趙　歡，李婉娟，萬　良，楊大佐，周一兵

（大連海洋大學遼寧省海洋生物資源恢復與生境修復重點實驗室，遼寧大連116023）

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Cd（Ⅱ）、Cu（Ⅱ）脅迫對雙齒圍沙蠶熱休克蛋白70（HSP70）基因表達的影響

趙歡，李婉娟，萬良，楊大佐，周一兵

（大連海洋大學遼寧省海洋生物資源恢復與生境修復重點實驗室，遼寧大連116023）

摘要：為研究重金屬濃度的變化對雙齒圍沙蠶Perinereisaibuhitensis熱休克蛋白70（heat shock proteins 70，HSP70）基因的表達變化，采用實時熒光定量PCR方法，分析了重金屬Cu（Ⅱ）、Cd（Ⅱ）單一誘導及聯(lián)合作用下雙齒圍沙蠶HSP70基因的表達規(guī)律。結果表明：Cu（Ⅱ）單獨作用時，沙蠶HSP70 mRNA表達量隨時間的增加而增大，在誘導的第3天時不同濃度組沙蠶HSP70 mRNA表達量依次為22.86μg/L濃度組＞44.50μg/L濃度組＞4.45μg/L濃度組，而在誘導的第7天和第14天時HSP70 mRNA表達量與Cu（Ⅱ）濃度呈正相關；Cd（Ⅱ）單獨作用時，沙蠶HSP70 mRNA表達量則隨Cd（Ⅱ）濃度和誘導時間的增加而增大，但較Cu（Ⅱ）單獨作用下變化趨勢平緩；Cu（Ⅱ）和Cd（Ⅱ）聯(lián)合作用下，沙蠶HSP70 mRNA表達量亦與暴露濃度和時間呈正相關，在誘導的第3天和第7天時45.70μg/L Cu（Ⅱ）+10μg/L Cd（Ⅱ）濃度組HSP70 mRNA表達量高于Cu（Ⅱ）和Cd（Ⅱ）單一作用，表明Cu（Ⅱ）和Cd（Ⅱ）存在一定的協(xié)同作用。

關鍵詞：雙齒圍沙蠶；熱休克蛋白70（HSP70）；銅離子；鎘離子；聯(lián)合毒性

熱休克蛋白70（HSP70）是熱休克蛋白 （heat shock proteins，HSPs）家族中最保守、最受關注的一類，HSP70蛋白具有保護細胞的作用，在高溫、缺氧、DNA損傷、環(huán)境毒物作用等應激條件下，可以維持細胞蛋白質空間構象的穩(wěn)定，抵抗由環(huán)境脅迫引起的損傷，提高細胞對外界刺激的耐受性。當重金屬污染脅迫發(fā)生時，機體內HSP70基因的變化可以快速地被檢測出來，同時，此變化在重金屬濃度接近于環(huán)境背景值甚至更低的水平下均能發(fā)生，使得HSP70基因成為很有潛力的環(huán)境污染監(jiān)測指標。大量研究表明，生物體內HSP70基因的變化可以用于標記生物細胞受脅迫的情況。Rajeshkumar等［1］研究發(fā)現(xiàn)，重金屬污染下遮目魚Chanos chanos的鰓和肝臟中HSP70基因均會有顯著表達。沈驊等［2-3］研究發(fā)現(xiàn)，重金屬 Pb、Cd、Zn污染可以顯著誘導鯽Carassius auratus應激蛋白HSP70基因的表達。Mic'ovic'等［4］檢測到Cd在24 h內可以顯著誘導紫貽貝Mytilusedulis消化腺中HSP基因表達，且與 Cd濃度呈線性關系。Radlowska等［5］認為，低濃度重金屬污染可誘導貽貝體內HSP70基因的輕微變化，而高濃度重金屬污染可導致HSP70基因高水平表達，且重金屬聯(lián)合作用時對HSP70基因的誘導表達更為顯著。

