黃 雙,孫 曼,金秀芳,徐永平,李 強(qiáng)
(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,楊凌 712100)
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催產(chǎn)素受體在雌性山羊頸動(dòng)脈體的分布
黃雙,孫曼,金秀芳,徐永平*,李強(qiáng)
(西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,楊凌 712100)
研究催產(chǎn)素受體(OTR)在雌性山羊頸動(dòng)脈體(CB)中是否存在及其分布特點(diǎn),為催產(chǎn)素(OT)是否對(duì)CB起調(diào)節(jié)作用提供形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。用免疫組織化學(xué)SP法對(duì)雌性山羊的CB進(jìn)行OTR免疫組織化學(xué)染色,觀察CB中OTR的分布特點(diǎn)。結(jié)果顯示,在雌性山羊CB的實(shí)質(zhì)細(xì)胞群和間質(zhì)組織中均有不同程度的OTR陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物存在。OTR強(qiáng)陽(yáng)性產(chǎn)物分布在Ⅰ型細(xì)胞、Ⅱ型細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜,在Ⅰ型細(xì)胞的細(xì)胞核呈弱陽(yáng)性表達(dá),在Ⅱ型細(xì)胞的細(xì)胞核呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。在間質(zhì)組織中,血管內(nèi)皮細(xì)胞和神經(jīng)纖維中有中等陽(yáng)性反應(yīng)產(chǎn)物存在,并且實(shí)質(zhì)細(xì)胞群和間質(zhì)組織的OTR相對(duì)表達(dá)量差異性極顯著(P<0.01)。結(jié)果表明,OTR主要分布于CB的實(shí)質(zhì)細(xì)胞群中,CB具備接受OT調(diào)控的條件。因此,催產(chǎn)素可以通過(guò)激活CB中的OTR來(lái)影響CB的功能活動(dòng)。
頸動(dòng)脈體;催產(chǎn)素受體;免疫組織化學(xué)SP法;雌性山羊
1895年,G.Oliver等研究發(fā)現(xiàn)垂體后葉提取物具有血管收縮活性[1],1906年,英國(guó)生理學(xué)家H.H.Dale證實(shí)垂體后葉提取物具有促進(jìn)子宮收縮的活性[2]。1928年,O.Kamm在垂體后葉提取物中分離出血管加壓素(vasopressin)和催產(chǎn)素(oxytocin,OT)[3],直至1953年,V.Du Vigneaud等研究確定了催產(chǎn)素的化學(xué)結(jié)構(gòu),為一種九肽化合物,并進(jìn)行了人工合成[4],因此獲得1955年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。催產(chǎn)素(oxytocin,OT)主要是由下丘腦室旁核和室上核神經(jīng)元合成后經(jīng)軸漿運(yùn)輸并貯存于神經(jīng)垂體的一類(lèi)神經(jīng)肽類(lèi)化合物,OT具有促進(jìn)子宮收縮和乳汁分泌的作用。但是,隨著對(duì)OT研究的不斷深入,發(fā)現(xiàn)OT除了對(duì)生殖系統(tǒng)發(fā)揮作用外,也可作為神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)質(zhì)影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的活動(dòng),如學(xué)習(xí)、記憶、睡眠覺(jué)醒、影響藥物成癮性及對(duì)社會(huì)適應(yīng)性行為等,還可以參與機(jī)體其他系統(tǒng)的活動(dòng),如體溫的調(diào)節(jié)和心血管系統(tǒng)的調(diào)節(jié)等活動(dòng)[5]。M.V.Sofroniew等發(fā)現(xiàn),來(lái)自室旁核的催產(chǎn)素能神經(jīng)纖維可直接投射到腦干背側(cè),腦干背側(cè)是調(diào)節(jié)心血管活動(dòng)的重要區(qū)域[6]。W.Gaida等發(fā)現(xiàn)在患高血壓大鼠的下丘腦OT表達(dá)量明顯降低,并且在外周注射催產(chǎn)素可以降低大鼠的平均動(dòng)脈壓,提示OT與血壓、血管緊張性調(diào)節(jié)相關(guān)[7]。OT的生物活性是由催產(chǎn)素受體(oxytocin receptor,OTR)介導(dǎo)的[8],在杏仁核、海馬、腦干等腦區(qū)都有OTR分布,提示OT可以通過(guò)影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的OTR進(jìn)而對(duì)心血管系統(tǒng)發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。