活率。李志清等[6]研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加β-葡聚糖有提高肉仔雞非特異性免疫力的趨勢。吳春玉等[7]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加β-葡聚糖可提高花鱸的生長性能以及抗氨氮應(yīng)激能力。為了更好地利用β-葡聚糖作為飼料添加劑，本試驗以白羽肉雞為對象，研究β-葡聚糖對愛拔益加(AA)肉仔雞生長性能、免疫器官、血清免疫指標(biāo)和腸道菌群的影響。

1材料與方法

1.1試驗設(shè)計

選取體重相近的1日齡AA肉仔雞672只，隨機分為4組(1個對照組和3個β-葡聚糖添加組)，每組14個重復(fù)，每個重復(fù)12只雞(均為公雞)。試驗期42 d，分1～21日齡和22～42日齡2個飼養(yǎng)階段。肉仔雞飼喂玉米-豆粕型顆粒料，對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧上添加100、150和200 g/t的β-葡聚糖(購自Algal Scientific Cooperation, MI, USA)的試驗飼糧。肉仔雞4層籠養(yǎng)?；A(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1　基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1　Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis)　%

1)維生素預(yù)混料和礦物質(zhì)預(yù)混料為每千克飼糧提供 Vitamin premix and mineral premix provided the following per kg of diets：VA 9 000 IU，VD32 000 IU，VE 11.0 IU，VK 1.00 mg，硫胺素 thiamine 1.20 mg，核黃素 riboflavin 5.80 mg，煙酸 niacin 66.0 mg，泛酸 pantothenic acid 10.0 mg，吡哆醇 pyridoxine 2.60 mg，生物素 biotin 0.20 mg，葉酸 folic acid 0.70 mg，VB120.012 mg，Mn 100 mg，Zn 75.0 mg，F(xiàn)e 80.0 mg，I 0.65 mg，Cu 8.00 mg，Se 0.35 mg。

2)營養(yǎng)水平為計算值。Nutrient levels were calculated values.

1.2飼養(yǎng)管理

試驗全期為42 d，分為前期(1～21日齡)和后期(22～42日齡)。整個試驗期為籠養(yǎng)，自由采食和飲水。試驗開始時溫度為35 ℃，隨后每周降低2～3 ℃，直到降到23 ℃。相對濕度保持在45%，溫度和濕度隨肉仔雞生長情況做相應(yīng)調(diào)整。執(zhí)行24 h光照程序。1～3日齡肉仔雞飲水中添加電解多維和葡萄糖，按照正常免疫程序進行免疫接種，其他管理措施與常規(guī)飼養(yǎng)管理相同。

1.3樣品采集

21和42日齡的早晨，每個組在飼喂前稱重，稱重前不禁食。每次稱量雞的重量和剩余料量，計算1～21日齡、22～42日齡和全期(1～42日齡)的體增重、采食量、死淘率、料重比和歐洲生產(chǎn)指數(shù)(EPI)。嚴(yán)格記錄死亡和淘汰的雞只數(shù)量，死亡和淘汰的雞稱重，以調(diào)整以上的數(shù)據(jù)并定期計算。21和42日齡時屠宰，每個重復(fù)取1只雞，取法式囊和脾臟稱重；取空腸、回腸混合食糜和盲腸食糜；取空腸、回腸切片樣。22和42日齡時，稱重稱料后，每個重復(fù)抽取1只雞并且翅靜脈采血，離心分離血清。

1.4指標(biāo)分析

1.4.1生長性能計算公式

體增重(WG)=總雞重+死亡和

淘汰的雞重-初始雞重；

死淘率(DR，%)=(死亡和淘汰的雞數(shù)/

總雞數(shù))×100；

料重比(F/G)=采食量/體增重；

EPI=10000×平均體重(kg)×成活率(%)/

(料重比×天數(shù))。

1.4.2免疫功能指標(biāo)

免疫器官相對重量以免疫器官重/活重表示。

血清免疫指標(biāo)：內(nèi)毒素(ET)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)含量采用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定，所需酶聯(lián)免疫檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所，使用ELx808超級酶標(biāo)儀(Gene有限公司)。

1.4.3腸道指標(biāo)

以平板計數(shù)法測定空腸、回腸混合食糜和盲腸食糜內(nèi)乳酸菌和沙門氏菌數(shù)量：將25 g食糜置于含225 mL滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶內(nèi)，充分振搖制成1∶10的均勻稀釋液，依次以10倍梯度稀釋，選擇2～3個適宜的稀釋度，移取1 mL稀釋液于滅菌平皿內(nèi)(每個稀釋度做2個平皿)；稀釋液移入平皿后，立即將46 ℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約15 mL，混合均勻，待瓊脂凝固后反轉(zhuǎn)平板，置37 ℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)(24±2) h后計算菌落數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即得每克食糜含菌落總數(shù)。

