潘蕾　陳亞秋　劉瑾　劉宏彥天津市婦女兒童保健中心（天津300070）

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135例聽力障礙大學(xué)生聾病易感基因檢測(cè)結(jié)果分析

潘蕾陳亞秋劉瑾?jiǎng)⒑陱?br/>天津市婦女兒童保健中心（天津300070）

【摘要】目的對(duì)聽力障礙大學(xué)生進(jìn)行聾病易感基因檢測(cè)，了解常見聾病易感基因四個(gè)基因20個(gè)位點(diǎn)的突變情況，為耳聾的防治提供依據(jù)。方法應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解析離子飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)，通過采集末梢血檢測(cè)135例聽力障礙大學(xué)生的GJB2、GJB3、SLC26A4和線粒體12SrRNA基因的20個(gè)突變位點(diǎn)。結(jié)果135例受檢者中77例存在基因突變，突變率為57.04%；雜合突變23例，純合突變34例，復(fù)合雜合突變20例。c.235delC突變占GJB2基因突變的91.11%（41/ 45）；c.IVS7-2A＞G突變占SLC26A4基因突變的79.31%（23/29）；12SrRNA基因僅檢出3例m.1555A＞G同質(zhì)性突變；GJB3基因檢出c.547G＞A雜合突變1例。結(jié)論135例受檢者中GJB2、GJB3、SLC26A4和線粒體12SrRNA基因突變率為57.04%；c.235delC是GJB2基因的常見突變位點(diǎn)；c.IVS7-2A＞G是SLC26A4基因的常見突變位點(diǎn)；檢出少數(shù)與氨基糖苷類藥物耳毒性密切相關(guān)的線粒體12SrRNA基因突變；GJB3基因突變率不高。通過對(duì)聽力障礙人群進(jìn)行聾病易感基因檢測(cè)，從分子診斷水平明確病因，進(jìn)行耳聾靶向預(yù)防突變和遺傳咨詢，提高優(yōu)生優(yōu)育。

【關(guān)鍵詞】耳聾；聾病易感基因；基因突變；遺傳咨詢

聽力障礙是人類常見的致殘疾病之一，發(fā)病率在1～3‰。2006年第二次全國(guó)殘疾人抽樣調(diào)查［1］推算我國(guó)現(xiàn)有聽力殘疾2004萬人，患病率2.11%，其中單純聽力殘疾患病率1.52%。由于50～70%的聽力障礙與遺傳因素有關(guān)［2，3］，對(duì)育齡聽力障礙人群進(jìn)行聾病易感基因檢測(cè)，既是基因?qū)W診斷，又可從遺傳角度對(duì)聽力障礙防控，降低其后代致殘發(fā)生率。本文檢測(cè)135例聽力障礙大學(xué)生的聾病易感基因突變報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1研究對(duì)象

2015年正就讀于天津某理工大學(xué)聾人工學(xué)院的135名聽力障礙大學(xué)生，其中男生67人，女生68人，年齡最小18歲，最大27歲，平均21.17±1.747歲。所有學(xué)生了解本次檢測(cè)的目的、方法，且自愿參加，并填寫知情同意書。135人均持有當(dāng)?shù)貧埣踩寺?lián)合會(huì)發(fā)放的《聽力障礙殘疾證》，無其他殘疾，智力正常。

1.2研究方法

1.2.1標(biāo)本采集

采集末梢指血于濾紙片上，避免污染，充分晾干，單片裝袋，低溫保存。

1.2.2檢測(cè)方法

由華大基因檢驗(yàn)所利用基質(zhì)輔助激光解析離子飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)，檢測(cè)四個(gè)聾病易感基因［4-6］的20個(gè)位點(diǎn)，分別是GJB2基因（c.235delC，c.35delG，c.167delT，c.299_300delAT，c.176_191dell6）、GJB3基因（c.538C＞T，c.547G＞A）、SLC26A4基因（c.281C＞T，c.589G＞A，c.IVS7-2A＞G，c.1174A＞T，c.1226G ＞A，c.1229C＞T，c.IVS15+5G＞A，c.1975G＞C，c.2027T＞A，c.2162C＞T，c.2168A＞G）、線粒體12SrRNA基因（m.1555A＞G，m.1494C＞T）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，不同性別突變率的差異采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1135名受檢者中不同程度的基因突變77例，突變率57.04%。雜合突變23例，純合突變34例，復(fù)合雜合突變20例，見表1。男生43例，女生34例，突變?cè)谛詣e上無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.769，P=0.096）。

