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        麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白JcOle16.6基因克隆及序列分析

        2016-07-25 19:56:50熊宏陳海濤宋健余進德丁勇
        江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年6期
        關(guān)鍵詞:序列分析基因克隆種子

        熊宏++陳海濤++宋健++余進德++丁勇

        摘要:分離克隆麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因家族成員JcOle16.6基因的DNA序列(GenBank序列號為JX073622.1)。JcOle16.6基因全長601 bp,沒有內(nèi)含子,轉(zhuǎn)錄的JcOle16.6 mRNA具有468 bp的完整開放閱讀框,編碼含155個氨基酸殘基、分子量為16.6 ku、等電點為9.99的JcOle16.6蛋白(GenBank序列號為AFP19884),屬于植物油體結(jié)合蛋白油質(zhì)蛋白家族的新成員。JcOle16.6屬于穩(wěn)定的兩性蛋白質(zhì),具有3個結(jié)構(gòu)域,即N端約30個氨基酸殘基組成的含1個α-螺旋的親水性結(jié)構(gòu)域,肽鏈中間約78個氨基酸殘基組成的含3個α-螺旋的高度疏水性跨膜結(jié)構(gòu)域,C端約47個氨基酸組成的含1個α-螺旋的兩親性結(jié)構(gòu)域。N端親水性結(jié)構(gòu)域和C端兩親性結(jié)構(gòu)域分布于油體朝向胞漿一面,中間疏水跨膜結(jié)構(gòu)域分布于油體半單位膜內(nèi),存在于中間疏水跨膜結(jié)構(gòu)域中的由3個脯氨酸和1個絲氨酸組成的Pro-Knot高度保守結(jié)構(gòu)域在JcOle16.6蛋白與油體半單位膜準(zhǔn)確定位和穩(wěn)定維持油體結(jié)構(gòu)方面起著重要作用。研究結(jié)果為JcOle16.6基因表達調(diào)控和生理功能等研究奠定了基礎(chǔ)。

        關(guān)鍵詞:麻風(fēng)樹;種子;油體;油質(zhì)蛋白;基因克??;序列分析

        中圖分類號: Q785文獻標(biāo)志碼: A文章編號:1002-1302(2016)06-0084-06

        收稿日期:2015-10-28

        基金項目:國家自然科學(xué)基金(編號:31460076);云南省高校優(yōu)勢特色重點學(xué)科建設(shè)項目(編號:50097505);云南省高校林下生物資源保護及利用科技創(chuàng)新團隊項目。

        作者簡介:熊宏(1994—),男,江西宜春人,碩士研究生,研究方向為代謝途徑與分子生物學(xué)。E-mail:1570530221@qq.com。

        通信作者:丁勇,高級實驗師,碩士生導(dǎo)師,研究方向為分子生物學(xué)。E-mail:dingyong@swfu.edu.cn??勺鳛楝F(xiàn)代生物質(zhì)能源的植物油廣泛存在于植物種子中[1-2],植物油是植物種子最有效的能量儲備形式,其主要以三酰甘油(triglycerides,TAGs)液態(tài)基質(zhì)形式存在于植物亞細(xì)胞器顆粒-油體中,可為隨后的代謝過程和其他生命活動提供能量和碳水化合物[3-4]。研究認(rèn)為,TAGs位于油體內(nèi)部,油體外部為由磷脂單分子層(phospholipids,PL)和油體結(jié)合蛋白組成的半單位膜結(jié)構(gòu)[5]。油體結(jié)合蛋白包括大量的油質(zhì)蛋白和微量的油體鈣蛋白、油體固醇蛋白Steroleosin-A和Steroleosin-B[6-9]。研究推測油質(zhì)蛋白作為最豐富的油體結(jié)合蛋白在油體的發(fā)生到分解消失過程中起著重要的生物學(xué)功能[1,10-11]。目前在油桐(Verniciafordii)[12]、油菜(Brassica campestris)[13-16]、芝麻(Sesamumindicum)[17-18]和擬南芥(Arabidopsis thaliana)[19]等物種中油質(zhì)蛋白基因已被克隆,其生物學(xué)功能也得到了一定研究,同時發(fā)現(xiàn)在各物種中油質(zhì)蛋白以多個異構(gòu)體蛋白形式存在。