空腸、回腸切片樣采集后使用切片機(Leica，德國)制備成組織切片，染色并封片后在10×4倍光鏡(NIKON ECLIPSE-80i)下觀測其形態(tài)結(jié)構(gòu)并利用NIS-Elements D 4.20.00軟件測量空腸、回腸絨毛高度和隱窩深度。每個樣本觀察2個非連續(xù)切片，每張切片選取3視野，每個視野分別測定10組數(shù)據(jù)，其平均值作為1個測定數(shù)據(jù)，計算空腸、回腸絨毛高度與隱窩深度比值(V/C)。

1.5統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，利用SAS 9.1統(tǒng)計軟件中的ANOVA過程進行單因子方差分析，P<0.05為差異顯著。

2結(jié)果與分析

2.1β-葡聚糖對肉仔雞生長性能的影響

如表2所示，在1～21日齡，飼糧添加β-葡聚糖對肉仔雞體增重和EPI有顯著影響(P<0.05)。150 g/t劑量組體增重顯著高于對照組及100、200 g/t劑量組(P<0.05)。隨著飼糧β-葡聚糖添加水平增加，肉仔雞的EPI先升高后降低，在150 g/t劑量組達到最大值。另外，飼糧添加β-葡聚糖具有降低料重比(P=0.087 9)和死淘率(P=0.081 7)的趨勢。

表2　1～21日齡肉仔雞生長性能Table 2　Growth performance of broilers aged from 1 to 21 days

同行數(shù)據(jù)標(biāo)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

如表3所示，在22～42日齡，飼糧添加β-葡聚糖對肉仔雞體增重、采食量、料重比和死淘率均無顯著影響(P>0.05)。

表3　22～42日齡肉仔雞生長性能Table 3　Growth performance of broilers aged from 22 to 42 days

如表4所示，1～42日齡，飼糧添加β-葡聚糖對肉仔雞死淘率具有顯著影響(P<0.05)。與100和200 g/t劑量組相比，150 g/t劑量組死淘率顯著提高(P<0.05)。除此之外，飼糧添加β-葡聚糖對肉仔雞體增重、采食量、料重比和EPI均無顯著影響(P>0.05)。

表4　1～42日齡肉仔雞生長性能Table 4　Growth performance of broilers aged from 1 to 42 days

2.2β-葡聚糖對肉仔雞免疫器官的影響

如表5所示，在21和42日齡，飼糧添加β-葡聚糖對肉仔雞脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)均無顯著影響(P>0.05)。

表5　21和42日齡肉仔雞免疫器官指數(shù)Table 5　Immune organ index of broilers at 21 and 42 days of age　g/kg

2.3β-葡聚糖對肉仔雞血清免疫指標(biāo)的影響

如表6所示，在21和42日齡，飼糧添加β-葡聚糖對肉仔雞血清內(nèi)毒素、IgG和IgA含量均無顯著影響(P>0.05)。

表6　21和42日齡肉仔雞血清免疫指標(biāo)Table 7　Serum immune indexes of broilers at 21 and 42 days of age

2.4β-葡聚糖對肉仔雞腸道菌群的影響

如表7所示，21日齡時，200 g/t劑量組肉仔雞空腸和回腸內(nèi)乳酸菌數(shù)量顯著高于100和150 g/t劑量組(P<0.05)；150 g/t劑量組肉仔雞盲腸內(nèi)乳酸菌數(shù)量顯著高于對照組和100 g/t劑量組(P<0.05)。42日齡時，飼糧添加β-葡聚糖對肉仔雞空腸和回腸內(nèi)乳酸菌數(shù)量有顯著影響(P<0.05)；對肉仔雞盲腸內(nèi)乳酸菌數(shù)量影響不顯著(P>0.05)。200 g/t劑量組肉仔雞空腸和回腸內(nèi)乳酸菌數(shù)量顯著高于對照組(P<0.05)。

表7　21和42日齡肉仔雞腸道乳酸菌數(shù)量Table 7　Intestinal tract Lactobacillus number of broilers at 21 and 42 days of age　lg(CFU/g)

