戴 蕓，凃　岱云，柯春霞（1.黃石市中心醫(yī)院（湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院），湖北 黃石 435000；2.腎臟疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 黃石 435000）

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高效液相色譜法測(cè)定大鼠血漿中的艾普拉唑濃度

戴 蕓1，2，凃岱云1，2，柯春霞1，2
（1.黃石市中心醫(yī)院（湖北理工學(xué)院附屬醫(yī)院），湖北 黃石 435000；2.腎臟疾病發(fā)生與干預(yù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 黃石 435000）

摘要：建立大鼠血漿中艾普拉唑濃度測(cè)定的高效液相色譜法（HPLC）法，考察艾普拉唑在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征。色譜柱為Diamonsil C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫為室溫，流動(dòng)相為25 mM 磷酸氫二鉀緩沖液（pH 6.86）—甲醇（40：60，v/v），流速為1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為302 nm，進(jìn)樣量為25 μL。6只雄性SD大鼠按照5 mg/kg的劑量靜脈滴注艾普拉唑。測(cè)定大鼠血漿中艾普拉唑的濃度，藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)采用DAS ver2.0計(jì)算。建立的大鼠血漿中艾普拉唑濃度測(cè)定的HPLC方法準(zhǔn)確，快速，簡(jiǎn)單，靈敏度高，重復(fù)性好，適用于大鼠體內(nèi)艾普拉唑藥代動(dòng)力學(xué)的研究。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；艾普拉唑；藥代動(dòng)力學(xué)；大鼠

艾普拉唑（Ilaprazole），又名 IY-81149，是由韓國(guó)一洋制藥公司研制的新一代強(qiáng)效質(zhì)子泵抑制劑（proton pump inhibitor，PPI），對(duì)胃酸分泌有顯著的抑制作用。在臨床應(yīng)用中，艾普拉唑無(wú)論是單獨(dú)用藥還是與抗生素聯(lián)合用藥治療消化性胃潰瘍，其效果都要優(yōu)于對(duì)照藥物［1，2］。另外，其抑制幽門(mén)螺旋桿菌（HP）的作用比奧美拉唑強(qiáng)，有效治療劑量?jī)H為奧美拉唑的 1/4，不易產(chǎn)生抗藥性。在相同的藥效下，艾普拉唑的毒副作用較不明顯。因而艾普拉唑具有十分廣闊的市場(chǎng)前景，是消化性潰瘍、反流性食管炎等消化道疾病患者的福音［3，4］。

艾普拉唑作為一種新的質(zhì)子泵抑制劑，有比較好的應(yīng)用前景。本實(shí)驗(yàn)建立了適于大鼠血漿中艾普拉唑濃度測(cè)定的高效液相色譜法（HPLC），方法準(zhǔn)﹑﹑確靈敏重復(fù)性好，結(jié)果可靠。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1動(dòng)物

6只普通雄性SD大鼠，體重（200±20）g，購(gòu)自北京維通利華動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK（京）2010-0016。

1.2藥品與試劑

艾普拉唑?qū)φ掌罚ㄉ虾２╊D生物化工有限公司）；乙腈、甲醇（色譜純，美國(guó)賽默飛世爾公司）；磷酸氫二鉀（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；水為娃哈哈純凈水。

1.3儀器

UltiMate 3000 型高效液相色譜系統(tǒng)，配有四元泵和自動(dòng)脫氣機(jī)；DAD-3000（RS）檢測(cè)器、Chromeleon 7色譜工作站；Sigma 3K15 高速低溫離心機(jī)（Sigma公司）；DCY-24S水浴式氮吹儀（青島?？苾x器有限公司）；BS110S型電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）；XW-80A旋渦混合器（上海青浦滬西儀器廠）；KQ 500DE型數(shù)控超聲波清潔器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.4方法

1.4.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制

精密稱(chēng)取艾普拉唑?qū)φ掌愤m量，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配制成1.0 mg/mL的儲(chǔ)備液，4 ℃保存。臨用前用甲醇稀釋?zhuān)渲瞥砂绽驖舛葹?.5、1.0、5.0、10、50、100 和200 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。然后采用空白大鼠血漿10倍稀釋上述標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，使大鼠血漿中的艾普拉唑濃度分別為0.05、0.1、0.5、1.0、5.0、10和20 μg/mL。