OT不僅可作用于中樞OTR網(wǎng)絡(luò),也可經(jīng)神經(jīng)垂體系統(tǒng)釋放到外周循環(huán),作用于外周的OTR。M.Jankowski等在大鼠的心以及肺動(dòng)脈和腔靜脈等大血管的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)也檢測(cè)到OTR的分布[9],提示OT也可以直接作用于分布在心血管系統(tǒng)的OTR,從而影響心血管的功能活動(dòng)。 因此,OT可以直接作用于心血管系統(tǒng)的OTR或者間接作用于心血管神經(jīng)中樞的OTR進(jìn)而影響心血管的功能活動(dòng)。
頸動(dòng)脈體(carotid body,CB)是由神經(jīng)嵴衍生而來(lái)的一個(gè)重要的外周化學(xué)感受器[10],位于頸總動(dòng)脈的分叉處,能感受動(dòng)脈血液中的PO2、PCO2和pH的變化,并將化學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)為電信號(hào),通過(guò)竇神經(jīng)傳入到腦干區(qū)域的呼吸中樞和心血管中樞,在呼吸、心血管和神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。OT能通過(guò)中樞神經(jīng)系統(tǒng)間接調(diào)節(jié)心血管活動(dòng),也能通過(guò)外周循環(huán)直接作用于心血管系統(tǒng),頸動(dòng)脈體作為重要的外周化學(xué)感受器,對(duì)心血管活動(dòng)的調(diào)節(jié)發(fā)揮著重要的作用。那么,在頸動(dòng)脈體內(nèi)是否存在OTR?OT能否通過(guò)作用于CB進(jìn)而影響心血管的活動(dòng)呢?作者采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)OTR在頸動(dòng)脈體的分布,為進(jìn)一步探索OT能否通過(guò)影響外周化學(xué)感受器CB進(jìn)而對(duì)心血管活動(dòng)進(jìn)行調(diào)節(jié)提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。
1.1試驗(yàn)材料
健康非妊娠雌性成年關(guān)中奶山羊5只(均來(lái)自陜西楊凌屠宰場(chǎng));內(nèi)源性生物素阻斷試劑盒(貨號(hào):BLK-0001,購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司);免疫組織化學(xué)SP超敏試劑盒(兔)(貨號(hào):KIT-9706,購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司);兔抗大鼠OTR多克隆抗體(貨號(hào):BA23081,購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司);DAB試劑盒(美國(guó)sigma,貨號(hào):M1417-1,購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司);抗體稀釋液(貨號(hào):CW2340,購(gòu)自北京康為世紀(jì)生物公司);Leica石蠟切片機(jī)(型號(hào):LeicaRM2235,德國(guó)Leica公司),Motic生物顯微鏡(型號(hào):BA310,Motic實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司廈門(mén)總部)等。
1.2方法
1.2.1頸動(dòng)脈體石蠟切片制作將山羊保定、麻醉、頸動(dòng)脈放血處死后,從寰枕關(guān)節(jié)處將羊頭取下,從頸動(dòng)脈的斷端分離至頸動(dòng)脈分叉處,迅速取下兩側(cè)CB,立即投入40 g·L-1多聚甲醛磷酸緩沖固定液中固定10 h以上。固定好的組織塊經(jīng)修整后用流動(dòng)自來(lái)水沖洗12 h,在體積分?jǐn)?shù)分別為50%、70%、80%、90%、95%、100%的梯度酒精中脫水,二甲苯透明,石蠟包埋,蠟塊修整后,切片(5 μm),恒溫水浴鍋中展片,貼片,烘箱烘干。切片分為4套,第一套做HE染色,作為組織定位對(duì)照,第二套做免疫組織化學(xué)SP法OTR陽(yáng)性組織細(xì)胞定位,第三套切片用于免疫組織化學(xué)SP法染色后做蘇木精復(fù)染,第四套做免疫組織化學(xué)SP法OTR空白對(duì)照,以確定反應(yīng)的特異性。
1.2.2HE染色將第一套切片脫蠟、復(fù)水后,蘇木精染色10 min、1%鹽酸-乙醇分化20 s、流動(dòng)自來(lái)水沖洗30 min、伊紅染色5 min、脫水、透明、中性樹(shù)膠封片、晾干、Motic顯微鏡下觀察,拍照。