        麻風(fēng)樹(Jatropha curcas L.)別稱小桐子或膏桐,是大戟科(Euphorbiaceae)多年生落葉灌木或小喬木,其果實采摘期長達50年,種仁的含油率高達60%~70%[20-21],麻風(fēng)樹已經(jīng)作為生物質(zhì)能源植物得到了一定的開發(fā)與利用[22-24]。研究麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白及其基因?qū)⒂兄诮沂韭轱L(fēng)樹種子油體形成與穩(wěn)定機制,并可為麻風(fēng)樹種子在新型生物能源及植物生物反應(yīng)器方面深入開發(fā)與利用提供理論依據(jù)。本研究從 GenBank 數(shù)據(jù)庫中搜索得到已知登錄的麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白家族基因mRNA全長序列(GenBank序列號為EU234462.2、EU234463.2、EU234464.2),但有關(guān)麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因DNA序列克隆和序列分析的相關(guān)報道還未發(fā)現(xiàn)。筆者所在課題組根據(jù)EU234464.2序列設(shè)計特異性引物,克隆了麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白家族基因JcOle14.3在染色體上的DNA序列(GenBank序列號為JX073623.1)。本研究根據(jù)EU234463.2序列設(shè)計特異性引物,克隆麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白家族基因JcOle16.6在染色體上的DNA序列(GenBank序列號為JX073622.1),并對該基因序列及其推測編碼的JcOle16.6蛋白進行生物信息學(xué)分析。

        1材料與方法

        1.1材料與試劑

        試驗材料為三年生麻風(fēng)樹植株,取其未成熟種子和幼葉于液氮中速凍后置于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

        植物總RNA提取試劑盒(RNAiso Plus)、M-MLV反轉(zhuǎn)錄試劑盒和pMD18-T載體均為TaKaRa產(chǎn)品,植物基因組DNA提取試劑盒為北京天根生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品,膠回收試劑盒為Omega產(chǎn)品,大腸桿菌DH5α為實驗室保存菌種,其他化學(xué)試劑均為生工生物工程(上海)股份有限公司產(chǎn)品。

        1.2試驗方法

        1.2.1總RNA提取與檢測麻風(fēng)樹幼葉基因組DNA提取按照植物基因組DNA提取試劑盒說明書完成,麻風(fēng)樹種子總RNA提取參照丁勇等方法[25]完成;DNA完整性和純度分別采用1.0%瓊脂糖凝膠糖電泳和紫外分光光度計檢測,RNA完整性和純度分別采用1.2%瓊脂糖凝膠糖電泳和紫外分光光度計檢測。

        1.2.2麻風(fēng)樹JcOle16.6基因克隆在已知麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因mRNA全長序列(GenBank序列號為EU234463.2)的ORF區(qū)外側(cè)設(shè)計引物,上游引物為JcOle16.6F:5-CTTTCTCACACTTATCATCAAC-3,下游引物為JcOle16.6R:5-TAAACCAACTCAACTACCTCAA-3,并由生工生物工程(上海)股份有限公司完成序列合成。以提取的總RNA為模板,采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成第一鏈cDNA,取第一鏈cDNA 2 μL,上下游引物各1 μL,2×Taq PCR Master Mix 12.5 μL,ddH2O 8.5 μL,建立25μL的RT-PCR反應(yīng)體系,克隆目的基因cDNA序列,反應(yīng)條件為:94 ℃預(yù)變性3 min;94 ℃變性30 s,48 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,35個循環(huán);72 ℃延伸10 min。取2 μL DNA為模板,上下游引物各1 μL,2×Taq PCR Master Mix 12.5 μL,ddH2O 8.5 μL,建立25 μL的PCR反應(yīng)體系,克隆目的基因在染色體上的DNA序列,反應(yīng)條件為:94 ℃預(yù)變性4 min;94 ℃變性30 s,48 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,35個循環(huán);72 ℃延伸10 min。

        1.2.3PCR產(chǎn)物檢測、回收、T/A克隆與測序應(yīng)用1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物,目的片段回收后連接到pMD18-T載體上,將重組子轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞,轉(zhuǎn)化復(fù)蘇后的菌液涂布在含有Amp、IPTG和X-Gal的LB固體培養(yǎng)基上,過夜培養(yǎng)后隨機篩選白色菌落,將陽性克隆菌液送往生工生物工程(上海)股份有限公司完成測序。

