熊宏++陳海濤++宋健++余進德++丁勇

摘要：分離克隆麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因家族成員JcOle16.6基因的DNA序列（GenBank序列號為JX073622.1）。JcOle16.6基因全長601 bp，沒有內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄的JcOle16.6 mRNA具有468 bp的完整開放閱讀框，編碼含155個氨基酸殘基、分子量為16.6 ku、等電點為9.99的JcOle16.6蛋白（GenBank序列號為AFP19884），屬于植物油體結(jié)合蛋白油質(zhì)蛋白家族的新成員。JcOle16.6屬于穩(wěn)定的兩性蛋白質(zhì)，具有3個結(jié)構(gòu)域，即N端約30個氨基酸殘基組成的含1個α-螺旋的親水性結(jié)構(gòu)域，肽鏈中間約78個氨基酸殘基組成的含3個α-螺旋的高度疏水性跨膜結(jié)構(gòu)域，C端約47個氨基酸組成的含1個α-螺旋的兩親性結(jié)構(gòu)域。N端親水性結(jié)構(gòu)域和C端兩親性結(jié)構(gòu)域分布于油體朝向胞漿一面，中間疏水跨膜結(jié)構(gòu)域分布于油體半單位膜內(nèi)，存在于中間疏水跨膜結(jié)構(gòu)域中的由3個脯氨酸和1個絲氨酸組成的Pro-Knot高度保守結(jié)構(gòu)域在JcOle16.6蛋白與油體半單位膜準(zhǔn)確定位和穩(wěn)定維持油體結(jié)構(gòu)方面起著重要作用。研究結(jié)果為JcOle16.6基因表達調(diào)控和生理功能等研究奠定了基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：麻風(fēng)樹；種子；油體；油質(zhì)蛋白；基因克?。恍蛄蟹治?/p>

中圖分類號： Q785文獻標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2016）06-0084-06

收稿日期：2015-10-28

基金項目：國家自然科學(xué)基金（編號：31460076）；云南省高校優(yōu)勢特色重點學(xué)科建設(shè)項目（編號：50097505）；云南省高校林下生物資源保護及利用科技創(chuàng)新團隊項目。

作者簡介：熊宏（1994—），男，江西宜春人，碩士研究生，研究方向為代謝途徑與分子生物學(xué)。E-mail：1570530221@qq.com。

通信作者：丁勇，高級實驗師，碩士生導(dǎo)師，研究方向為分子生物學(xué)。E-mail：dingyong@swfu.edu.cn?？勺鳛楝F(xiàn)代生物質(zhì)能源的植物油廣泛存在于植物種子中[1-2]，植物油是植物種子最有效的能量儲備形式，其主要以三酰甘油（triglycerides，TAGs）液態(tài)基質(zhì)形式存在于植物亞細胞器顆粒-油體中，可為隨后的代謝過程和其他生命活動提供能量和碳水化合物[3-4]。研究認(rèn)為，TAGs位于油體內(nèi)部，油體外部為由磷脂單分子層（phospholipids，PL）和油體結(jié)合蛋白組成的半單位膜結(jié)構(gòu)[5]。油體結(jié)合蛋白包括大量的油質(zhì)蛋白和微量的油體鈣蛋白、油體固醇蛋白Steroleosin-A和Steroleosin-B[6-9]。研究推測油質(zhì)蛋白作為最豐富的油體結(jié)合蛋白在油體的發(fā)生到分解消失過程中起著重要的生物學(xué)功能[1，10-11]。目前在油桐（Verniciafordii）[12]、油菜（Brassica campestris）[13-16]、芝麻（Sesamumindicum）[17-18]和擬南芥（Arabidopsis thaliana）[19]等物種中油質(zhì)蛋白基因已被克隆，其生物學(xué)功能也得到了一定研究，同時發(fā)現(xiàn)在各物種中油質(zhì)蛋白以多個異構(gòu)體蛋白形式存在。

