滿冬亮　王齊暉

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不同肝臟疾病血清GP73、AFP-L3、AFP及AFU水平的表達

滿冬亮王齊暉

110001沈陽中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗科

【摘要】目的研究不同肝臟疾病血清高爾基蛋白73(GP73)、甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)、甲胎蛋白(AFP)及α-L-巖藻糖苷酶(AFU)表達水平及臨床意義。方法選取我院于2014年1月至2015年11月收治的61例急性肝炎組，89例慢性肝炎組，26例肝硬化組，32例肝癌組及同期進行體檢的60名健康對照組為研究對象，對5組分別進行單項血清GP73、AFP-L3、AFP及AFU檢測和聯(lián)合檢測，并使用ROC曲線對檢測結(jié)果進行評價。結(jié)果肝癌組GP73、AFP-L3、AFP及AFU水平與其他肝臟疾病組和健康對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)；聯(lián)合檢測診斷的靈敏度、特異度比單項檢測都高，其中靈敏度達90.6%，特異度達89.0%。GP73、AFP-L3、AFP及AFU指標的ROC曲線面積分別為0.811、0.774、0.643、0.609；3項聯(lián)合指標的ROC曲線面積為0.957。結(jié)論GP73、AFP-L3、AFP及AFU在肝臟疾病發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用，聯(lián)合檢測區(qū)分肝癌與其他肝臟疾病價值顯著，能顯著提高診斷的靈敏度和精確度，ROC曲線評價能直觀呈現(xiàn)診斷結(jié)果。

【關(guān)鍵詞】肝臟疾?。籊P73；AFP-L3；AFP；AFU

肝臟疾病包括肝炎、肝硬化、肝癌等，是臨床上常見的消化系統(tǒng)疾病之一。其中，肝癌在我國人群中的年發(fā)病率高達37.6/10萬，且病死率較高，肝癌的病情潛伏期較長，臨床發(fā)現(xiàn)后，有三分之二以上的患者屬于晚期。因此，做好早期診斷極為關(guān)鍵。目前，臨床上常用的診斷肝癌的實驗室指標有高爾基蛋白73(GP73)、甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)、甲胎蛋白(AFP)及α-L-巖藻糖苷酶(AFU)等，但是文獻報道[1-2]急慢性肝炎、肝硬化患者也會出現(xiàn)GP73等異常。本研究通過分析不同肝臟疾病患者血清GP73、AFP-L3、AFP及AFU表達水平，旨在為肝臟疾病診斷提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

資料和方法

一、一般資料

選取我院于2014年1月至2015年11月收治的61例急性肝炎患者(急性肝炎組)，89例慢性肝炎患者(慢性肝炎組)，26例肝硬化患者(肝硬化組)，32例肝癌患者(肝癌組)及同期進行體檢的60名健康對照者(健康對照組)為研究對象。所有研究對象均在知情自愿情況下參與本次研究，排除妊娠期或者哺乳期婦女，健康對照組排除肝炎病毒攜帶者。急性肝炎組男性34例，女性27例，年齡31～72歲，平均年齡為(49.3±2.1)歲；慢性肝炎組男性48例，女性41例，年齡24～65歲，平均年齡為(48.2±2.0)歲；肝硬化組男性15例，女性11例，年齡26～66歲，平均年齡為(48.6±1.9)歲；肝癌組男性18例，女性14例，年齡31～76歲，平均(49.1±2.3)歲；健康對照組男性37例，女性23例，年齡29～68歲，平均(48.7±1.8)歲。5組研究對象基本資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

二、方法

參與研究的所有對象要在空腹12 h，采取3 mL靜脈血液，靜置30 min后，4℃ 3000 r/min離心后，分離血清標本，-80℃保存。GP73采用酶聯(lián)免疫吸附法(酶標儀購自深圳雷杜醫(yī)療器械有限公司，試劑盒購自于美國R&D公司)；AFP-L3采用親和吸附離心管法(親和吸附離心管購自于北京熱景生物技術(shù)有限公司)；AFP采用化學發(fā)光法(德國 Liaison 索林全自動化學發(fā)光分析儀，質(zhì)控品和配套試劑也采用該公司提供)；AFU采用MG-CNPF法(試劑盒購自上海一研生物技術(shù)有限公司)。比較5組GP73、AFP-L3、AFP及AFU。