        1.2.4序列的生物信息學(xué)分析生物信息學(xué)分析參照已知文獻報道的方法[15,26-27]進行,包括mRNA及推導(dǎo)的蛋白質(zhì)氨基酸序列相似性搜索,mRNA開放閱讀框查找,蛋白理論分子量、等電點、氨基酸含量和穩(wěn)定性分析,系統(tǒng)發(fā)生樹構(gòu)建,蛋白質(zhì)親水/疏水性特性、跨膜結(jié)構(gòu)、信號肽及功能域預(yù)測,目的蛋白二級、三級結(jié)構(gòu)預(yù)測。

        2結(jié)果與分析

        2.1麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白JcOle16.6基因克隆

        本研究以提取的總RNA和基因組DNA為模板分別進行RT-PCR和普通PCR試驗,均獲得1條位于500~750 bp區(qū)間的特異性cDNA和DNA條帶(圖1),將目的cDNA和DNA條帶進行膠回收、TA克隆和測序,結(jié)果表明,本研究克隆到的麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因cDNA序列長601 bp,序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中登錄的麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因mRNA序列EU234463.2具有100%的相似性,本研究克隆到的麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因DNA序列也為601 bp,序列與601 bp的cDNA序列完全一致。根據(jù)生物信息學(xué)分析結(jié)果,本研究將該目的基因命名為麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白JcOle16.6基因,其601 bp的DNA序列登錄GenBank的序列號為JX073622。表明JcOle16.6基因只包含1個外顯子,沒有內(nèi)含子。

        2.2序列分析

        本研究克隆獲得麻風(fēng)樹JcOle16.6基因601 bp的基因組DNA序列,其轉(zhuǎn)錄的601 bp的mRNA具有完整的ORF,位于第25至第492 bp區(qū)域,第1至第24 bp區(qū)域為5′UTR,第493至第601 bp區(qū)域為3′UTR。ORF推測編碼的麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋

        白JcOle16.6(GenBank序列號為AFP19884)由155個氨基酸殘基組成,相對分子質(zhì)量為16.6 ku,帶負(fù)電荷的氨基酸殘基(天冬氨酸+谷氨酸)為9個,帶正電荷的氨基酸殘基(精氨酸+賴氨酸)為16個,pI為9.99,推測JcOle16.6在生理條件下為堿性蛋白。除谷氨酰胺和半胱氨酸之外,JcOle16.6含有其他18種常見的氨基酸殘基,色氨酸含量最低,為0.6%,天冬氨酸、酪氨酸含量也較低,均為1.3%,亮氨酸含量最高,為12.9%,其他氨基酸含量在2.6%~10.3%之間。因其具有38.97的不穩(wěn)定系數(shù)值,推測JcOle16.6為穩(wěn)定性蛋白質(zhì)。

        蛋白質(zhì)相似性分析結(jié)果見(圖2)顯示,麻風(fēng)樹JcOle16.6含有“油質(zhì)蛋白”保守結(jié)構(gòu)域,屬于油質(zhì)蛋白超家族蛋白之一。JcOle16.6蛋白與油桐(Vernicia fordii)的油質(zhì)蛋白Ⅱ、胡楊(Populus euphratica)的油質(zhì)蛋白18.2 ku-like、毛果楊(P. trichocarpa)油質(zhì)蛋白家族蛋白、蓖麻(Ricinus communis)的油質(zhì)蛋白1、川桑(Morus notabilis)的油質(zhì)蛋白5、愛玉子(Ficus pumila var.)的油質(zhì)蛋白高分子量異構(gòu)體、醉蝶花(Tarenaya hassleriana)的油質(zhì)蛋白 5異構(gòu)體、亞麻(Linum usitatissimum)的油質(zhì)蛋白高分子量異構(gòu)體、胡蘿卜(Daucus carota)的脂質(zhì)體膜蛋白、油茶(Camellia oleifera)的Ole Ⅳ蛋白、煙草(Nicotiana sylvestris)的油質(zhì)蛋白 5-like、甜橙(Citrus sinensis)的油質(zhì)蛋白 18.2 ku-like等都具有較高的相似性,E值從9×10-75~3×10-56,一致性60%~83%,相似度74%~91%(表1)。但JcOle166蛋白與該課題組克隆的另一個麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白家族基因JcOle14.3(GenBank序列號為JX073623)編碼的異構(gòu)體JcOle14.3蛋白(GenBank登錄號為AFP19885)之間的相似度較低,以致分析結(jié)果未能顯示出。表明本研究克隆的JcOle16.6基因編碼的JcOle16.6蛋白屬于麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白異構(gòu)體之一。