1.4.2血漿樣品處理

血漿樣品200 μL，加入600 μL乙腈，充分渦旋振蕩混合1 min，14 000 r/min離心10 min，取上清600 μL置1.5 mL離心管中，氮?dú)獯蹈?，?00 μL流動(dòng)相復(fù)溶，進(jìn)樣25 μL進(jìn)行分析。

1.4.3色譜條件［5］

色譜柱為Diamonsil C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫為室溫，流動(dòng)相為25 mM 磷酸氫二鉀緩沖液（pH 6.86）—甲醇（40：60，v/v），流速為1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為302 nm，進(jìn)樣量為25 μL。

1.4.4大鼠藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)方法

6只普通 SD大鼠腹腔注射 10%水合氯醛（2 mL/kg），使大鼠進(jìn)入不完全麻醉狀態(tài)［6］，將艾普拉唑用生理鹽水配制成質(zhì)量濃度為0.2 mg/mL的藥液，按照5 mg/kg的劑量對(duì)大鼠進(jìn)行尾靜脈滴注。分別于給藥前和給藥后 5、10、20、30、40、50、60、120、180、240、360、480和720 min從大鼠眼球靜脈叢取血0.3 mL。3 000 r/min離心15 min，取血漿-30 ℃保存?zhèn)溆茫?，8］。

1.4.5數(shù)據(jù)處理

計(jì)數(shù)資料以mean ± SD表示，采用DAS ver2.0軟件計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，Origin 8.5繪制藥物血漿濃度-時(shí)間曲線。

2　結(jié) 果

2.1方法學(xué)驗(yàn)證

在上述色譜條件下，艾普拉唑的保留時(shí)間為5.57 min。空白血漿、空白血漿中加入艾普拉唑及灌胃給藥后大鼠血漿色譜圖表明在該色譜條件下，空白基質(zhì)中的雜質(zhì)不干擾艾普拉唑的測(cè)定（圖1）。

以艾普拉唑濃度（X）為橫坐標(biāo)，艾普拉唑峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，做線性回歸，得相應(yīng)的回歸方程Y = 271.08X -651.17，r = 0.9988，顯示艾普拉唑血藥濃度在0.05～20 μg/mL的范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。定量下限為0.05 μg/mL。

圖1　大鼠血漿艾普拉唑色譜圖Fig 1 Chromatograms for ilaprazole in rat plasma

采用低（0.05 μg/mL）、中（1.0 μg/mL）、高（20 μg/mL）三個(gè)濃度艾普拉唑血漿樣品考察方法的精密度、準(zhǔn)確度和回收率（表1），并考察艾普拉唑血漿樣品的穩(wěn)定性，包括樣品在室溫放置4 h的穩(wěn)定性、進(jìn)樣倉(cāng)放置24 h的穩(wěn)定性和-30 ℃冷凍保存14 d的穩(wěn)定性（表2）。方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果顯示該方法符合生物樣品分析要求。

2.2大鼠藥動(dòng)學(xué)

大鼠靜脈滴注艾普拉唑（5 mg/kg）后的藥物血漿濃度-時(shí)間曲線和主要的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)分別見(jiàn)圖2和表3。

3　結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)建立的大鼠血漿中艾普拉唑的 HPLC方法簡(jiǎn)便，快速，準(zhǔn)確，靈敏度高，重復(fù)性好，能夠測(cè)定大鼠血漿中艾普拉唑的濃度，適用于大鼠體內(nèi)艾普拉唑的藥動(dòng)學(xué)以及后續(xù)的組織分布和排泄研究。

表1　大鼠血漿中艾普拉唑測(cè)定方法的精密度、準(zhǔn)確度和回收率（n=5）Table 1　Precision and accuracy of the assay method for ilaprazole in rat plasma （n= 5）

表2　 大鼠血漿中艾普拉唑的穩(wěn)定性（mean±SD，n=5）Table 2　Stability of ilaprazole in rat plasma （mean±SD，n=5）

圖2　艾普拉唑在大鼠體內(nèi)的藥時(shí)曲線（mean±SD，n=6）Fig.2 The mean concentration-time curves of ilaprazole in rats （mean±SD，n=6）

