孫 彥，毛培勝

(1.中國農業(yè)大學牧草種子實驗室，北京 100193；2.國際種子檢驗協會認可實驗室，北京 100193；3.農業(yè)部牧草與草坪草種子質量監(jiān)督檢驗測試中心(北京)，北京 100193；4.草業(yè)科學北京市重點實驗室，北京 100193)

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國際種子檢驗協會實驗室能力驗證方法對健全我國草種子實驗室能力驗證體系的啟示

孫 彥1,2,3,4，毛培勝1,2,3,4

(1.中國農業(yè)大學牧草種子實驗室，北京 100193；2.國際種子檢驗協會認可實驗室，北京 100193；3.農業(yè)部牧草與草坪草種子質量監(jiān)督檢驗測試中心(北京)，北京 100193；4.草業(yè)科學北京市重點實驗室，北京 100193)

摘要：本文論述種子實驗室能力驗證定義與意義，介紹國際種子檢驗協會實驗室能力驗證計劃、驗證的范圍及能力驗證結果評定的方法，并闡述和分析了我國草種子檢驗實驗室能力驗證現狀和存在問題，給出了建立健全草種子實驗室能力驗證體系的一些建議。

關鍵詞：草種子；種子實驗室；能力驗證體系

1實驗室能力驗證的定義與意義

實驗室能力驗證(Proficiency Testing，PT)是利用實驗室間比對(Inter-laboratory Comparison)確定某實驗室檢測/校準能力的一項活動，包括由實驗室自身、實驗室客戶、認可或法定機構等對實驗室進行的評價[1]。 實驗室能力驗證是維持國際互認的技術基礎，是有效的質量控制手段。能力驗證已成為國際以及國家各實驗室的重要質控方法和證明其技術能力的主要手段。所以，借鑒國際種子實驗室能力驗證方法與成功的經驗，建立健全我國草種子實驗室能力驗證體系具有非常重要的意義。

2國際種子實驗室能力驗證活動

國際種子實驗室能力驗證活動的組織者必須是國際互認并認可的組織，如實驗室認可國際合作組織(International Laboratory Accreditation Cooperation，ILAC)、亞太實驗室認可合作組織(Asia Pacific Laboratory Accreditation Cooperation，APLAC)、歐洲認可合作組織(European co-operation for Accreditation，EA)等；國際和區(qū)域性計量組織，如國際計量委員會(International Committee of Weights and Measures,CIPM)、亞太計量規(guī)劃組織(Asia Pacific Metrology Programme,APMP)等；行業(yè)國際權威機構組織如糧農組織(Food and Agriculture Organization，FAO),國際種子檢驗協會(International Seed Testing Association，ISTA)、世界衛(wèi)生組織(World Health Organization，WHO)等。目前，草種子實驗室能力的驗證主要來自于國際種子檢驗協會(ISTA)和農業(yè)部組織的比對試驗。ISTA認可實驗室參加每年ISTA舉行的能力驗證計劃，會員實驗室自愿參加，能力驗證的水平與實驗室認可相關聯。截至2014年1月，ISTA共有會員207個，已認可的實驗室127個(表1)[2]。凈度分析及其它植物種子數鑒定、發(fā)芽、水分含量測定、扦樣等檢驗項目認可的實驗室數量相對最多，大小分級、X射線、特定性狀檢驗、活力項目相對就少(表2)。

3能力驗證的計劃

ISTA能力驗證計劃由能力驗證委員會(Proficiency Test Committee)主席組織制定，制定周期一般3年(…,2005-2007年、2008-2010年、2011-2013年、2014-2016年,…)，每年根據出現的突出問題可以對下一年計劃做調整。一年舉行3次能力驗證，時間為每年的2月、6月和10月初。驗證所用的樣品也由能力驗證委員會指定實驗室準備，委員會再將任務下派ISTA秘書處，秘書處負責樣品的分發(fā)、檢測數據的匯總、檢測結果的統計分析和等級評定。參加能力驗證的實驗室接收到樣品后，在規(guī)定時間內根據標準進行檢測，并把數據結果返回ISTA秘書處，待ISTA秘書處將總的統計分析結果與等級評定反饋給各個實驗室。若對結果有異議可以向秘書處申請說明。ISTA能力驗證的項目有凈度、其它植物種子數、發(fā)芽、水分、生活力等，其中發(fā)芽試驗次數最多，其次為凈度分析和其它植物種子數測定(表2)。轉基因和健康檢驗是由其相應委員會單獨組織并發(fā)布結果。能力驗證要求認可實驗室必須參加，而會員實驗室自愿參加。