        將13種不同植物的油質(zhì)蛋白進行序列比對分析,結(jié)果見圖3,顯示麻風(fēng)樹JcOle16.6蛋白與其他的油質(zhì)蛋白在肽鏈中間序列具有較高的一致性,而在肽鏈兩端序列卻存在較大差異性。1個絲氨酸和3個脯氨酸組成的脯氨酸結(jié)(Pro-Knot)

        為已知植物油質(zhì)蛋白序列的標(biāo)志性結(jié)構(gòu)[12,28],該保守結(jié)構(gòu)域也存在于麻風(fēng)樹JcOle16.6和其他參比的油質(zhì)蛋白序列中。

        油質(zhì)蛋白進化樹分析結(jié)果見圖4,大戟科麻風(fēng)樹JcOle 166和大戟科油桐油質(zhì)蛋白Ⅱ(ADB03185.1)親緣關(guān)系最近,聚為一支,和大戟科蓖麻油質(zhì)蛋白1(EEF40948.1)聚為一個大支;同樣來自麻風(fēng)樹的JcOle14.3(AFP19885.1)和油質(zhì)蛋白1-like(NP_001295613.1)聚為一支,二者與愛玉子(Ficus pumila var.)的油質(zhì)蛋白高分子量異構(gòu)體(ABQ57396.1)、醉蝶花(Tarenaya hassleriana)的油質(zhì)蛋白5異構(gòu)體(XP_010524296.1)屬于一個大分支,但與JcOle166的系統(tǒng)發(fā)育進化距離較遠(yuǎn)。推測來自不同植物的同一種油質(zhì)蛋白異構(gòu)體基因具有較近的進化關(guān)系,而來自同一植物的不同油質(zhì)蛋白異構(gòu)體基因具有較遠(yuǎn)的進化關(guān)系。

        信號肽分析結(jié)果未發(fā)現(xiàn)可能的信號肽序列存在于JcOle16.6蛋白中,表明該蛋白為非分泌性蛋白。疏水性分析結(jié)果見圖5,顯示JcOle16.6蛋白質(zhì)肽鏈在N端1~31位和C端109~155位氨基酸殘基區(qū)域都表現(xiàn)為高度親水性,而中間32~108位氨基酸殘基區(qū)域表現(xiàn)為高度疏水性,表明麻風(fēng)樹JcOle16.6蛋白為兩親性蛋白質(zhì),即蛋白的兩末端區(qū)域為親水

        性,中間區(qū)域為疏水性。蛋白質(zhì)跨膜結(jié)構(gòu)分析結(jié)果見圖6,顯示JcOle16.6蛋白在中間疏水區(qū)域存在2個潛在的跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域,第49~72位的24個氨基酸殘基形成第1個跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域,方向為從膜外到膜內(nèi)螺旋;第80~101位的22個氨基酸殘基形成第二個跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域,方向為從膜內(nèi)到膜外螺旋。表明麻風(fēng)樹JcOle16.6蛋白質(zhì)為含有2個跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域的兩親性蛋白質(zhì),中間高度疏水區(qū)域位于油體半單位膜內(nèi),N-末端和C-末端2個高度親水區(qū)域位于油體半單位膜外,即位于胞質(zhì)內(nèi)。