麻風(fēng)樹（Jatropha curcas L.）別稱小桐子或膏桐，是大戟科（Euphorbiaceae）多年生落葉灌木或小喬木，其果實采摘期長達50年，種仁的含油率高達60%～70%[20-21]，麻風(fēng)樹已經(jīng)作為生物質(zhì)能源植物得到了一定的開發(fā)與利用[22-24]。研究麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白及其基因?qū)⒂兄诮沂韭轱L(fēng)樹種子油體形成與穩(wěn)定機制，并可為麻風(fēng)樹種子在新型生物能源及植物生物反應(yīng)器方面深入開發(fā)與利用提供理論依據(jù)。本研究從 GenBank 數(shù)據(jù)庫中搜索得到已知登錄的麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白家族基因mRNA全長序列（GenBank序列號為EU234462.2、EU234463.2、EU234464.2），但有關(guān)麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因DNA序列克隆和序列分析的相關(guān)報道還未發(fā)現(xiàn)。筆者所在課題組根據(jù)EU234464.2序列設(shè)計特異性引物，克隆了麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白家族基因JcOle14.3在染色體上的DNA序列（GenBank序列號為JX073623.1）。本研究根據(jù)EU234463.2序列設(shè)計特異性引物，克隆麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白家族基因JcOle16.6在染色體上的DNA序列（GenBank序列號為JX073622.1），并對該基因序列及其推測編碼的JcOle16.6蛋白進行生物信息學(xué)分析。

1材料與方法

1.1材料與試劑

試驗材料為三年生麻風(fēng)樹植株，取其未成熟種子和幼葉于液氮中速凍后置于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

植物總RNA提取試劑盒（RNAiso Plus）、M-MLV反轉(zhuǎn)錄試劑盒和pMD18-T載體均為TaKaRa產(chǎn)品，植物基因組DNA提取試劑盒為北京天根生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，膠回收試劑盒為Omega產(chǎn)品，大腸桿菌DH5α為實驗室保存菌種，其他化學(xué)試劑均為生工生物工程（上海）股份有限公司產(chǎn)品。

1.2試驗方法

1.2.1總RNA提取與檢測麻風(fēng)樹幼葉基因組DNA提取按照植物基因組DNA提取試劑盒說明書完成，麻風(fēng)樹種子總RNA提取參照丁勇等方法[25]完成；DNA完整性和純度分別采用1.0%瓊脂糖凝膠糖電泳和紫外分光光度計檢測，RNA完整性和純度分別采用1.2%瓊脂糖凝膠糖電泳和紫外分光光度計檢測。

1.2.2麻風(fēng)樹JcOle16.6基因克隆在已知麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因mRNA全長序列（GenBank序列號為EU234463.2）的ORF區(qū)外側(cè)設(shè)計引物，上游引物為JcOle16.6F：5-CTTTCTCACACTTATCATCAAC-3，下游引物為JcOle16.6R：5-TAAACCAACTCAACTACCTCAA-3，并由生工生物工程（上海）股份有限公司完成序列合成。以提取的總RNA為模板，采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成第一鏈cDNA，取第一鏈cDNA 2 μL，上下游引物各1 μL，2×Taq PCR Master Mix 12.5 μL，ddH2O 8.5 μL，建立25μL的RT-PCR反應(yīng)體系，克隆目的基因cDNA序列，反應(yīng)條件為：94 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃變性30 s，48 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，35個循環(huán)；72 ℃延伸10 min。取2 μL DNA為模板，上下游引物各1 μL，2×Taq PCR Master Mix 12.5 μL，ddH2O 8.5 μL，建立25 μL的PCR反應(yīng)體系，克隆目的基因在染色體上的DNA序列，反應(yīng)條件為：94 ℃預(yù)變性4 min；94 ℃變性30 s，48 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，35個循環(huán)；72 ℃延伸10 min。

1.2.3PCR產(chǎn)物檢測、回收、T/A克隆與測序應(yīng)用1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物，目的片段回收后連接到pMD18-T載體上，將重組子轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細胞，轉(zhuǎn)化復(fù)蘇后的菌液涂布在含有Amp、IPTG和X-Gal的LB固體培養(yǎng)基上，過夜培養(yǎng)后隨機篩選白色菌落，將陽性克隆菌液送往生工生物工程（上海）股份有限公司完成測序。