表3　大鼠靜脈滴注艾普拉唑后的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)（mean±SD，n=6）Table 3　Pharmacokinetic parameters of ilaprazole after i.v.gtt.administration in rats?。╩ean±SD，n=6）

本實(shí)驗(yàn)得出大鼠靜脈滴注艾普拉唑（5 mg/kg）的主要藥動(dòng)參數(shù)為AUC為（655.16±103.63）mg min/L，MRT為（81.11±15.36）min，t1/2z為（52.24 ± 18.85）min，Tmax為（25.00±0.00）min，CLz為（0.008 ± 0.002）L/min/kg，Vz為（0.58±0.07）L/kg，Cmax為（7.24±0.62）mg/L。

參考文獻(xiàn)：

［1］Sachs G.Proton pump inhibitors and acid-related diseases ［J］.Pharmacotherapy，1997，17（1）∶ 22- 37.

［2］Mullin JM，Gabello M，Murray LJ，et al.Proton pump inhibitors∶ actions and reactions ［J］.Drug Discovery Today，2009，14 （13/14）∶ 648- 660.

［3］Sachs G，Shin JM，Howden CW.Review article∶ the clinical pharmacology of proton pump inhibitors ［J］.Aliment Pharmacol Ther，2006，23（Suppl 2）∶ 2- 8.

［4］Shi S，Klotz U.Proton pump inhibitors∶ an update of their clinical use and pharmacokinetics ［J］.Eur J Clin Pharmacol，2008，64 （10）∶ 935-951.

［5］陳堯，歐陽(yáng)冬生，譚志榮，等．HPLC測(cè)定艾普拉唑片劑的含量［J］．中國(guó)藥學(xué)雜志，2008，43（12）：940-942．

［6］熊山，李敬來(lái)，王曉英，等．莫諾苷大鼠腦靶向分布研究［J］．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2015，21（10）：87-90．

［7］周淦．I類(lèi)新藥艾普拉哩的臨床藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究［D］．長(zhǎng)沙：中南大學(xué)，2009．

［8］周麗君，李敬來(lái)，王曉英，等．高效液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定比格犬血漿中的艾普拉唑及其藥代動(dòng)力學(xué)［J］．色譜，2012，30（5）：452-456．

Determination of Ilaprazole in Rat Plasma by HPLC

DAI Yun1，2，TU Dai-yun1，2，KE Chun-xia1，2
（1.Department of Pharmacy，Huangshi Central Hospital，Affiliated Hospital of Hubei Polytechnic University，Hubei Huangshi 435000，China；2.Hubei Key Laboratory of Kidney Disease Pathogenesis and Intervention，Hubei Huangshi 435000，China）

Abstract：An HPLC method for the determination of plasma concentration of ilaprazole was established，and the pharmacokinetics of ilaprazole in rats was studied.The chromatographic conditions were as follows：a Diamonsil C18 chromatographic column （150 mm×4.6 mm，5 μm） was used at the temperature of room temperature.The mobile phase consisted of 25 mM potassium dihydrogen phosphate buffer solution （pH 6.86）-methanol （40：60，v/v） and was pumped at a flow rate of 1 mL/min.The determination wavelength was 302 nm and the injected volume was 25 μL.6 male SD rats were administrated of 5 mg/kg ilaprazole by intravenous drip.The concentration of ilaprazole in rat plasma was determined and the pharmacokinetic parameters were calculated by DAS ver2.0.The HPLC method for determining ilaprazole concentration in rat plasma is accurate，rapid，simple，sensitive and repeatability.It has been successfully applied in quantification of ilaprazole in rat plasma.

Key words：HPLC；Ilaprazole；Pharmacokinetics；Rats

中圖分類(lèi)號(hào)：TQ 460

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1671-0460（2016）01-0207-03

收稿日期：2015-10-09

作者簡(jiǎn)介：戴蕓（1974-），女，湖北黃石人，主管藥師，1997年畢業(yè)于中國(guó)藥科大學(xué)藥學(xué)專(zhuān)業(yè)，研究方向：從事臨床藥學(xué)技術(shù)工作。

通訊作者：柯春霞（1975-），女，主管護(hù)師，研究方向。E-mail：kechunxia@hotmail.com。