多毛類沙蠶作為海洋底棲動物的優(yōu)勢種類，具有特殊的生態(tài)和生物屬性：一方面，沙蠶為重要的餌料生物，處于海洋生態(tài)系統(tǒng)能量流動與物質循環(huán)中的關鍵環(huán)節(jié)［6-7］；另一方面，沙蠶對重金屬、合成有機物、石油烴等持久性污染物具有較強的耐受和超富集作用［8-14］。富集在沙蠶體內的污染物不一定會對沙蠶造成嚴重傷害，但卻可能通過食物鏈對海洋頂級消費者產(chǎn)生重要影響，因此，沙蠶既可以作為海洋沉積質環(huán)境污染早期生態(tài)風險預測和評價的指示物，又可以成為近岸污染沉積質生境修復的關鍵種類。本試驗中，以在中國廣泛分布的雙齒圍沙蠶Perinereisaibuhitensis為研究對象，研究了在重金屬Cu（Ⅱ）、Cd（Ⅱ）單一及聯(lián)合作用下雙齒圍沙蠶HSP70 mRNA基因的表達變化規(guī)律，旨在揭示重金屬濃度的變化與雙齒圍沙蠶HSP70基因表達量之間的相關性，旨在為利用雙齒圍沙蠶HSP70基因作為環(huán)境監(jiān)測指標提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗用雙齒圍沙蠶采自遼寧省盤錦雙臺子河口潮灘沉積質，挑選體質量為1.5～2.0 g的個體，采集后將雙齒圍沙蠶置于加冰泡沫保溫箱中，運回至遼寧省海洋生物資源恢復與生境修復重點實驗室，于18℃海水中暫養(yǎng)一周，每24 h更換一次海水。

1.2 方法

1.2.1 毒性誘導試驗 參考預試驗中獲得的Cu（Ⅱ）對雙齒圍沙蠶96 h LC50半致死濃度以及國家水質標準 （GB30971997）Ⅲ類水質Cd（Ⅱ）的濃度，依據(jù)周永欣等［15］的方法，選取0.01、0.05、0.10三個系數(shù)，設置Cu（Ⅱ）、Cd（Ⅱ）單一作用濃度，聯(lián)合誘導試驗組濃度根據(jù)毒性相加原則設置，即Cu（Ⅱ）濃度設為4.57、22.86、45.70μg/L，Cd（Ⅱ）濃度設為 1、5、10μg/L，Cu（Ⅱ）+ Cd（Ⅱ）濃度設為45.70μg/L Cu（Ⅱ）+1μg/L Cd（Ⅱ）、22.86μg/L Cu（Ⅱ）+5μg/L Cd（Ⅱ）、45.70μg/L Cu（Ⅱ）+10μg/L Cd（Ⅱ），每種毒物試驗均設一個空白對照組，每組設置3個重復。試驗在2 L塑料燒杯中進行，試驗開始時，先加入不同重金屬濃度的溶液，然后在每個燒杯中放入5尾完整、健康、活性良好的沙蠶個體。試驗期間不投餌，每24 h更換一次溶液，試驗海水溫度控制在（18±0.5）℃。分別于第3、7和14天［16］時，從各濃度組中隨機選取3尾沙蠶放入超低溫冰箱 （-80℃）中，用于后續(xù)基因表達檢測。

1.2.2 總RNA提取、反轉錄和引物設計 取雙齒圍沙蠶體壁肌肉0.1 g，液氮下研磨至粉末狀，按照Trizol說明書 （購自 Invitrogen公司）提取總RNA，使用 Recombinant DNaseⅠ試劑盒 （購自TaKaRa公司）對總RNA進行純化，將純化后的RNA稀釋至500 ng/μL，按照SYBR?PrimeScript?RT-PCR KitⅡ說明書 （購自TaKaRa公司）進行cDNA第一條鏈的合成。反應完成后將得到的cDNA于冰箱 （-20℃）中保存?zhèn)溆谩?/p>

將空白對照組與各處理組總RNA濃度進行標準化，再對β-actin基因運用RT-PCR方法檢測，結果表明，處理組β-actin mRNA表達未受影響，故本研究中可采用β-actin作為內參基因。根據(jù)本實驗室已獲得的雙齒圍沙蠶HSP70 cDNA序列［17］（GenBank登錄號：HQ449186）及β-actin內參［16］基因序列設計引物，引物序列詳見表1。