1.2.4序列的生物信息學(xué)分析生物信息學(xué)分析參照已知文獻報道的方法[15，26-27]進行，包括mRNA及推導(dǎo)的蛋白質(zhì)氨基酸序列相似性搜索，mRNA開放閱讀框查找，蛋白理論分子量、等電點、氨基酸含量和穩(wěn)定性分析，系統(tǒng)發(fā)生樹構(gòu)建，蛋白質(zhì)親水/疏水性特性、跨膜結(jié)構(gòu)、信號肽及功能域預(yù)測，目的蛋白二級、三級結(jié)構(gòu)預(yù)測。

2結(jié)果與分析

2.1麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白JcOle16.6基因克隆

本研究以提取的總RNA和基因組DNA為模板分別進行RT-PCR和普通PCR試驗，均獲得1條位于500～750 bp區(qū)間的特異性cDNA和DNA條帶（圖1），將目的cDNA和DNA條帶進行膠回收、TA克隆和測序，結(jié)果表明，本研究克隆到的麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因cDNA序列長601 bp，序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中登錄的麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因mRNA序列EU234463.2具有100%的相似性，本研究克隆到的麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因DNA序列也為601 bp，序列與601 bp的cDNA序列完全一致。根據(jù)生物信息學(xué)分析結(jié)果，本研究將該目的基因命名為麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白JcOle16.6基因，其601 bp的DNA序列登錄GenBank的序列號為JX073622。表明JcOle16.6基因只包含1個外顯子，沒有內(nèi)含子。

2.2序列分析

本研究克隆獲得麻風(fēng)樹JcOle16.6基因601 bp的基因組DNA序列，其轉(zhuǎn)錄的601 bp的mRNA具有完整的ORF，位于第25至第492 bp區(qū)域，第1至第24 bp區(qū)域為5′UTR，第493至第601 bp區(qū)域為3′UTR。ORF推測編碼的麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋

白JcOle16.6（GenBank序列號為AFP19884）由155個氨基酸殘基組成，相對分子質(zhì)量為16.6 ku，帶負(fù)電荷的氨基酸殘基（天冬氨酸+谷氨酸）為9個，帶正電荷的氨基酸殘基（精氨酸+賴氨酸）為16個，pI為9.99，推測JcOle16.6在生理條件下為堿性蛋白。除谷氨酰胺和半胱氨酸之外，JcOle16.6含有其他18種常見的氨基酸殘基，色氨酸含量最低，為0.6%，天冬氨酸、酪氨酸含量也較低，均為1.3%，亮氨酸含量最高，為12.9%，其他氨基酸含量在2.6%～10.3%之間。因其具有38.97的不穩(wěn)定系數(shù)值，推測JcOle16.6為穩(wěn)定性蛋白質(zhì)。

蛋白質(zhì)相似性分析結(jié)果見（圖2）顯示，麻風(fēng)樹JcOle16.6含有“油質(zhì)蛋白”保守結(jié)構(gòu)域，屬于油質(zhì)蛋白超家族蛋白之一。JcOle16.6蛋白與油桐（Vernicia fordii）的油質(zhì)蛋白Ⅱ、胡楊（Populus euphratica）的油質(zhì)蛋白18.2 ku-like、毛果楊（P. trichocarpa）油質(zhì)蛋白家族蛋白、蓖麻（Ricinus communis）的油質(zhì)蛋白1、川桑（Morus notabilis）的油質(zhì)蛋白5、愛玉子（Ficus pumila var.）的油質(zhì)蛋白高分子量異構(gòu)體、醉蝶花（Tarenaya hassleriana）的油質(zhì)蛋白 5異構(gòu)體、亞麻（Linum usitatissimum）的油質(zhì)蛋白高分子量異構(gòu)體、胡蘿卜（Daucus carota）的脂質(zhì)體膜蛋白、油茶（Camellia oleifera）的Ole Ⅳ蛋白、煙草（Nicotiana sylvestris）的油質(zhì)蛋白 5-like、甜橙（Citrus sinensis）的油質(zhì)蛋白 18.2 ku-like等都具有較高的相似性，E值從9×10-75～3×10-56，一致性60%～83%，相似度74%～91%（表1）。但JcOle166蛋白與該課題組克隆的另一個麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白家族基因JcOle14.3（GenBank序列號為JX073623）編碼的異構(gòu)體JcOle14.3蛋白（GenBank登錄號為AFP19885）之間的相似度較低，以致分析結(jié)果未能顯示出。表明本研究克隆的JcOle16.6基因編碼的JcOle16.6蛋白屬于麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白異構(gòu)體之一。