1.2.3免疫組織化學(xué)SP法染色第二套和第三套切片經(jīng)脫蠟、復(fù)水后,放入檸檬酸鹽緩沖液中進(jìn)行抗原熱修復(fù)20 min后,自然冷卻至室溫,滴加內(nèi)源性生物阻斷劑A、B液各孵育20 min,按照免疫組織化學(xué)SP法試劑盒說(shuō)明書(shū),依次滴加A、B液各孵育10 min,之后加兔抗大鼠OTR多克隆抗體(稀釋倍數(shù)為1∶200)于4 ℃條件下過(guò)夜,隔天取出復(fù)溫后,再依次滴加C、D液各孵育10 min,各步驟之間用PBS液沖洗,DAB顯色。其中第三套切片DAB顯色后進(jìn)行蘇木精復(fù)染,以對(duì)陽(yáng)性結(jié)構(gòu)進(jìn)行定位觀察,脫水,透明,封片。第四套切片染色過(guò)程用PBS液代替一抗,其余過(guò)程同上。
山羊頸動(dòng)脈體HE染色見(jiàn)圖1,OTR免疫組織化學(xué)SP法染色見(jiàn)圖2。
a.Ⅰ型細(xì)胞;b.Ⅱ型細(xì)胞;c.微血管;d.血管內(nèi)皮細(xì)胞a.Type Ⅰ cell;b.Type Ⅱ cell;c.Microvascular;d.Vascular endothelial cells圖1 雌性山羊頸動(dòng)脈體HE染色Fig.1 HE staining of the CB of female goat
A.OTR的免疫組織化學(xué)SP法染色;B.OTR的免疫組織化學(xué)SP法染色;C.OTR的免疫組織化學(xué)SP法染色及蘇木精復(fù)染;D.OTR的免疫組織化學(xué)SP法陰性對(duì)照組及蘇木精復(fù)染;比例尺=20 μm;a.Ⅰ型細(xì)胞;b.Ⅱ型細(xì)胞;c.微血管;d.小動(dòng)脈;e.小靜脈;f.血管內(nèi)皮細(xì)胞A.Immunohistochemical SP staining of OTR;B.Immunohistochemical SP staining of OTR;C.Immunohistochemical SP staining of OTR and hematoxylin counterstain of OTR;D.Immunohistochemical SP staining of OTR of the negative control group and hematoxylin counterstain;bar=20 μm;a.Type Ⅰ cell;b.Type Ⅱ cell;c.Microvascular;d.Small artery;e.Small vein;f.Vascular endothelial cells圖2 雌性山羊頸動(dòng)脈體OTR免疫組織化學(xué)SP法染色Fig.2 Immunohistochemical staining of OTR in CB of female goat
2.1頸動(dòng)脈體HE染色
雌性山羊的CB位于頸總動(dòng)脈的分叉處后方,借由結(jié)締組織連于動(dòng)脈壁上,其上連接有舌咽神經(jīng)、鯡魚(yú)神經(jīng)等。HE染色結(jié)果顯示,雌性山羊CB由實(shí)質(zhì)細(xì)胞、毛細(xì)血管和神經(jīng)纖維以及結(jié)締組織成分構(gòu)成,實(shí)質(zhì)細(xì)胞包括有Ⅰ型細(xì)胞和Ⅱ型細(xì)胞,Ⅰ型細(xì)胞細(xì)胞核呈橢圓形,數(shù)量多,體積大,Ⅱ型細(xì)胞細(xì)胞核呈長(zhǎng)條形,數(shù)量少,體積小,兩種細(xì)胞數(shù)量比為(3~5)∶1,數(shù)個(gè)Ⅰ型細(xì)胞聚集成團(tuán),Ⅱ型細(xì)胞包繞在其周?chē)?,形成小葉狀結(jié)構(gòu),結(jié)締組織包繞小葉,中間穿插著毛細(xì)血管和神經(jīng)纖維等結(jié)構(gòu)(圖1)。
2.2雌性山羊頸動(dòng)脈體OTR免疫組織化學(xué)SP法染色
陰性對(duì)照組經(jīng)蘇木精復(fù)染后只見(jiàn)藍(lán)色(圖2,D),無(wú)其他著色,表明OTR的SP染色無(wú)非特異性著色。根據(jù)頸動(dòng)脈體內(nèi)陽(yáng)性顆粒產(chǎn)物的染色程度,將結(jié)果分為四個(gè)等級(jí):棕黃色為強(qiáng)陽(yáng)性;黃色為中等陽(yáng)性;淡黃色為弱陽(yáng)性;無(wú)著色為陰性。
試驗(yàn)組SP染色結(jié)果顯示,OTR在雌性山羊的CB中廣泛分布,在實(shí)質(zhì)細(xì)胞群中,Ⅰ型細(xì)胞、Ⅱ型細(xì)胞和微血管內(nèi)皮細(xì)胞有不同程度陽(yáng)性著色,在間質(zhì)組織中,神經(jīng)纖維、小動(dòng)脈和小靜脈的血管內(nèi)皮細(xì)胞有不同程度著色,結(jié)締組織無(wú)著色。在Ⅰ型細(xì)胞(圖2,A-a,B-a)中有呈顆粒狀的OTR免疫陽(yáng)性產(chǎn)物分布,在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)的染色最強(qiáng),為棕黃色,呈強(qiáng)陽(yáng)性;細(xì)胞核染色為無(wú)色或淡黃色,基本為空泡狀,呈陰性或弱陽(yáng)性。