表1　世界ISTA部分會員實驗室與認可實驗室數量(2014年1月止)[2]

表2　ISTA認可項目實驗室數量(2014年1月止)[2]

4ISTA能力驗證樣品應用種類

4.1凈度與其它植物種子數

植物種類涉及作物、蔬菜、花卉以及牧草和草坪草的26個種，13年間共34次(表3)。種類多，覆蓋度廣，在能力驗證中，其它植物種子數的鑒定為難度最高，作為參與能力驗證實驗室事先不清楚提供者所提供的試驗樣品所摻入的其它植物種子來自何處，哪個地區(qū)、哪個國家，對于相對熟悉地區(qū)種可能容易，但對從未涉及的地域種的鑒定尤為困難。能準確鑒定種或屬還需要檢驗員具有相當的經驗累積與相關的知識。

4.2發(fā)芽

發(fā)芽能力驗證應用的植物種類多、覆蓋更廣，涉及作物、蔬菜、花卉以及牧草和草坪草、樹木等的32個種，13年間40次(表3)，每個種類在發(fā)芽溫度、發(fā)芽床選擇、預處理等條件均有所不同，主要考核掌握參加實驗室對不同檢驗方法與技術能力。

4.3水分測定

水分測定應用種類涉及牧草、作物、蔬菜共10個種11次(表 4)。主要是考核實驗室對水分測定的各種方法，如：粗磨與細磨、低溫或高溫的掌握情況，使實驗室了解自己，也從不同方面得到鍛煉與提高。

4.4生活力測定

生活力測定已進行10次，應用了牧草、作物、蔬菜等8個種(表5)。主要驗證的是對生活力染色前處理方法的掌握。如預濕的方法以及種子處理方法(切或不切、橫切、縱切等)、不同種染色的技術。

4.5其它檢驗項目能力驗證

活力檢測能力驗證，近13年已經進行了4次，主要采用豌豆，因豌豆的活力測定方法比較完善。轉基因能力驗證每年至少一次，2014年底已進行了21次。主要應用了玉米、大豆、棉花、亞麻。后續(xù)還會采用油菜、苜蓿、水稻或小麥等種類進行。健康檢驗主要為蔬菜和作物及油料作物，如菜豆、蕓苔屬、胡蘿卜、向日葵、大麥、水稻等。也有樹種如濕地松(Pinuselliottii)和火炬松(P.taeda)?；旌戏N子測定從2011年開始，基本上每年訓練一次，到2014年底共進行了4次。一般混合種子中混有20種左右種子，作物、蔬菜、花卉、牧草和草坪草、雜草等種子混合，鑒定出全部種屬。種及品種鑒定是從2009年開始有比較試驗，種類應用到大豆、水稻、小麥、玉米、小黑麥，到2011年才正式列入能力驗證項目。

5牧草與草坪草種子實驗室能力驗證結果評定方法

5.1凈度、發(fā)芽、水分、生活力的檢測結果評定

國際種子檢驗協會(ISTA)對凈度、發(fā)芽、水分、生活力的檢測結果評定均通過Tattersfield(1979)統計分析方法評定[3]，采用Z比分值(Z-scores) 。計算公式：

Zi=(Xi-X)/S.

式中，Xi為某個實驗室均值，X為全部參加測試的實驗室均值，S為標準差，數據只來源于認可的實驗室。

Z比分值是很好地反映一個實驗室檢測分析能力的評價指標。對于檢驗項目中單個成分(如：凈度分析中凈種子)Z比分值絕對值小于2.00，表示結果滿意。Z比分值絕對值大于 2.00而小于2.68，表示結果有疑或有問題，鼓勵實驗室復查結果，并再進行驗證。Z比分值絕對值大于2.68，表示結果為不滿意，實驗室應積極探討差異的原因，開展糾正措施。Z比分值3個樣品的累積偏差則更好地代表實驗室的檢測能力。表6是凈度分析、發(fā)芽、水分和生活力項目檢測的等級評價系統。凈種子和正常種苗數據是凈度與發(fā)芽等級評定的數據統計基礎，不正常種苗和未發(fā)芽種子數在試驗結果報道中有，但不影響等級評定。

表3　能力驗證中凈度分析及其它植物種子數目、發(fā)芽試驗應用種類和出現頻次(2002-2014年)[2]

表4　ISTA能力驗證中水分測定能力驗證應用的種類(2002-2014年)[2]

表5　ISTA能力驗證中生活力測定能力驗證應用的種類(2002-2014年)[2]

注：W,水中;S,染色。

Note: W, water; S, staining.