將13種不同植物的油質(zhì)蛋白進行序列比對分析，結(jié)果見圖3，顯示麻風(fēng)樹JcOle16.6蛋白與其他的油質(zhì)蛋白在肽鏈中間序列具有較高的一致性，而在肽鏈兩端序列卻存在較大差異性。1個絲氨酸和3個脯氨酸組成的脯氨酸結(jié)（Pro-Knot）

為已知植物油質(zhì)蛋白序列的標(biāo)志性結(jié)構(gòu)[12，28]，該保守結(jié)構(gòu)域也存在于麻風(fēng)樹JcOle16.6和其他參比的油質(zhì)蛋白序列中。

油質(zhì)蛋白進化樹分析結(jié)果見圖4，大戟科麻風(fēng)樹JcOle 166和大戟科油桐油質(zhì)蛋白Ⅱ（ADB03185.1）親緣關(guān)系最近，聚為一支，和大戟科蓖麻油質(zhì)蛋白1（EEF40948.1）聚為一個大支；同樣來自麻風(fēng)樹的JcOle14.3（AFP19885.1）和油質(zhì)蛋白1-like（NP_001295613.1）聚為一支，二者與愛玉子（Ficus pumila var.）的油質(zhì)蛋白高分子量異構(gòu)體（ABQ57396.1）、醉蝶花（Tarenaya hassleriana）的油質(zhì)蛋白5異構(gòu)體（XP_010524296.1）屬于一個大分支，但與JcOle166的系統(tǒng)發(fā)育進化距離較遠。推測來自不同植物的同一種油質(zhì)蛋白異構(gòu)體基因具有較近的進化關(guān)系，而來自同一植物的不同油質(zhì)蛋白異構(gòu)體基因具有較遠的進化關(guān)系。

信號肽分析結(jié)果未發(fā)現(xiàn)可能的信號肽序列存在于JcOle16.6蛋白中，表明該蛋白為非分泌性蛋白。疏水性分析結(jié)果見圖5，顯示JcOle16.6蛋白質(zhì)肽鏈在N端1～31位和C端109～155位氨基酸殘基區(qū)域都表現(xiàn)為高度親水性，而中間32～108位氨基酸殘基區(qū)域表現(xiàn)為高度疏水性，表明麻風(fēng)樹JcOle16.6蛋白為兩親性蛋白質(zhì)，即蛋白的兩末端區(qū)域為親水

性，中間區(qū)域為疏水性。蛋白質(zhì)跨膜結(jié)構(gòu)分析結(jié)果見圖6，顯示JcOle16.6蛋白在中間疏水區(qū)域存在2個潛在的跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域，第49～72位的24個氨基酸殘基形成第1個跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域，方向為從膜外到膜內(nèi)螺旋；第80～101位的22個氨基酸殘基形成第二個跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域，方向為從膜內(nèi)到膜外螺旋。表明麻風(fēng)樹JcOle16.6蛋白質(zhì)為含有2個跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域的兩親性蛋白質(zhì)，中間高度疏水區(qū)域位于油體半單位膜內(nèi)，N-末端和C-末端2個高度親水區(qū)域位于油體半單位膜外，即位于胞質(zhì)內(nèi)。

功能蛋白質(zhì)分子在生物體內(nèi)都會執(zhí)行特定的生命活動，其多肽鏈翻譯后通常折疊和盤曲成比較穩(wěn)定的二級結(jié)構(gòu)，并進一步形成高級結(jié)構(gòu)，完成活性功能域構(gòu)象的構(gòu)建。二級結(jié)構(gòu)分析結(jié)果見圖7，顯示麻風(fēng)樹JcOle16.6蛋白可能含有3種二級結(jié)構(gòu)類型，分別為α-螺旋占72.26%、隨機卷曲占2387%，少量延伸鏈占3.87%?？梢姦?螺旋為JcOle16.6蛋白主要二級結(jié)構(gòu)，約占整個肽鏈的3/4，分別位于18～22位（α1）、31～42位（α2）、45～68位（α3）、75～93位（α4）、