Ⅱ型細(xì)胞(圖2,A-b,B-b)中OTR免疫陽(yáng)性產(chǎn)物為棕黃色,呈強(qiáng)陽(yáng)性。實(shí)質(zhì)細(xì)胞群和間質(zhì)中穿插的微血管、小動(dòng)脈、小靜脈的血管內(nèi)皮細(xì)胞呈黃色,呈中等陽(yáng)性(圖2,A-c,B-d,B-e)。在包裹著實(shí)質(zhì)細(xì)胞群的周?chē)Y(jié)締組織結(jié)構(gòu)中,基本無(wú)OTR免疫陽(yáng)性著色,呈陰性,結(jié)締組織中穿行的神經(jīng)纖維呈黃色,呈中等陽(yáng)性。圖像分析顯示CB中OTR免疫陽(yáng)性物質(zhì)在實(shí)質(zhì)細(xì)胞群的平均光密度為0.447±0.560,非實(shí)質(zhì)細(xì)胞的平均光密度為0.214±0.423,實(shí)質(zhì)細(xì)胞群的平均光密度極顯著高于非實(shí)質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)(P<0.01)。
2.3雌性山羊頸動(dòng)脈體OTR陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域的平均光密度
平均光密度值分析結(jié)果(表1)表明:雌性山羊CB中實(shí)質(zhì)細(xì)胞群的平均光密度值極顯著高于間質(zhì)組織(P<0.01)。
組織結(jié)構(gòu)Structureoftissue染色強(qiáng)弱Dyeingstrength平均光密度Averageopticaldensity實(shí)質(zhì)細(xì)胞群Parenchymacells棕黃色0.447±0.560a間質(zhì)組織Interstitialtissue淡黃色0.214±0.423b
所標(biāo)字母不同表示差異極顯著(P<0.01)
Different letter in the same row means very significant different between treatments(P<0.01)
OT主要是由下丘腦室旁核和視上核的神經(jīng)元合成,具有激素和神經(jīng)遞質(zhì)的雙重作用。OT除了能作為生殖激素發(fā)揮促進(jìn)子宮收縮和排乳等生理作用外,還可以作為神經(jīng)遞質(zhì)發(fā)揮非生殖調(diào)控作用,如社會(huì)行為、認(rèn)知、體溫調(diào)節(jié)、心血管活動(dòng)調(diào)節(jié)等[11]。OT對(duì)心血管活動(dòng)的作用途徑相當(dāng)廣泛,它可通過(guò)作用于中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)、外周器官(如心、血管和腎)以及通過(guò)影響其他調(diào)節(jié)因子(如心房鈉尿肽、NO和α2腎上腺素能受體)影響心血管系統(tǒng)的活動(dòng)[12]。
在中樞神經(jīng)系統(tǒng),OT能神經(jīng)纖維投射到不同的腦區(qū),可以與腦干內(nèi)調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)的神經(jīng)核團(tuán)形成突觸聯(lián)系[13]。在大腦孤束核也存在較高濃度的OT,孤束核接受內(nèi)臟反射和心血管系統(tǒng)壓力感受器的感覺(jué)傳入神經(jīng)纖維。在大鼠的迷走神經(jīng)運(yùn)動(dòng)背核顯微注射OT也能降低心率。OT發(fā)揮調(diào)節(jié)作用和信號(hào)傳導(dǎo)都是由OTR介導(dǎo)的,OTR屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族[14],根據(jù)OTR偶聯(lián)的特異的G蛋白,細(xì)胞類(lèi)型以及在膜上的不同位置,催產(chǎn)素能激活不同的第二信使,導(dǎo)致不同的生理作用[15]。OTR mRNA在腦中的分布區(qū)域基本上與OT的結(jié)合位點(diǎn)一致[16-17]。在外周神經(jīng)系統(tǒng),任妮等通過(guò)采用免疫組織化學(xué)SP法證明OTR在雌性山羊頸胸神經(jīng)節(jié)中廣泛分布,心及附近大血管的交感神經(jīng)支配主要來(lái)自頸胸神經(jīng)節(jié)[18],OT能通過(guò)影響該交感神經(jīng)途徑調(diào)節(jié)心血管的活動(dòng)。OT不僅能通過(guò)作用于中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)間接的影響心血管系統(tǒng)活動(dòng),也能通過(guò)神經(jīng)垂體后葉釋放到外周血液循環(huán),對(duì)心血管系統(tǒng)發(fā)揮直接的調(diào)節(jié)作用。在外周注射OT會(huì)降低大鼠的平均動(dòng)脈壓[19],M.Jankowski等發(fā)現(xiàn),在離體灌注的心中,OT具有促進(jìn)心房鈉尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)釋放和降低心率以及心肌收縮力的作用[20]。