表1　試驗所用引物序列Tab.1 Primers used in this experim ent

1.2.3 實時熒光定量 PCR 以對照組總 RNA （500 ng）反轉錄獲得的cDNA作為標準品，按5倍梯度稀釋 （50、10、2、0.4、0.08 ng）作為模板，分別進行內參基因β-actin和目的基因HSP70標準曲線的繪制，在確定目的基因與內參基因擴增效率相同的情況下進行 Real-Time PCR。采用SYBR?PrimeScript?RT-PCR KitⅡ在ABIStepOne熒光定量PCR儀上進行擴增。Real-Time PCR反應體系 （共20μL）：SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ 10 μL，PCR Forward Primer 0.8μL，PCR Reverse Primer 0.8μL，ROX Reference Dye 0.4μL，cDNA 2μL，ddH2O 6μL。Real-Time PCR反應條件：95℃下預變性5min；95℃下變性30 s，95℃下退火5 s，60℃下延伸30 s，共進行40個循環(huán)。每個樣品進行3次重復，擴增結束后進行熔解曲線分析，取部分擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳、測序以進行驗證。

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用2-△△CT法進行重金屬脅迫下雙齒圍沙蠶HSP70基因相對表達量的分析。應用SPSS 13.0軟件對各樣品HSP70基因相對表達量進行分析，采用多重比較法進行各組間的差異顯著性檢驗，顯著性水平設為0.05，極顯著性水平設為0.01。

2 結果與分析

2.1 內參基因和目的基因標準曲線的建立

對β-actin和HSP70基因的熔解曲線進行分析發(fā)現(xiàn)，兩者熔解曲線均呈現(xiàn)單一峰。取部分擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳、測序發(fā)現(xiàn)，無引物二聚體及非特異性擴增出現(xiàn)，證明兩個基因擴增的特異性和準確性良好。通過反應液內模板數(shù)與每個反應管內熒光信號達到設定域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù) （CT）分別建立β-actin和HSP70的標準曲線?？梢缘贸靓?actin的曲線方程為Y=21.173-3.3 lg X，相關系數(shù)R=0.997，HSP70的曲線方程為 Y=23.154-3.223 lg X，相關系數(shù)R=1.000，這表明兩個標準曲線均顯示出良好的線性關系，可以在寬廣的范圍內進行準確定量。

2.2 不同濃度Cu（Ⅱ）脅迫下沙蠶HSP70基因表達隨時間的變化

如圖1所示，不同濃度Cu（Ⅱ）濃度組均能顯著誘導雙齒圍沙蠶HSP70基因的表達，并且隨著誘導時間的延長，各濃度組沙蠶HSP70基因表達量也不斷升高。暴露第3天時，各濃度組HSP70 mRNA表達量分別為對照組的3.69、5.37和3.72倍，其中僅22.86μg/L Cu（Ⅱ）濃度組沙蠶HSP70 mRNA表達量顯著高于對照組 （P＜0.05）；暴露第7天時，各濃度組沙蠶HSP70 mRNA表達量較第3天均有所升高，而對照組基本無變化，各濃度組HSP70 mRNA表達量均顯著高于對照組 （P＜0.05），分別為對照組的4.38、6.80和6.56倍；暴露第14天時，各濃度組HSP70 mRNA表達量均達到最高值，均顯著高于對照組 （P＜0.05），分別為對照組的5.41、7.40和8.13倍，HSP70 mRNA表達量呈現(xiàn)隨Cu（Ⅱ）濃度升高而增加的趨勢。

注：標有不同小寫字母者表示組間有顯著性差異 （P＜0.05），標有相同小寫字母者表示組間無顯著性差異 （P＞0.05），下同Note：Themeans with different letters are significant differences at the 0.05 probability level，and the means with the same letters are not significant differences，et sequentia圖1　不同濃度Cu（Ⅱ）脅迫下雙齒圍沙蠶HSP70基因表達變化特征Fig.1 The HSP70 m RNA exp ression pattern of lugw orm Perinereis aibuhitensis under different concentrations of Cu（Ⅱ）

2.3 不同濃度Cd（Ⅱ）脅迫下雙齒圍沙蠶HSP70基因表達隨時間的變化

如圖 2所示，Cd（Ⅱ）暴露下雙齒圍沙蠶HSP70基因表達變化趨勢與Cu（Ⅱ）暴露下相似，表現(xiàn)出明顯的劑量-時間-效應關系，但是相比Cu（Ⅱ），沙蠶HSP70基因表達在Cd（Ⅱ）誘導下增加趨勢較緩。暴露第3天時，各濃度組 HSP70 mRNA表達量均高于對照組，分別為對照組的1.70、1.98和4.52倍；暴露第7天時，各濃度組沙蠶HSP70 mRNA表達量與第3天時相比略有升高，分別為對照組的2.06、3.45和4.81倍；暴露第14天時，各濃度組HSP70 mRNA表達量均達到最高值，分別為對照組的3.54、4.08和4.93倍；不同時間點，僅10μg/L濃度組HSP70 mRNA表達量顯著高于對照組 （P＜0.05），其余組間均無顯著性差異 （P＞0.05）。