2.277例基因突變個(gè)體中21例攜帶兩個(gè)位點(diǎn)突變，其中2例出現(xiàn)在不同基因位點(diǎn)上，c.235delC雜合突變/ c.IVS7-2A＞G純合突變1例，c.176_191del16雜合突變/ c.IVS7-2A＞G雜合突變1例。

2.3GJB2基因突變44例，占總受檢人數(shù)的32.59% （44/135）。c.176_191del16雜合突變1例、純合突變1例；c.235delC雜合突變13例、純合突變19例；c.299_ 300delAT雜合突變1例；c.176_191del16/ c.235delC復(fù)合雜合突變1例；c.235delC/ c.299_300delAT復(fù)合雜合突變8例。

2.4GJB3基因突變1例，占總受檢人數(shù)的0.74%（1/ 135），即c.547G＞A雜合突變。

2.5線粒體12SrRNA基因突變3例，占總受檢人數(shù)的2.22%（3/135），均為m.1555A＞G同質(zhì)性突變。

2.6SLC26A4基因突變27例，占總受檢人數(shù)的20%（27/135）。c.IVS7-2A＞G雜合突變4例、純合突變10例；其余是雜合突變，分別為c.589G＞A位點(diǎn)2例、c.IVS15+5G＞A位點(diǎn)1例、c.1174A＞T/ c.2168A＞G復(fù)合雜合1例、c.1174A＞T/ c.IVS7-2A＞G復(fù)合雜合1例、c.1226G＞A/ c.2168A＞G復(fù)合雜合1例、c.1229C＞T/ c.2168A＞G復(fù)合雜合1例、c.1229C＞T/ c.IVS7-2A＞G復(fù)合雜合1例、c.1975G＞C/ c.IVS7-2A＞G復(fù)合雜合1例、c.2162C＞T/ c.IVS7-2A＞G復(fù)合雜合1例、c.2168A＞G/ c.IVS7-2A＞G復(fù)合雜合3例。

3　討論

大部分聽力障礙與遺傳因素有關(guān)，通過對(duì)聾病易感基因的研究，目前已有100多個(gè)非綜合征型耳聾基因座位定位，60多個(gè)基因被克隆或鑒定。據(jù)梁爽、李海波等［7-10］報(bào)道，GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體12SrRNA四個(gè)基因在中國(guó)聾人中所占耳聾比例是42～49%。本次檢測(cè)135名聽力障礙大學(xué)生的聾病易感基因突變率57.04%，突變發(fā)生率亦較高?；蛲蛔兊氖軝z者中，54例純合突變和復(fù)合雜合突變考慮與遺傳因素有關(guān)，占總數(shù)的40%；23例單雜合突變，由于無家族史情況，不能確定其是否與遺傳因素有關(guān)。

3.1GJB2基因

GJB2基因是最常見的聾病易感突變基因，與先天性重度耳聾有關(guān)。各國(guó)的GJB2突變率不同，代志瑤［11］報(bào)道我國(guó)占20.05%。本次檢測(cè)的GJB2基因突變率最高，占32.59%；其中c.235delC突變占GJB2基因突變的91.11%（41/45），未發(fā)現(xiàn)c.35delG突變，這與文獻(xiàn)［12-18］中報(bào)道的我國(guó)人群中該基因突變最多的位點(diǎn)是c.235delC相符。

3.2GJB3基因

GJB3基因與高頻聽力下降有關(guān)，屬于常染色體顯性或隱性遺傳，可導(dǎo)致進(jìn)行性或遲發(fā)型中度至極重度耳聾，其突變率不高［8，19，20］，本次僅檢測(cè)出1例。