        功能蛋白質(zhì)分子在生物體內(nèi)都會執(zhí)行特定的生命活動,其多肽鏈翻譯后通常折疊和盤曲成比較穩(wěn)定的二級結(jié)構(gòu),并進一步形成高級結(jié)構(gòu),完成活性功能域構(gòu)象的構(gòu)建。二級結(jié)構(gòu)分析結(jié)果見圖7,顯示麻風(fēng)樹JcOle16.6蛋白可能含有3種二級結(jié)構(gòu)類型,分別為α-螺旋占72.26%、隨機卷曲占2387%,少量延伸鏈占3.87%??梢姦?螺旋為JcOle16.6蛋白主要二級結(jié)構(gòu),約占整個肽鏈的3/4,分別位于18~22位(α1)、31~42位(α2)、45~68位(α3)、75~93位(α4)、

        98~152位(α5)氨基酸殘基區(qū)域。推測JcOle16.6蛋白α-helix的形成可能與預(yù)測的2個跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域的形成及與油體半單位膜的定位結(jié)合有著密切的關(guān)系。JcOle16.6蛋白二級結(jié)構(gòu),尤其是α-螺旋結(jié)構(gòu)在應(yīng)用I-TASSER程序預(yù)測的高級結(jié)構(gòu)(圖8)中可清晰顯示出。GO功能分類結(jié)果顯示JcOle16.6與磷脂單分子層膜的油脂儲藏體(GO:0012511)相關(guān),并能整合到單分子層膜上(GO:0016021)。因此,根據(jù)蛋白質(zhì)疏水性、跨膜結(jié)構(gòu)、二級結(jié)構(gòu)、高級結(jié)構(gòu)和功能分析結(jié)果,推測JcOle16.6蛋白在結(jié)構(gòu)上可分為3個部分:(1)N端約30個氨基酸殘基組成的親水性區(qū)域,分布于油體朝向胞漿一面,α1位于此結(jié)構(gòu)域;(2)C端約47個氨基酸組成的α-螺旋兩親性結(jié)構(gòu)域,也分布于油體朝向胞漿一面,α5位于此結(jié)構(gòu)域;(3)肽鏈中間約78個氨基酸殘基組成的高度疏水性跨膜區(qū)域,分布于油體半單位膜內(nèi),α2、α3、α4位于此結(jié)構(gòu)域,α3、α4之間存在著由3個脯氨酸和1個絲氨酸組成的Pro-Knot高度保守結(jié)構(gòu)域(圖8),這與JcOle16.6蛋白向油體半單位膜的正確定位和油體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定維持密切相關(guān)。

        3結(jié)論與討論

        油質(zhì)蛋白是與植物油體特異性結(jié)合的主要蛋白質(zhì),在油料植物種子中普遍存在[29],在植物種子成熟過程中油質(zhì)蛋白幾乎覆蓋整個油體表面,使得油體雖以互相積壓形式充滿整個細(xì)胞但從不相互聚合,推測油質(zhì)蛋白與植物油體的形成和穩(wěn)定有著密切的關(guān)系[30-32]。油質(zhì)蛋白及其基因已在多種植物中得到了一定的研究[33-37]。本研究分離克隆了麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因家族成員JcOle16.6基因長601 bp的DNA序列(GenBank序列號為JX073622.1),JcOle16.6基因在染色體水平上沒有內(nèi)含子,轉(zhuǎn)錄的JcOle16.6 mRNA具有468 bp 的完整開放閱讀框,編碼含155個氨基酸殘基、分子量為 16.6 ku 的JcOle16.6蛋白(GenBank序列號為AFP19884),屬于植物油體結(jié)合蛋白油質(zhì)蛋白家族的新成員。

        不同植物來源的油質(zhì)蛋白在分子量上具有較大的變化。研究表明,特異性存在于植物種子中的油質(zhì)蛋白分子量在 15~26 ku 之間變化[2]。本研究從麻風(fēng)樹種子中分離克隆的JcOle16.6基因表達的JcOle16.6蛋白分子量也在此范圍之內(nèi),為16.6 ku,符合Anthony和Huang的分析結(jié)果。在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)上JcOle16.6可分為3個結(jié)構(gòu)區(qū)域,即N端約30個氨基酸殘基組成的含1個α-螺旋的親水性結(jié)構(gòu)域,肽鏈中間約78個氨基酸殘基組成的含3個α-螺旋的高度疏水性跨膜結(jié)構(gòu)域,C端約47個氨基酸組成的含1個α-螺旋的兩親性結(jié)構(gòu)域。N端親水性結(jié)構(gòu)域和C端兩親性結(jié)構(gòu)域均分布于油體朝向胞漿一面,中間疏水跨膜結(jié)構(gòu)域分布于油體半單位膜內(nèi),存在于中間疏水跨膜結(jié)構(gòu)域中的由3個脯氨酸和1個絲氨酸組成的Pro-Knot高度保守結(jié)構(gòu)域在JcOle16.6蛋白與油體半單位膜準(zhǔn)確定位和穩(wěn)定維持油體結(jié)構(gòu)方面起著重要作用。與相關(guān)研究關(guān)于油質(zhì)蛋白結(jié)構(gòu)和功能的論述[35]一致,表明油質(zhì)蛋白基因在不同植物中表達的油質(zhì)蛋白能形成類似的結(jié)構(gòu)特性并發(fā)揮相同的生物學(xué)功能。