陽性預(yù)測值上，GP73血清要高于106.5 ng/mL、AFP-L3血清要高于9.2%、AFP血清要高于9.6 ng/mL，AFU血清要高于23.5 U/mL。聯(lián)合檢測中陽性預(yù)測值高于4項單測中的任何1項就表示檢測結(jié)果是陽性。應(yīng)用ROC曲線評價GP73、AFP-L3、AFP及AFU聯(lián)合檢測對肝癌診斷價值。診斷界點移動后，能獲得更多的特異度和靈敏度，橫坐標由特異度表示，縱坐標由靈敏度表示，對各個點連接后繪制曲線，對曲線下的面積進行計算，面積計算的結(jié)果與診斷價值成正相關(guān)，即面積越大，診斷價值越高。

三、統(tǒng)計學方法

通過SPSS 19.0軟件實現(xiàn)了數(shù)據(jù)庫的錄入及統(tǒng)計分析，組間構(gòu)成比較用卡方檢驗，組間療效比較用等級資料的秩和檢驗分析，計量資料以均數(shù)±標準差表示，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

結(jié)果

一、5組的GP73、AFP-L3、AFP及AFU水平比較

檢測結(jié)果顯示，與健康對照組相比，肝臟疾病組GP73、AFP-L3、AFP及AFU水平均升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。肝癌組GP73、AFP-L3高于急性肝炎組、慢性肝炎組、肝硬化組，AFP高于急性肝炎組、慢性肝炎組，但是低于肝硬化組，AFU高于急性肝炎組、肝硬化組，但是低于慢性肝炎組，差異均具有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。肝硬化組GP73、AFP-L3、AFP高于急性肝炎組、慢性肝炎組，AFU水平低于急性肝炎組、慢性肝炎組，差異均具有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)。除AFP-L3外，慢性肝炎組GP73、AFP及AFU水平均顯著高于急性肝炎組(P均<0.05)。見表1。

二、血清單項指標檢測和聯(lián)合檢測對肝癌的診斷學價值

單項指標對肝癌診斷結(jié)果顯示，4項血清指標的性能表現(xiàn)不一，就靈敏度上，AFP-L3最高；特異度上，GP73最高；陽性預(yù)測值上，GP73最高；陰性預(yù)測值上，AFP-L3最高；4項聯(lián)合檢測結(jié)果顯示，聯(lián)合檢測診斷的靈敏度、特異度比單項檢測都高，其中靈敏度達90.6%，特異度達89.0%，陽性和陰性預(yù)測值比單項檢測都有一定程度的提高。見表2。

三、血清單項和聯(lián)合檢測的ROC曲線

ROC曲線檢測的橫坐標以特異度為參照，縱坐標以靈敏度為參照，在SPSS 19.0軟件上作ROC曲線圖，計算出曲線下的面積。GP73、AFP-L3、AFP及AFU指標的ROC曲線面積分別為0.811、0.774、0.643、0.609；3項聯(lián)合指標的ROC曲線面積為0.957。血清指標單項檢測的ROC曲線見圖1，聯(lián)合檢測的ROC曲線見圖2。

表1　5組GP73、AFP-L3、AFP及AFU水平比較(±s)

注：與健康對照組比較，★P<0.05；與肝癌組相比，▲P<0.05

表2　4項血清指標對肝癌的診斷性能評價(%)

圖1　血清指標單項檢測的ROC曲線

圖2　聯(lián)合檢測的ROC曲線

討論

肝癌是由于乙型肝炎、肝硬化、黃曲霉菌等因素導(dǎo)致的發(fā)生于肝臟的腫瘤，好發(fā)于30～50歲年齡段。據(jù)統(tǒng)計，全球每年死于肝癌的患者約26萬，而我國每年有14萬患者死于此病。因此，如何有效治療肝癌，提高患者生存率成為臨床工作者研究的熱點。目前研究表明，在肝癌早期，患者腫瘤體積較小，給予積極有效治療，能夠顯著提高生存幾率，而中晚期肝癌大多不能夠切除或者切除效果較差，但是肝癌患者早期的臨床癥狀，如納差、腹脹、乏力等，與肝炎、肝硬化具有較大的相似性，通過臨床表現(xiàn)無法進行鑒別診斷。因此，如何早期診斷成為臨床科研工作者亟待解決的關(guān)鍵問題。