98～152位（α5）氨基酸殘基區(qū)域。推測JcOle16.6蛋白α-helix的形成可能與預(yù)測的2個跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域的形成及與油體半單位膜的定位結(jié)合有著密切的關(guān)系。JcOle16.6蛋白二級結(jié)構(gòu)，尤其是α-螺旋結(jié)構(gòu)在應(yīng)用I-TASSER程序預(yù)測的高級結(jié)構(gòu)（圖8）中可清晰顯示出。GO功能分類結(jié)果顯示JcOle16.6與磷脂單分子層膜的油脂儲藏體（GO：0012511）相關(guān)，并能整合到單分子層膜上（GO：0016021）。因此，根據(jù)蛋白質(zhì)疏水性、跨膜結(jié)構(gòu)、二級結(jié)構(gòu)、高級結(jié)構(gòu)和功能分析結(jié)果，推測JcOle16.6蛋白在結(jié)構(gòu)上可分為3個部分：（1）N端約30個氨基酸殘基組成的親水性區(qū)域，分布于油體朝向胞漿一面，α1位于此結(jié)構(gòu)域；（2）C端約47個氨基酸組成的α-螺旋兩親性結(jié)構(gòu)域，也分布于油體朝向胞漿一面，α5位于此結(jié)構(gòu)域；（3）肽鏈中間約78個氨基酸殘基組成的高度疏水性跨膜區(qū)域，分布于油體半單位膜內(nèi)，α2、α3、α4位于此結(jié)構(gòu)域，α3、α4之間存在著由3個脯氨酸和1個絲氨酸組成的Pro-Knot高度保守結(jié)構(gòu)域（圖8），這與JcOle16.6蛋白向油體半單位膜的正確定位和油體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定維持密切相關(guān)。

3結(jié)論與討論

油質(zhì)蛋白是與植物油體特異性結(jié)合的主要蛋白質(zhì)，在油料植物種子中普遍存在[29]，在植物種子成熟過程中油質(zhì)蛋白幾乎覆蓋整個油體表面，使得油體雖以互相積壓形式充滿整個細胞但從不相互聚合，推測油質(zhì)蛋白與植物油體的形成和穩(wěn)定有著密切的關(guān)系[30-32]。油質(zhì)蛋白及其基因已在多種植物中得到了一定的研究[33-37]。本研究分離克隆了麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因家族成員JcOle16.6基因長601 bp的DNA序列（GenBank序列號為JX073622.1），JcOle16.6基因在染色體水平上沒有內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄的JcOle16.6 mRNA具有468 bp 的完整開放閱讀框，編碼含155個氨基酸殘基、分子量為 16.6 ku 的JcOle16.6蛋白（GenBank序列號為AFP19884），屬于植物油體結(jié)合蛋白油質(zhì)蛋白家族的新成員。

不同植物來源的油質(zhì)蛋白在分子量上具有較大的變化。研究表明，特異性存在于植物種子中的油質(zhì)蛋白分子量在 15～26 ku 之間變化[2]。本研究從麻風(fēng)樹種子中分離克隆的JcOle16.6基因表達的JcOle16.6蛋白分子量也在此范圍之內(nèi)，為16.6 ku，符合Anthony和Huang的分析結(jié)果。在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)上JcOle16.6可分為3個結(jié)構(gòu)區(qū)域，即N端約30個氨基酸殘基組成的含1個α-螺旋的親水性結(jié)構(gòu)域，肽鏈中間約78個氨基酸殘基組成的含3個α-螺旋的高度疏水性跨膜結(jié)構(gòu)域，C端約47個氨基酸組成的含1個α-螺旋的兩親性結(jié)構(gòu)域。N端親水性結(jié)構(gòu)域和C端兩親性結(jié)構(gòu)域均分布于油體朝向胞漿一面，中間疏水跨膜結(jié)構(gòu)域分布于油體半單位膜內(nèi)，存在于中間疏水跨膜結(jié)構(gòu)域中的由3個脯氨酸和1個絲氨酸組成的Pro-Knot高度保守結(jié)構(gòu)域在JcOle16.6蛋白與油體半單位膜準(zhǔn)確定位和穩(wěn)定維持油體結(jié)構(gòu)方面起著重要作用。與相關(guān)研究關(guān)于油質(zhì)蛋白結(jié)構(gòu)和功能的論述[35]一致，表明油質(zhì)蛋白基因在不同植物中表達的油質(zhì)蛋白能形成類似的結(jié)構(gòu)特性并發(fā)揮相同的生物學(xué)功能。