3.3SLC26A4基因

SLC26A4基因是臨床常見的大前庭水管綜合征的致病基因，嬰兒出生時(shí)聽力正常，在感染或顱腦外傷等因素作用下可導(dǎo)致聽力下降，應(yīng)避免引起聽力下降的高危因素，防止耳聾或耳聾加重。c.IVS7-2A＞G是常見的SLC26A4基因突變位點(diǎn)［21，22］，本次檢測(cè)到的c.IVS7-2A＞G突變占SLC26A4基因突變的79.31%（23/29）。

3.4線粒體12SrRNA

線粒體12SrRNA與氨基糖苷類藥物的耳毒性密切相關(guān)，屬母系遺傳。本次受檢者中僅有3例為此基因的m.1555A同質(zhì)性突變，低于郭玉芬等［23］報(bào)道的9.50%。這部分受檢者及家庭成員應(yīng)終生不使用氨基糖苷類藥物，避免“一針致聾”的發(fā)生，其家庭母系成員的婚育須進(jìn)行遺傳咨詢。

表1　基因位點(diǎn)突變的檢出情況［例（%）］Table 1 Detection of gene mutations［Cases（%）］

3.5GJB2和SLC26A4基因

GJB2和SLC26A4基因?yàn)槌Ｈ旧w隱性遺傳，子代為純合或復(fù)合雜合突變才表現(xiàn)出耳聾，本次檢測(cè)的聽力障礙學(xué)生中有21例雜合突變，則可能存在20個(gè)位點(diǎn)之外的基因位點(diǎn)突變。

同證婚配可增加遺傳發(fā)生幾率已成為共識(shí)，目前我國(guó)聽力障礙人群在聾啞學(xué)?；蚋＠麢C(jī)構(gòu)中呈同證聚集狀態(tài)［24］，聾人之間存在普遍的同證婚配情況，對(duì)育齡聾人及其配偶的聾病易感基因檢測(cè)和干預(yù)可減少下一代聾兒的出生，降低出生缺陷。由于基因具有地區(qū)、種族等差異性，通過對(duì)中國(guó)聽力障礙人群的聾病易感基因檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)基因?qū)W診斷，盡可能揭示病因的同時(shí)，有針對(duì)性利用三級(jí)疾病預(yù)防降低聾兒的出生，提高優(yōu)生優(yōu)育。婚前檢測(cè)聾病易感基因，遺傳咨詢、指導(dǎo)戀愛婚配和靶向預(yù)防；孕后對(duì)胎兒進(jìn)行基因檢測(cè)；產(chǎn)后即新生兒聽力篩查和聾病易感基因檢查。

通過本研究，對(duì)已檢出耳聾致病基因的受檢者，應(yīng)避免同一基因突變者之間婚配。對(duì)未檢出耳聾致病基因的受檢者，可能是非遺傳因素所致，但不能排除其存在20個(gè)位點(diǎn)以外的突變基因。純合或復(fù)合雜合突變受檢者，在明確基因?qū)W病因診斷后，對(duì)其后期進(jìn)行遺傳咨詢、懷孕風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等具有非常重要的指導(dǎo)意義。對(duì)聾病易感基因攜帶者，有必要通過進(jìn)一步的基因診斷來明確其是否存在其他致病基因或位點(diǎn)，亦或許可為單雜合突變致聾的研究提供依據(jù)。本次檢測(cè)為基因正常的受檢者，在除外環(huán)境因素外，仍有必要全基因測(cè)序，隨著基因檢驗(yàn)技術(shù)的不斷提高，或許可發(fā)現(xiàn)新的耳聾致病基因和新位點(diǎn)，為今后更深入的基因?qū)W研究提出新的課題。

參考文獻(xiàn)

1孫喜斌，魏志云，于麗玫，等.中國(guó)聽力殘疾人群現(xiàn)狀及致殘?jiān)蚍治觯跩］.中華流行病學(xué)雜志，2008，29（7）：643-646.Xibin Sun，Zhiyun Wei，Limei Yu，et al.Prevalence and etiology of people with hearing impairment in China［J］.Chinese Journal of Epi?demiology，2008，29（7）：643-646.