在主動(dòng)脈和腔靜脈內(nèi)的OT濃度高于心臟右心室濃度,說(shuō)明OT可能通過(guò)自分泌或旁分泌作用對(duì)血壓和血流量發(fā)揮直接的調(diào)節(jié)作用[9]。在大鼠的心以及肺動(dòng)脈和腔靜脈等大血管的血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)也檢測(cè)到OTR的分布,提示OT可能作為內(nèi)分泌激素通過(guò)直接作用于心和血管內(nèi)的OTR,參與內(nèi)分泌調(diào)節(jié)作用,調(diào)節(jié)心血管活動(dòng)[21-22]。以上資料表明,OT可通過(guò)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、外周交感神經(jīng)途徑以及直接作用于靶器官來(lái)調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)的活動(dòng),但OT能否通過(guò)影響外周化學(xué)感受器來(lái)調(diào)節(jié)心血管的活動(dòng)尚未見(jiàn)報(bào)道。受體的存在對(duì)激素的調(diào)節(jié)作用具有重要的意義,因此,采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)OTR在外周化學(xué)感受器CB內(nèi)是否存在,能為OT是否能影響CB的活動(dòng)提供一定的形態(tài)學(xué)依據(jù)。
CB是機(jī)體內(nèi)重要的感知血液內(nèi)化學(xué)信號(hào)的外周化學(xué)感受器,在機(jī)體血液內(nèi)出現(xiàn)O2分壓降低、CO2分壓升高、H+濃度增加等變化時(shí),CB能感受動(dòng)脈血變化而使機(jī)體發(fā)生適應(yīng)性改變[23]。CB的實(shí)質(zhì)細(xì)胞群包括Ⅰ型細(xì)胞(球細(xì)胞)和Ⅱ型細(xì)胞(支持細(xì)胞)[24],球細(xì)胞內(nèi)含有豐富的神經(jīng)遞質(zhì),認(rèn)為其屬神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞,是CB神經(jīng)體液調(diào)節(jié)體系中的一個(gè)重要的信息整合樞紐[25-26]。試驗(yàn)結(jié)果顯示,OTR在球細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性,說(shuō)明CB的球細(xì)胞是OT影響CB作用的主要靶點(diǎn),OT可能通過(guò)激活球細(xì)胞內(nèi)的OTR影響球細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的釋放,進(jìn)而通過(guò)神經(jīng)內(nèi)分泌的途徑影響CB對(duì)心血管活動(dòng)的調(diào)節(jié)作用。在包裹著實(shí)質(zhì)細(xì)胞的間質(zhì)組織中穿行的神經(jīng)纖維上OTR免疫陽(yáng)性產(chǎn)物呈中等陽(yáng)性,熊喜龍等利用HRP法對(duì)CB的神經(jīng)支配進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)CB受舌咽神經(jīng)遠(yuǎn)節(jié)(巖神經(jīng)節(jié))和頸上節(jié)(頸前神經(jīng)節(jié))發(fā)出的神經(jīng)支配,CB還接受發(fā)自頸動(dòng)脈竇神經(jīng)、結(jié)狀神經(jīng)節(jié)的神經(jīng)支配,豐富的神經(jīng)纖維成分為頸動(dòng)脈體調(diào)節(jié)心血管活動(dòng)提供豐富的神經(jīng)通路[27],提示OT對(duì)CB的影響可能存在感覺(jué)、交感、副交感神經(jīng)通路。頸動(dòng)脈體是一個(gè)血管極其豐富的器官,具有很高的血流/體積比,頸動(dòng)脈體的供血小動(dòng)脈主要來(lái)自枕動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈的分支,后又分支為無(wú)數(shù)微動(dòng)脈,穿行于頸動(dòng)脈體的實(shí)質(zhì)細(xì)胞群和間質(zhì)中,在間質(zhì)間的小動(dòng)脈和小靜脈的血管內(nèi)皮細(xì)胞也存在OTR免疫陽(yáng)性產(chǎn)物,提示催產(chǎn)素可能通過(guò)OTR調(diào)節(jié)CB的局部血流量。