油質(zhì)蛋白基因常以為數(shù)不多的基因家族形式存在。在裸子植物中只發(fā)現(xiàn)1種油質(zhì)蛋白[36]，在已研究的被子植物中發(fā)現(xiàn)在同一植物中存在氨基酸序列和分子量大小都明顯不同的多種油質(zhì)蛋白異構(gòu)體[37-38]。劉玉君等對麻風(fēng)樹種子油體蛋白進行電泳分析，發(fā)現(xiàn)分子量分別為20、24 ku的2種油質(zhì)蛋白異構(gòu)體可能存在于麻風(fēng)樹種子油體中[39]。本研究從麻風(fēng)樹種子中分離克隆的JcOle16.6基因產(chǎn)物推測為16.6 ku的油質(zhì)蛋白，同時筆者從麻風(fēng)樹種子中成功克隆的JcOle14.3基因產(chǎn)物推測為14.4 ku的油質(zhì)蛋白。推測麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因也以基因家族形式存在，其表達產(chǎn)物可能以不同分子量油質(zhì)蛋白異構(gòu)體形式同時存在于同一油體中。

油質(zhì)蛋白作為植物油體中發(fā)現(xiàn)最早、含量最豐富的油體結(jié)合蛋白被認(rèn)為是需要長期貯藏的油體所必需的[40]，推測從油體的發(fā)生到分解消失過程中發(fā)揮重要的生物學(xué)功能。研究推測油質(zhì)蛋白在植物種子發(fā)育及成熟過程中直接影響油體的形成、穩(wěn)定性以及大小[41]，在種子萌發(fā)、油體動員與解體過程中可作為酯酶識別并結(jié)合油體的特殊信號[42-43]。但JcOle16.6及其他異構(gòu)體蛋白在麻風(fēng)樹種子油體的發(fā)生到分解消失過程中的具體生物學(xué)功能還有待于進一步研究闡明。

本研究分離克隆了麻風(fēng)樹油質(zhì)蛋白基因家族成員JcOle16.6基因長601 bp的DNA序列（GenBank序列號為JX073622.1），JcOle16.6基因沒有內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄的JcOle16.6 mRNA具有468 bp的完整開放閱讀框，編碼含155個氨基酸殘基、分子量為16.6 ku的JcOle16.6蛋白（GenBank序列號為AFP19884），屬于植物油體結(jié)合蛋白油質(zhì)蛋白家族的新成員。JcOle16.6具有3個結(jié)構(gòu)域，即N端約30個氨基酸殘基組成的含1個α-螺旋的親水性結(jié)構(gòu)域，肽鏈中間約78個氨基酸殘基組成的含3個α-螺旋的高度疏水性跨膜結(jié)構(gòu)域，C端約47個氨基酸組成的含1個α-螺旋的兩親性結(jié)構(gòu)域。N端親水性結(jié)構(gòu)域和C端兩親性結(jié)構(gòu)域分布于油體朝向胞漿一面，中間疏水跨膜結(jié)構(gòu)域分布于油體半單位膜內(nèi)，存在于中間疏水跨膜結(jié)構(gòu)域中的由3個脯氨酸和1個絲氨酸組成的Pro-Knot高度保守結(jié)構(gòu)域在JcOle16.6蛋白與油體半單位膜準(zhǔn)確定位和穩(wěn)定維持油體結(jié)構(gòu)方面起著重要作用。

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