圖2　不同濃度Cd（Ⅱ）脅迫下雙齒圍沙蠶HSP70基因表達變化特征Fig.2 The HSP70 m RNA exp ression pattern of lugw orm Perinereis aibuhitensis under different concentrations of Cd（Ⅱ）

2.4 不同濃度Cu（Ⅱ）與Cd（Ⅱ）聯(lián)合脅迫下雙齒圍沙蠶HSP70基因表達隨時間的變化

如圖3所示，在Cu（Ⅱ）與Cd（Ⅱ）聯(lián)合作用下，沙蠶HSP70基因表達呈現(xiàn)與Cu（Ⅱ）與Cd（Ⅱ）單獨作用下相同的變化趨勢，沙蠶HSP70基因表達量隨暴露濃度的上升而增加，表達量亦與暴露時間呈正相關，基因表達量變化趨勢與Cu（Ⅱ）單獨作用時較為相似。暴露第3天時，各濃度組HSP70 mRNA表達量分別為對照組的2.69、5.78和6.89倍，其在高濃度組的聯(lián)合暴露下呈現(xiàn)比兩種重金屬單獨作用時更明顯的上升趨勢，其中兩個高濃度組［22.86μg/L Cu（Ⅱ）+5μg/L Cd（Ⅱ）、45.70 μg/L Cu（Ⅱ）+10μg/L Cd（Ⅱ）］HSP70 mRNA表達量顯著高于對照組 （P＜0.05）；暴露第7天時，各濃度組HSP70 mRNA表達量分別為對照組的4.12、6.94、8.14倍，3個濃度組均顯著高于對照組 （P＜0.05）；暴露第14天時，各濃度組HSP70 mRNA表達量分別為對照組的4.04、6.48和8.13倍，其中兩個高濃度組顯著高于對照組 （P＜0.05）。

圖3　不同濃度Cd（Ⅱ）和Cu（Ⅱ）聯(lián)合脅迫下雙齒圍沙蠶HSP70基因表達變化特征Fig.3 The HSP70 m RNA exp ression pattern of lugw orm Perinereis aibuhitensis induced by d ifferent combined concentrations of Cu（Ⅱ）and Cd（Ⅱ）

3 討論

HSP70作為應激保護蛋白，任何應激條件均可誘導機體的熱休克蛋白合成增加，它能使動物迅速適應環(huán)境的變化，保護機體不受或少受損害［18］。很多研究表明，熱休克蛋白在機體對抗重金屬離子引起的損傷中起著重要作用，現(xiàn)已證實，在重金屬濃度接近于環(huán)境背景值甚至更低的水平時均能誘導該蛋白的轉錄和表達，因此，開展低劑量重金屬脅迫下生物體HSP70基因表達變化規(guī)律的研究，可以為環(huán)境污染預警提供重要的理論依據(jù)。中國國家海水水質標準中對第Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ類水質中Cu濃度設置的界限值分別為5、10、50μg/L，Cd濃度的界限值分別為1、5、10μg/L，本試驗中，Cu（Ⅱ）和Cd（Ⅱ）單獨作用時分別設置了4.57、22.86、45.70μg/L和1、5、10μg/L 3個濃度，試驗濃度的設計接近實際環(huán)境中兩種重金屬可能存在的濃度，結果表明，沙蠶HSP70基因在該濃度范圍內出現(xiàn)表達量的變化，證實了沙蠶HSP70基因對環(huán)境脅迫亦具有敏感性，這與前人所得到的結論相一致，為利用沙蠶HSP70基因作為分子標記進行環(huán)境污染預警提供了重要的理論依據(jù)和技術支持。