表6　凈度、發(fā)芽、水分和生活力評級系統[2]

5.2其它植物種子數檢測結果評定

其它植物種子數測定結果評價等級取決于對樣品中所添加的其它植物種子的檢出率并將其正確鑒定的能力。

表7中列出對樣品所添加的其它植物種子每個種的檢出率，按檢出率配置一定的因子，如檢出正確粒數百分比≥90%，給予配置因子3。對所有添加的其它植物種子按照以下公式計算檢出正確率，根據檢出正確率來評定等級(表8)

表7　基于實際檢出率定義的配置因子[2]

表8　其它植物種子數基于檢出正確率的等級評定[2]

檢出正確率=

根據每次獲得評定等級賦予相應的貢獻值(表9)，6次貢獻值之和分別在20～30、21～27、16～20、<16時，分別獲得綜合評價的等級為A、B、C、BMP。

6我國牧草與草坪草種子實驗室能力驗證狀況

我國合格評定國家認可委員會(CNAS)于2009年首次召開了能力驗證論壇，開啟我國能力驗證的先河。國際種子檢驗協會每年1月發(fā)布《國際種子檢驗規(guī)程》[4]更新版本，我國草種子檢測標準更新緩慢，目前還在應用2001年版本，新版還沒有發(fā)布，早已不適宜市場與國家的需求，為了更好地適應大市場需求，建議最好2～3年就更新版本。

表9　6次能力驗證結果的綜合評價[2]

我國草種檢測機構目前已有兩家加入ISTA成為會員實驗室，中國農業(yè)大學牧草種子實驗室和農業(yè)部牧草與草坪草種子質量監(jiān)督檢驗測試中心(蘭州)，其中中國農業(yè)大學牧草種子實驗室從1998年成為ISTA會員，2013年6月通過ISTA認可，成為ISTA認可實驗室，成為會員實驗室就一直參加ISTA能力驗證計劃。國內實驗室間開展能力驗證嚴格上說是從2011年開始，每年舉辦一次，全國草種子檢測中心/站均自愿參加，在一定程度上提高了草種子檢測機構對實驗室檢驗技術的重視，也對實驗室檢驗員技術水平得以驗證。3年來能力驗證應用的種類有紫花苜蓿和早熟禾，主要測定凈度、發(fā)芽、其它植物種子數、水分測定4項，結果評定等級采用Z比分值。我國草種子檢驗實驗室數量相對少，其中部級只有5個，Z比分值計算公式中標準差S的計算基數少，沒有更好的參照標準，所以對整體結果評定會有一定程度的影響。ISTA的標準差S數據只來源于認可實驗室數據，ISTA有100多個認可實驗室。目前我國草種子檢測機構更多地采用實驗室內檢驗員的比對試驗，來進行能力自身驗證，技術成熟的、有經驗的老檢驗員作為參照。這在很大程度上取決于老檢驗員的能力。不易發(fā)現實驗室內潛在存在的問題，也不易了解整體水平。國內草種子質檢機構缺乏健全的能力驗證體系，無法從整體上清楚地掌握各個實驗室的檢測能力以及檢驗員的檢測水平，無法及時發(fā)現實驗室間的技術差距，實驗室就無法得到及時提升與糾正錯誤。所以，急需建立健全草種子質檢機構實驗室能力驗證體系，開展技術交流，促進種子檢測技術的更大進步。

7建立健全草種質檢機構能力驗證體系

7.1質檢機構要正確認識與重視能力驗證

能力驗證不單單是一個活動，其目的是不斷發(fā)現與解決存在的問題，促進與提高實驗室的檢測水平與能力，增進實驗室間的交流與溝通，有利于監(jiān)管部門掌握整體與個體的檢測水平。實驗室可以通過參加能力驗證活動，了解實驗室內部檢驗員的檢測能力和實驗室整體的檢測水平，以便實驗室有計劃地進行改進與提高，同時還增強檢驗人員、管理者和實驗室外部服務客戶的信心[5]。所以，能力驗證活動一定要積極參加并予以重視。

7.2建立全國草種子實驗室能力驗證信息平臺

信息平臺是交流與溝通的渠道，有助于互相取長補短，互惠互利，加強信息化建設，并加大能力驗證的宣傳工作。目前，我國還沒有草種子實驗室能力驗證的信息平臺，我國是世貿組織成員，已建立了自由貿易區(qū)，加上中澳自由貿易協定簽署，更需要檢測機構為草種子在國際貿易中提供準確可靠的數據與技術支撐，更需要提升國內實驗室檢測能力與信息交流平臺。為了與國際接軌，建立全國草種子實驗室能力驗證信息平臺勢在必行。