CB作為重要的化學(xué)感受器,其功能活動(dòng)直接影響機(jī)體的心血管活動(dòng),以適機(jī)體不同生理時(shí)期的活動(dòng)。本試驗(yàn)通過(guò)從外周化學(xué)感受器CB著手,通過(guò)對(duì)其上OTR的檢測(cè),發(fā)現(xiàn)OTR在CB內(nèi)廣泛分布,提示CB具備接受OT調(diào)控的條件,并將外周化學(xué)感受器和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用相互聯(lián)系起來(lái),豐富了OT的非生殖調(diào)控作用和CB的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)作用。
[2]DALE H H.On some physiological actions of ergot[J].JPhysiol,1906,34(3):163-206.
[3]KAMM O.The dialysis of pituitary extracts[J].Science,1928,67(1729):199-200.
[4]DU VIGNEAUD V,RESSLER C,TRIPPETT S.The sequence of amino acids in oxytocin,with a proposal for the structure of oxytocin[J].JBiolChem,1953,205(2):949-957.
[5]LUDWIG M.Dendritic release of vasopressin and oxytocin[J].JNeuroendocrinol,1998,10(2):881-895.
[6]SOFRONIEW M V,WEINDL A,SCHRELL U,et al.Immunohistochemistry of vasopressin,oxytocin and neurophysin in the hypothalamus and extrahypothalamic regions of the human and primate brain[J].ActaHistochemSuppl,1981,24:79-95.
[7]GAIDA W,LANG R E,KRAFT K,et al.Altered neuropeptide concentrations in spontaneously hypertensive rats:cause or consequence[J].ClinSci(Lond),1985,68(1):35-43.
[8]BARBERIS C,MOUILLAC B,DURROUX T.Structural bases of vasopressin/oxytocin receptor function[J].JEndocrinol,1998,156(2):223-229.
[9]JANKOWSKI M,WANG D,HAJJAR F,et al.Oxytocin and its receptors are synthesized in the rat vasculature[J].ProcNatlAcadSciUSA,2000,97(11):6207-6211.
[10]蔡英年.關(guān)于頸動(dòng)脈體的研究進(jìn)展[J].河北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1989,10(3):185-187.
CAI Y N.Research progress of cartid body[J].ActaAcademiaeMedicinaeHebei,1989,10(3):185-187.(in Chinese)
[11]CARSON D S,GUASTELLA A J,TAYLOR E R,et al.A brief history of oxytocin and its role in modulating psychostimulant effects[J].JPsychopharmacol,2013,27(3):231-247.
[12]PETERSSON M.Cardiovascular effects of oxytocin[J].ProgBrainRes,2002,139:281-288.
[13]ORLOWSKA-MAJDAK M.Effect of excitatory amino acids on activity of vasopressinergic and oxytocinergic neurons[J].EndocrRegul,2004,38(1):23-28.
[14]GIMPL G,F(xiàn)AHRENHOLZ F.The oxytocin receptor system:structure,function,and regulation[J].PhysiolRev,2001,81(2):629-683.
[15]ZINGG H H,LAPORET S A.The oxytocin receptor[J].TrendsEndocrinolMetab,2003,14(5):222-227.
[16]YOSHIMURA R,KIYAMA H,KIMURA T,et al.Localization of oxytocin receptor messenger ribonucleic acid in the rat brain[J].Endocrinology,1993,133(3):1239-1246.