3.1 單一重金屬污染對HSP70基因表達的影響

當生物受到重金屬脅迫時，體內熱休克蛋白為抵御外界危害會進行相應的調控，含量會出現(xiàn)明顯變化。Kim等［19］研究表明，Cu、Zn、Ag、Cd等多種重金屬能誘導橈足類Tigriopus japonicus HSP10、HSP20、HSP60、HSP70等多個熱休克蛋白家族基因表達上調。沈驊等［20］研究了Cu（Ⅱ）對鯽腦組織HSP70基因表達的影響，結果表明，Cu（Ⅱ）濃度組鯽腦組織應激蛋白基因HSP70均有顯著的誘導表達 （P＜0.05），在0.25、0.05、0.01 mg/L高濃度試驗組中HSP70基因表達量上調尤為明顯。劉婧婧等［21］研究發(fā)現(xiàn)，Cd（Ⅱ）脅迫下渦蟲DjHSP70基因表達隨Cd（Ⅱ）濃度的增加呈現(xiàn)遞增的趨勢，DjHSP70基因表達量在誘導第9天時達到最大值，第15天時表達量下降，但仍顯著高于對照組。本試驗中，Cu（Ⅱ）單獨暴露條件下，中濃度組沙蠶在第3、7天時HSP70基因表達量略高于高濃度組，在第14天時沙蠶 HSP70基因表達量均隨Cu（Ⅱ）濃度的增加而增加；Cd（Ⅱ）單獨暴露下，沙蠶HSP70基因表達與Cd（Ⅱ）濃度間亦存在同樣的劑量-效應關系，這與對其他物種的報道結果相一致。Kim等［19］比較了Cu、Zn、Ag、Cd等多種重金屬誘導下橈足類Tigriopus japonicus熱休克蛋白基因的表達量變化，發(fā)現(xiàn)不同重金屬脅迫下基因表達量趨勢為Cu＞Zn＞Ag＞Cd。對比Cu（Ⅱ）和Cd（Ⅱ）單獨誘導下沙蠶 HSP70表達量的變化趨勢，由4.57μg/L Cu（Ⅱ）和5μg/L Cd（Ⅱ）濃度組沙蠶HSP70基因表達量情況可以看出，Cd（Ⅱ）誘導下雙齒圍沙蠶HSP70基因表達量的增加趨勢小于Cu（Ⅱ），這與Kim等［19］得到的結論相同，推測出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因可能與重金屬的種類及對沙蠶的毒性差異有關。王晶等［22］研究了雙齒圍沙蠶暴露于不同濃度的Cu（Ⅱ）和Cd（Ⅱ）的毒性效應，結果發(fā)現(xiàn)，Cu（Ⅱ）對沙蠶的毒性效應要大于Cd（Ⅱ），這可能是由于與Cu（Ⅱ）相比，Cd（Ⅱ）進入生物體后更易與含巰基 （-SH）的金屬硫蛋白結合，減少了Cd（Ⅱ）與細胞的非特異性結合，從而降低了Cd（Ⅱ）對沙蠶機體的損傷。對于這一推測，需要進行金屬硫結合蛋白表達的研究，探討不同重金屬污染脅迫下金屬硫蛋白和熱休克蛋白表達之間的相關性以進一步地驗證。

3.2 復合重金屬污染對HSP70基因表達的影響

在實際污染水環(huán)境中，單一重金屬污染較少，大部分情況都是重金屬的聯(lián)合污染。聯(lián)合毒性機制較為復雜，由于不同金屬離子的分子形態(tài)差異，導致不同組合聯(lián)合毒性效應迥然，差異甚大。重金屬對生物的聯(lián)合毒性效應通常表現(xiàn)為相加、拮抗或協(xié)同作用［23］。近年來，國內外很多學者研究了Cu和Cd聯(lián)合作用對多種生物的毒性效應，普遍認為兩者共存時表現(xiàn)為協(xié)同作用［23-24］，Cu和Cd對水螅Hydra［25］和孔雀魚Poecilia reticulata［26］的聯(lián)合急性作用均表現(xiàn)為協(xié)同作用，但對泥螺Bullacta exarata［27］的聯(lián)合急性作用表現(xiàn)為拮抗作用。朱旭等［28］研究表明，Cu（Ⅱ）和Zn（Ⅱ）對泥鰍的聯(lián)合毒性48 h為協(xié)同，72 h為拮抗。本試驗結果表明，不同濃度的Cu（Ⅱ）和Cd（Ⅱ）聯(lián)合作用下，雙齒圍沙蠶HSP70基因表達較Cd（Ⅱ）單一作用時要明顯增加，但與Cu（Ⅱ）單獨作用時的表達量卻較為相近，只在誘導第3天和第7天時，高濃度組 （45.70μg/L Cu（Ⅱ）+10μg/L Cd（Ⅱ））沙蠶HSP70表達量高于Cu（Ⅱ）和Cd（Ⅱ）單獨暴露時的表達量，這表明兩種重金屬聯(lián)合作用存在一定程度的協(xié)同作用，導致毒性增加，使得機體需要產(chǎn)生更多的熱休克蛋白來抵御外界損傷。