        油質(zhì)蛋白基因常以為數(shù)不多的基因家族形式存在。在裸子植物中只發(fā)現(xiàn)1種油質(zhì)蛋白[36],在已研究的被子植物中發(fā)現(xiàn)在同一植物中存在氨基酸序列和分子量大小都明顯不同的多種油質(zhì)蛋白異構(gòu)體[37-38]。劉玉君等對麻風(fēng)樹種子油體蛋白進行電泳分析,發(fā)現(xiàn)分子量分別為20、24 ku的2種油質(zhì)蛋白異構(gòu)體可能存在于麻風(fēng)樹種子油體中[39]。本研究從麻風(fēng)樹種子中分離克隆的JcOle16.6基因產(chǎn)物推測為16.6 ku的油質(zhì)蛋白,同時筆者從麻風(fēng)樹種子中成功克隆的JcOle14.3基因產(chǎn)物推測為14.4 ku的油質(zhì)蛋白。推測麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因也以基因家族形式存在,其表達產(chǎn)物可能以不同分子量油質(zhì)蛋白異構(gòu)體形式同時存在于同一油體中。

        油質(zhì)蛋白作為植物油體中發(fā)現(xiàn)最早、含量最豐富的油體結(jié)合蛋白被認(rèn)為是需要長期貯藏的油體所必需的[40],推測從油體的發(fā)生到分解消失過程中發(fā)揮重要的生物學(xué)功能。研究推測油質(zhì)蛋白在植物種子發(fā)育及成熟過程中直接影響油體的形成、穩(wěn)定性以及大小[41],在種子萌發(fā)、油體動員與解體過程中可作為酯酶識別并結(jié)合油體的特殊信號[42-43]。但JcOle16.6及其他異構(gòu)體蛋白在麻風(fēng)樹種子油體的發(fā)生到分解消失過程中的具體生物學(xué)功能還有待于進一步研究闡明。

        本研究分離克隆了麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因家族成員JcOle16.6基因長601 bp的DNA序列(GenBank序列號為JX073622.1),JcOle16.6基因沒有內(nèi)含子,轉(zhuǎn)錄的JcOle16.6 mRNA具有468 bp的完整開放閱讀框,編碼含155個氨基酸殘基、分子量為16.6 ku的JcOle16.6蛋白(GenBank序列號為AFP19884),屬于植物油體結(jié)合蛋白油質(zhì)蛋白家族的新成員。JcOle16.6具有3個結(jié)構(gòu)域,即N端約30個氨基酸殘基組成的含1個α-螺旋的親水性結(jié)構(gòu)域,肽鏈中間約78個氨基酸殘基組成的含3個α-螺旋的高度疏水性跨膜結(jié)構(gòu)域,C端約47個氨基酸組成的含1個α-螺旋的兩親性結(jié)構(gòu)域。N端親水性結(jié)構(gòu)域和C端兩親性結(jié)構(gòu)域分布于油體朝向胞漿一面,中間疏水跨膜結(jié)構(gòu)域分布于油體半單位膜內(nèi),存在于中間疏水跨膜結(jié)構(gòu)域中的由3個脯氨酸和1個絲氨酸組成的Pro-Knot高度保守結(jié)構(gòu)域在JcOle16.6蛋白與油體半單位膜準(zhǔn)確定位和穩(wěn)定維持油體結(jié)構(gòu)方面起著重要作用。

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