[17]OSTROWSKI N L.Oxytocin receptor mRNA expression in rat brain:implications for behavioral integration and reproductive success[J].Psychoneuroendocrinology,1998,23(8):989-1004.
[18]任妮,王志豪,吳衛(wèi)妮,等.催產(chǎn)素受體在雌性山羊頸胸神經(jīng)節(jié)的分布[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2013,33(6):908-912.
REN N,WANG Z H,WU W N,et al.Immunohistochemical localization of OTR on cervicothoracic ganglion in female goat[J].ChineseJournalofVeterinaryScience,2013,33(6):908-912.(in Chinese)
[19]PETTY M A,LANG R E,UNGER T,et al.The cardiovascular effects of oxytocin in conscious male rats[J].EurJPharmacol,1985,112(2):203-210.
[20]JANKOWSKI M,HAJJAR F,KAWAS S A,et al.Rat heart:a site of oxytocin production and action[J].ProcNatlAcadSciUSA,1998,95(24):14558-14563.
[21]THIBONNIER M,CONARTY D M,PRESTON J A,et al.Human vascular endothelial cells express oxytocin receptors[J].Endocrinology,1999,140(3):1301-1309.
[22]CONRAD K P,GELLAI M,NORTH W G,et al.Influence of oxytocin on renal hemodynamics and sodium excretion[J].AnnNYAcadSci,1993,689:346-362.
[23]烏仁套迪,礎(chǔ)魯,包雙江.機(jī)體內(nèi)一種化學(xué)感受器--頸動(dòng)脈體研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2005,26(1):16-18.
WUREN T D,CHU L,BAO S J.Research progress of cartid body chemical receptor[J].ProgressinVeterinaryMedicine,2005,26(1):16-18.(in Chinese)
[24]NURSE C A.Neurotransmission and neuromodulation in the chemosensory carotid body[J].AutonNeurosci,2005,120(1-2):1-9.
[25]NAJAFI G,SOLTANALINEJAD F,HASANZADEH H.A preliminary anatomical study on carotid body of Makouei sheep[J].VetResForum,2013,4(2):129-131.
[26]DE CARO R,MACCHI V,SFRISO M M,et al.Structural and neurochemical changes in the maturation of the carotid body[J].RespirPhysiolNeurobiol,2013,185(1):9-19.
[27]熊喜龍,李育良.兔頸動(dòng)脈竇和頸動(dòng)脈體的神經(jīng)支配[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,1998,19(4):27-28.
XIONG X L,LI Y L.The innervation of carotid body and sinus in rabbit[J].ProgressinVeterinaryMedicine,1998,19(4):27-28.(in Chinese)
(編輯白永平)
Distribution of Oxytocin Receptor in the Carotid Body of Female Goat
HUANG Shuang,SUN Man,JIN Xiu-fang,XU Yong-ping*,LI Qiang
(CollegeofAnimalMedicine,NorthwestA&FUniversity,Yangling712100,China)
This experiment was conducted to detect the existence of oxytocin receptors (OTR) in the carotid body (CB) of female goats to discuss effects of oxytocin (OT) on the activity of CB.The distribution characteristics of OTR in the carotid body of female goats were studied by using immunohistochemical SP staining.The results showed that,the parenchyma cells and the interstitial tissue were immunolabelled in different degrees.In the type Ⅰ cells and type Ⅱ cells of CB,uniformly strong immunostaining was found in the whole cell membrane and cytoplasm,whereas the nucleus of type Ⅰ cells were not or weekly immunolabelled,the nucleus of type Ⅱ cells were strong immunolabelled.In the interstitial tissue,moderate immunoreactivity products distribute in the vascular endothelial cells and nerve fibers.Image analysis documented a significant difference of OTR expression between the parenchyma cells and the interstitial tissue.The OTRs were widely distributed in CB of female goat,suggesting that oxytocin may exert potential effects on carotid body.
carotid body;oxytocin receptor;immunohistochemical SP method;female goat
10.11843/j.issn.0366-6964.2016.06.023
2015-12-15
國(guó)家自然科學(xué)基金(31072184);陜西省農(nóng)業(yè)推廣項(xiàng)目(K332021401)
黃雙(1990-),女,湖北松滋人,碩士生,主要從事基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)研究,E-mail:huangshuang519@163.com
徐永平,E-mail:xuyp717@nwsuaf.edu.cn,Tel:029-87091117
S852.1
A
0366-6964(2016)06-1260-06