已有研究表明，生物體內不同組織對重金屬脅迫產(chǎn)生的反應存在差異，本試驗中尚未對不同組織間HSP70基因表達進行比較和分析，因此，后續(xù)需要開展不同組織器官間基因表達量差異分析。同時在本試驗周期內沙蠶HSP70基因表達量在重金屬誘導下持續(xù)增加，尚未出現(xiàn)下降趨勢，在后續(xù)試驗中有必要延長試驗時間來進一步全面研究HSP70基因表達量的變化規(guī)律。本試驗結果表明，當重金屬含量接近環(huán)境濃度值時，沙蠶體內HSP70基因的表達也有明顯變化，沙蠶HSP70基因表達量對環(huán)境變化的敏感性，為利用這一生理生化指標的變化進行實際環(huán)境污染檢測提供了可能。生物細胞內的HSP70基因表達量對溫度、pH、鹽度和溶解氧的變化均會產(chǎn)生響應，對紫貽貝的研究表明，適宜溫度的海水不會影響到重金屬對雙殼類HSP70基因的誘導效果。當環(huán)境溫度比生物適宜生長溫度提高或降低5～10℃以上時，則可明顯誘導雙殼類HSP70基因的合成［29-31］。在實際海域調查時，上述環(huán)境因子不可能像室內試驗一樣嚴格控制，因此，為了增加該分子標記利用時的準確性，有必要探討各種環(huán)境因子對沙蠶HSP70基因表達影響的大小，以便減少干擾較大的環(huán)境因子對結果準確性的影響。

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Single and synergetic effects of heavy m etal Cd（Ⅱ）and Cu（Ⅱ）stress on heat shock protein 70（HSP70）gene expression in lugworm Perinereis aibuhitensis

ZHAO Huan，LIWan-juan，WAN Liang，YANG Da-zuo，ZHOU Yi-bing
（Key Laboratory of Marine Bio-resources Restoration and Habitat Reparation in Liaoning Province，Dalian Ocean University，Dalian 116023，China）

Abstract：Single and synergetic effects of heavy metal Cd（Ⅱ）and Cu（Ⅱ）stresson heat shock protein 70 （HSP70）gene expression were studied in lugworm Perinereis aibuhitensis by real-time PCR method to investigate the relationship between heavymetals concentration and HSP70 gene expression in lugworm.The results showed that HSP70 gene expression levels were induced with the elapse of Cu（Ⅱ）exposure at various concentrations of Cu（Ⅱ），with the descendant order of HSP70 gene expression as：22.86μg/L group＞44.50μg/L＞4.45μg/L in 3 days and with positive relationship between the HSP70 gene expression level and concentration of Cu（Ⅱ）in 7 days and 14 days.HSP70 gene expressionswere shown to be increased with increasing Cd（Ⅱ）concentration and the elapse of single Cd（Ⅱ）exposure，withmore stable fluctuation under Cd（Ⅱ）exposure than under Cu（II）exposure.Under synergetic effects of both Cu（Ⅱ）and Cd（Ⅱ），HSP70 gene expression levels were also increased with the increasing exposure concentration and time，the maximal expression of HSP70 in group 45.70μg/L Cu（Ⅱ）+10μg/LCd（Ⅱ）in 7 days and 14 days，andmuch higher than that in the single Cu（Ⅱ）or Cd（Ⅱ）exposure，indicating that Cu（Ⅱ）combined with Cd（Ⅱ）had synergy effect in a certain extent.

Key words：Perinereis aibuhitensis；heat shock protein 70（HSP70）；Cu（Ⅱ）；Cd（Ⅱ）；joint toxicity

中圖分類號：X174

文獻標志碼：A

DOI：10.16535/j.cnki.dlhyxb.2016.02.007

文章編號：2095-1388（2016）02-0156-06

收稿日期：2015-05-11

基金項目：國家自然科學基金資助項目 （41306138）；海洋公益性行業(yè)科研專項 （201305002，201305043）；蓬萊19-3油田溢油事故海洋生態(tài)修復技術研究項目 （201005018）

作者簡介：趙歡 （1983—），女，博士，助理研究員。E-mail：zhaohuan@dlou.edu.cn

通信作者：周一兵 （1957—），男，教授。E-mail：ybzhou@dlou.edu.cn