如表8所示，21日齡時，飼糧添加β-葡聚糖對肉仔雞空腸和回腸內(nèi)沙門氏菌數(shù)量有顯著影響(P<0.05)；對盲腸內(nèi)沙門氏菌數(shù)量影響不顯著(P>0.05)。其中150 g/t劑量組肉仔雞空腸和回腸內(nèi)沙門氏菌數(shù)量顯著低于對照組(P<0.05)。42日齡時，飼糧添加β-葡聚糖對肉仔雞空腸和回腸內(nèi)沙門氏菌數(shù)量無顯著影響(P>0.05)；對盲腸內(nèi)沙門氏菌數(shù)量有顯著影響(P<0.05)。150和200 g/t劑量組肉仔雞盲腸內(nèi)沙門氏菌數(shù)量顯著低于對照組和100 g/t劑量組(P<0.05)。

2.5β-葡聚糖對肉仔雞小腸V/C的影響

如表9所示，21日齡時，飼糧添加β-葡聚糖對肉仔雞空腸和回腸V/C無顯著影響(P>0.05)；42日齡時，200 g/t劑量組肉仔雞空腸V/C顯著高于150 g/t劑量組(P<0.05)；飼糧添加β-葡聚糖對V/C無顯著影響(P>0.05)。

3討論

3.1β-葡聚糖對肉仔雞生長性能的影響

本試驗結(jié)果表明，飼糧添加β-葡聚糖(150 g/t)提高肉仔雞出欄重，改善肉仔雞生長性能。有報道指出，添加作為非淀粉多糖的β-葡聚糖會增加腸道黏度，影響?zhàn)B分吸收，進而抑制動物生長[8]。而由于腸胃難以吸收β-葡聚糖，存在于腸道的益生菌可以將其利用促進益生菌生長，維護腸道的健康[9]?？赡苁?種作用效果互相影響導(dǎo)致了100和200 g/t劑量組與對照組相比生長性能無顯著差異。而150 g/t劑量組相比對照組擁有更高的體增重和出欄重，說明添加150 g/t β-葡聚糖有利于提高肉仔雞生長性能，而當(dāng)β-葡聚糖添加量達到200 g/t時會對肉仔雞生產(chǎn)造成不利的影響。

表8　21和42日齡肉仔雞腸道沙門氏菌數(shù)量Table 8　Intestinal tract Salmonella number of broilers at 21 and 42 days of age　lg(CFU/g)

表9　21和42日齡肉仔雞小腸絨毛高度與隱窩深度比值Table 9　The ratio of villus height to crypt depth (V/C) of small intestine of broilers at 21 and 42 days of age

3.2β-葡聚糖對肉仔雞免疫功能的影響

本試驗發(fā)現(xiàn)，21日齡時150 g/t劑量組相比對照組擁有更高的法式囊指數(shù)；42日齡時免疫器官指數(shù)無顯著差異。這與劉影等[10]對肉仔雞飼糧添加β-葡聚糖的研究結(jié)果一致。該結(jié)果提示β-葡聚糖對肉仔雞免疫功能的調(diào)節(jié)可能是通過影響肉仔雞法氏囊來實現(xiàn)的。而21日齡前法氏囊的良好發(fā)育對肉仔雞體液免疫功能以及B淋巴細(xì)胞的免疫功能起著至關(guān)重要的作用。說明補充β-葡聚糖(150 g/t)可有效提高肉仔雞免疫能力。

本試驗發(fā)現(xiàn)，補充β-葡聚糖(150 g/t)可以提高肉仔雞血清中IgG的含量。這與周懌等[11]研究β-葡聚糖對犢牛免疫指標(biāo)影響的結(jié)果類似，也和Benda等[12]研究β-葡聚糖調(diào)節(jié)山羊體液免疫的結(jié)果類似。IgG是機體內(nèi)存在的一類廣泛參與體液免疫反應(yīng)的球蛋白，具有結(jié)合抗原、激活補體和調(diào)節(jié)作用等生物學(xué)功能。這說明β-葡聚糖的補充可能對提高肉仔雞體液免疫能力有一定作用，但對于在未感染外界微生物情況下血清IgG含量提高的具體意義、好壞利弊仍需進一步的研究探索。

3.3β-葡聚糖對肉仔雞腸道微環(huán)境的影響

本試驗發(fā)現(xiàn)，適量補充β-葡聚糖(150或200 g/t)有助于腸道內(nèi)乳酸菌的生長并抑制沙門氏菌的生長。潘樹德等[13]研究發(fā)現(xiàn)，添加β-葡聚糖對盲腸中乳酸桿菌數(shù)量的影響呈提高趨勢。作為機體內(nèi)的第一道防御屏障，胃腸道內(nèi)擁有良好的微生物菌群對動物生長性能有一定的促進作用。難以被消化道吸收的β-葡聚糖被乳酸菌利用并用于其生長，乳酸菌能夠產(chǎn)生有機酸(乳酸、乙酸、丙酸等)、過氧化氫等化合物，能夠抑制病原菌的增殖，因此適量補充β-葡聚糖可能在一定程度的抑制沙門氏菌的生長和增殖，由于未對肉仔雞糞便進行觀察，其潛在意義仍需進一步研究。