GP73、AFP-L3、AFP及AFU等血清學指標對肝癌的診斷具有重要的參考意義。其中GP73 是存在于高爾基體的一種跨膜蛋白，在正常肝組織表達很少甚至無表達，肝癌患者血清中GP73 水平顯著升高。AFP-L3是肝細胞癌的特異性蛋白，相關(guān)臨床研究結(jié)果顯示，該蛋白和肝癌的關(guān)系最為緊密。AFP是臨床上診斷肝癌最重要的血清學腫瘤標志物，已被廣泛用于肝癌的普查、診斷和監(jiān)測。AFU是一種溶酶體酸性水解酶，在肝腎組織中較高，動物實驗發(fā)現(xiàn)肝癌組織中AFU活力顯著升高，且與腫瘤生長期有關(guān)[3-6]。本研究通過分析肝癌組、肝硬化組、肝炎組及健康對照組GP73、AFP-L3、AFP及AFU表達差異表明，肝臟疾病組GP73、AFP-L3、AFP及AFU水平均升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)，提示其在肝臟疾病的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。文獻報道[7]，GP73、AFP-L3、AFP及AFU在肝炎、肝硬化以及肝癌進展過程中血清水平都會上調(diào)，可能存在著交叉重疊，造成使用單一指標診斷肝癌時出現(xiàn)假陽性或者假陰性反映，如常用的AFP，特異度低于60%。本研究中肝癌組GP73、AFP-L3高于急性肝炎組、慢性肝炎組、肝硬化組，與文獻報道基本一致[8]，提示將其用于區(qū)分肝癌與其他肝臟疾病有助于提高診斷準確率。AFP高于急性肝炎組、慢性肝炎組，但是低于肝硬化組，AFU高于急性肝炎組、肝硬化組，但是低于慢性肝炎組，差異均具有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)，提示單一使用AFP及AFU鑒別肝癌與其它肝臟疾病可能會出現(xiàn)漏診誤診。

單項指標對肝癌診斷結(jié)果顯示，4項血清學指標的性能表現(xiàn)不一。就靈敏度上，AFP-L3最高；特異度上，GP73最高；陽性預(yù)測值上，GP73最高；陰性預(yù)測值上，AFP-L3最高；也表明GP73、AFP-L3作為一項單項指標，在肝癌與其它肝臟疾病鑒別診斷中的價值高于AFU及AFP。4項聯(lián)合檢測結(jié)果顯示，聯(lián)合檢測診斷的靈敏度、特異度比單項檢測都高，其中靈敏度達90.6%，特異度達89.0%，陽性和陰性預(yù)測值比單項檢測都有一定程度地提高，表明聯(lián)合檢測對肝臟疾病區(qū)分診斷的價值最優(yōu)。但是聯(lián)合檢測中的陽性預(yù)測值仍較低，表明在聯(lián)合檢測中必須注重假陽性的問題，臨床上可以結(jié)合其他手段進行檢測，如超聲等。ROC曲線是不同二分類方式繪制的一種曲線，曲線的橫坐標由特異度表示，曲線的縱坐標由靈敏度表示，ROC曲線可從靈敏度和特異性兩個標準來評價一個或多個效能，通過計算曲線下的面積能客觀地展現(xiàn)出診斷結(jié)果[9]。GP73、AFP-L3、AFP及AFU指標的ROC曲線面積分別為0.811、0.774、0.643、0.609，3項聯(lián)合指標的ROC曲線面積為0.957，表明聯(lián)合指標檢測的ROC曲線有較高的診斷價值，本研究結(jié)果與以往文獻數(shù)據(jù)相符[10]。

綜上所述，GP73、AFP-L3、AFP及AFU在肝臟疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，在對肝癌與其他肝臟疾病鑒別診斷中，使用GP73、AFP-L3、AFP及AFU聯(lián)合檢測能顯著提高診斷的靈敏度和精確度，這比單項檢測的價值更高。

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(本文編輯：賴榮陶)

通信作者：滿冬亮, Email: gbcdbj@sina.com

(收稿日期：2015-12-29)

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