7.3國家主管部門委派或指定提供能力驗證計劃的機構(能力驗證計劃提供者)

能力驗證計劃的機構(能力驗證計劃提供者)應由國內技術能力較強又有相應資質的機構承擔，最好由國家主管部門或認可的行業(yè)權威機構根據國內狀況委派或指定，準備測試的樣品才能保證均一性和穩(wěn)定性。能力驗證提供者對掌握的所有參加者的信息包括他們的數據統計及檢測結果處于完全保密狀態(tài)，不得擅自泄露給他人。

7.4加大加強檢測范圍的能力驗證，注重檢測能力提升

目前，國內能力驗證計劃檢測項目通常為凈度、發(fā)芽、其它植物種子數、水分。每年只舉行一次，其它項目如生活力、活力、混合種子等均未涉及。在國際市場，需求范圍逐漸擴大，進行能力驗證的項目也應相應增加，不但在檢驗項目上增加，還要涉及各個不同的植物種類，并注重技術方法的能力驗證。

總之，借鑒國際種子實驗室能力驗證方法，建立健全我國草種子實驗室能力驗證體系，形成我國草種子實驗室能力驗證的規(guī)模，樹立自己的權威性，草種子實驗室能力驗證體系將成為持續(xù)提升我國相關檢測機構能力水平的重要技術保障。

參考文獻(References)

[1]中國合格評定國家認可委員會.能力驗證規(guī)則CNAS-RL02：2007.北京：中國合格評定國家認可委員會，2007-04.

China National Accreditation Service for Conformity Assessment. Rules for Proficiency Testing CNAS-RL02：2007.Beijing:China National Accreditation Service for Conformity Assessment,2007-04.(in Chinese)

[2]International Seed Testing Association-ISTA.ISTA online.(2014-12-31).http://seedtest.org/en/home.html.

[3]Tattersfield J G.Assessment of results of referee tests on germination.Seed Science and Technology,1979,7(2):247-257.

[4]ISTA.International Rule for Seed Testing. Bassersdorf,CH-Switzerland:International Seed Testing Association,2014.

[5]毛燕,閆林.實驗室參加能力驗證活動的意義分析.食品安全質量檢測學報，2014,5(9)：2958-2961.

Mao Y,Yan L,Benefits analysis of laboratories participation in proficiency testing programs.Journal of Food Safety and Quality,2014,5(9)：2958-2961.(in Chinese)

(責任編輯武艷培)

DOI:10.11829/j.issn.1001-0629.2014-0537

*收稿日期：2014-11-27接受日期：2015-12-08

基金項目：公益行業(yè)科研專項“苜蓿高效種植技術研究與示范”(201403048)；國家牧草產業(yè)技術體系(CARS-35)

通信作者：孫彥(1965-)，女(蒙古族)，內蒙古科左中旗人，副教授，博士，主要從事草坪科學及草種子質量檢驗研究。E-mail:ctsoffice@163.com

中圖分類號：S339.9+1

文獻標識碼：A

文章編號：1001-0629(2016)3-0540-07* 1

Corresponding author:Sun YanE-mail:ctsoffice@163.com

The laboratory proficiency test system of International Seed Testing Association and its implication for herbage seed in China

Sun Yan1，2，3，4, Mao Pei-sheng1,2,3,4

(1.Forage Seed Laboratory, China Agricultural University, Beijing 100193, China;2.International Seed Testing Association Accredited Laboratory, Beijing 100193, China;3.Beijing Forage and Turfgrass Seed Quality Inspection and Testing Centre, Ministry of Agriculture, Beijing 100193, China;4.Beijing Key Laboratory of Grassland Science, Beijing 100193, China)

Abstract:The definition and significance of the laboratory proficiency test (PT) were stated in this paper. The programme, scope and the results evaluation method of PT of International seed testing association (ISTA) were introduced. The current situation and problems of herbage seed testing in China were described, and some suggestions for establishing and improving the laboratory PT system of China were given.

Key words:forage and turfgrass seed; forage and turfgrass seed test laboratory; proficiency test system

孫彥,毛培勝.國際種子檢驗協會實驗室能力驗證方法對健全我國草種子實驗室能力驗證體系的啟示.草業(yè)科學,2016,33(3)：540-546.

Sun Y,Mao P S.The laboratory proficiency test system of International Seed Testing Association and its implication for herbage seed in China.Pratacultural Science，2016,33(3)：540-546.