本試驗發(fā)現(xiàn)，200 g/t劑量組肉仔雞在42日齡時空腸V/C最大。150 g/t劑量組肉仔雞V/C顯著小于對照組，可能因為隨著β-葡聚糖添加量增加其抗?fàn)I養(yǎng)作用隨之增加且在添加量為150 g/t時效果尤為顯著所致。肉仔雞消化吸收功能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)，小腸的正常結(jié)構(gòu)保證了養(yǎng)分充分的消化和吸收。小腸吸收養(yǎng)分的主要部位是小腸絨毛，V/C能綜合的反映小腸的功能情況也是是衡量小腸消化吸收功能的常用指標(biāo)[14]。如果腸道黏膜上皮絨毛萎縮，則表現(xiàn)為小腸黏膜上皮絨毛高度減小，隱窩深度增加，導(dǎo)致吸收養(yǎng)分的能力下降。如果V/C增大，小腸吸收養(yǎng)分的面積就隨之增大，吸收養(yǎng)分的能力就得到加強。飼糧中添加200 g/t β-葡聚糖在一定程度上加強了肉仔雞空腸腸段的消化吸收能力。

4結(jié)論

飼糧中添加適量的β-葡聚糖可提高肉仔雞出欄重，改善肉仔雞生長性能，增加盲腸內(nèi)乳酸菌數(shù)量，減少空腸、回腸和盲腸內(nèi)沙門氏菌數(shù)量。

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(責(zé)任編輯武海龍)

doi：10.3969/j.issn.1006-267x.2016.07.030

收稿日期：2016-01-15

基金項目：山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系家禽創(chuàng)新團隊項目(SDAIT-13-011-08)

作者簡介：曲昆鵬(1993—)，男，山東威海人，碩士研究生，動物營養(yǎng)與飼料科學(xué)專業(yè)。E-mail： 1512264817@qq.com *通信作者：宋志剛，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail： naposong@qq.com

中圖分類號：S831.5

文獻標(biāo)識碼：A

文章編號：1006-267X(2016)07-2235-08

*Corresponding author, professor, E-mail: naposong@qq.com

Effects of β-Glucan on Growth Performance, Immune Function and Intestinal Micro Environment of Broilers

QU Kunpeng1ZHANG Qian2YANG Jiachang1HU Xiyi1CAO Bingjian1SONG Zhigang1*CHENG Zongjia3

(1. College of Animal Science and Technology, Shandong Agricultural University, Tai’an 271018, China;2. Huangdao Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Qingdao 266555, China;3. Belgian Green Groups in Shanghai, Shanghai 200120, China)

Abstract:This experiment was conducted to investigate the effects of diet adding β-glucan on growth performance, immune function and intestinal micro environment of broilers. A total of 672 one-day-old Arbor Acres (AA) broilers were randomly allocated to 4 groups with 14 replicates per group and 12 chickens per replicate. The control group was fed a basal diet, while the experimental groups were fed the basal diet supplemented with 100, 150 and 200 g/t β-glucan, respectively. The experiment lasted for 42 days. The results showed as following: 1) the weight gain of broilers aged from 1 to 21 days in 150 g/t groups was significantly higher than that in control group (P<0.05). 2) The serum immunoglobulin content of broilers in 150 g/t group was higher than that in control group (P>0.05). 3) At 21 days of age, the caecal Lactobacillus number of broilers in 150 g/t group was significantly higher than that in control group (P<0.05), while the number of Salmonella in jejunum and ileum was significantly lower than that in control group (P<0.05). At 42 days of age, the caecal Salmonella number of broilers in 150 and 200 g/t group was significantly lower than that in control group and 100 g/t group (P<0.05). 4) The villus height to crypt depth ratio in the jejunum of broilers was significantly influenced by dietary β-glucan supplementation (P<0.05). In conclusion, moderate β-glucan supplementation can improve the commercial body weight, growth performance and the number of Lactobacillus in caecum, while reduce the number of Salmonella in jejunum, ileum and caecum.[Chinese Journal of Animal Nutrition, 2016, 28(7)：2235-2242]

Key words:β-glucan; broilers; growth performance; immunity function; intestinal micro environment