2BirkenhagerR，AschendorffA，SchipperJ，et al.Nonsyndromic hered?itary hearing impairment［J］.Laryngorhinootologie，2007，86（4）：299-309.

3Petit C.Memorial lecture-hereditary sensory defects：from genes to pathogenesis［J］.American journal of medical genetics Part A，2004，130A（1）：3-7.

4戴樸，于飛，韓冰，等.中國(guó)不同地區(qū)和種族重度感音神經(jīng)性聾群體熱點(diǎn)突變的分布和頻率研究［J］.中華耳鼻喉頭頸外科雜志，2007，42（11）：804-808.Pu Dai，F(xiàn)ei Yu，Bing Han，et al.Features of nationwide distribution and frequency of a common gap junction beta-2 gene mutation in China［J］.Chinese Journal of Otorhinolaryngology Head and Neck Surgery，2007，42（11）：804-808.

5趙亞麗，王秋菊，李慶忠，等.95例前庭水管擴(kuò)大核心家系SLC26A4基因特異突變圖譜［J］.聽力學(xué)及言語疾病雜志，2008，16 （3）：171-177.Yali Zhao，Qiuju Wang，Qingzhong Li，et al.A Distinct Spectrum of SLC26A4 Mutations in 95 Nuclear Families Associated with En?larged Vestibular Aqueduct［J］.Journal of Audiology and Speech Pa?thology，2008，16（3）：171-177.

6管敏鑫，趙立東.與氨基糖甙類抗生素耳毒性相關(guān)的線粒體12SrRNA突變的流行病學(xué)特征［J］.中華耳科學(xué)雜志，2006，4（2）：98-105.Minxin Guan，Lidong Zhao.Mitochondrial DNA mutations associated with aminoglycoside ototoxicity［J］.Chinese Journal of Otology，2006，4（2）：98-105.

7Xia JH，Liu CY，Tang BS，et al.Mutations in the gene encoding gap?junction protein beta-3 associated with autosomal dominant hear?ingimpairment［J］.Nature genetics，1998，20（4）：370-373.

8梁爽，孫喜斌，韓睿，等.非綜合征型聾患者耳聾相關(guān)基因檢測(cè)結(jié)果分析［J］.聽力學(xué)及言語疾病雜志，2011，19（1）：10-13.Shuang Liang，Xibin Sun，Rui Han，et al.Deafness Gene Mutations Analysis in Cases with Non-syndromic Deafness［J］.Journal of Audi?ology and Speech Pathology，2011，19（1）：10-13.

9李海波，李瓊，李紅，等．非綜合征性聾突變熱點(diǎn)的流行病學(xué)分析［J］．臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2012，26（13）：589—594．Haibo Li，Qiong Li，Hong Li，et al.A literature review of epidemio?logical studies on mutation hot spots of Chinese population with non-syndromic hearing loss［J］．Journal of Clinical Otorhinolaryn?gology Head and Neck Surgery（China），2012，26（13）：589—594．

10鄒凌，蔡娟，楊馨婷，等.52例聽力損失兒童及其父母耳聾基因芯片篩查結(jié)果分析［J］.中國(guó)聽力語言康復(fù)科學(xué)雜志，2014，12（3）：178-181.Ling Zou，Juan Cai，Xinting Yang，et al.Application of DNA Microar?ray for Screening Deafness-related Genes in 52 Children with Non?syndromic Sensorineural Hearing Loss and Their Parents［J］.Chi?nese Scientific Journal of Hearing and Speech Rehabilitation，2014，12（3）：178-181.

11代志瑤，孫寶春，黃莎莎，等.GJB2基因聽力學(xué)表型與基因型關(guān)系分析［J］.中華耳科學(xué)雜志，2014，12（1）：34-36.Zhiyao Dai，Baochun Sun，Shasha Huang，et al.Audiological Fea?tures/Genotype Correlations in GJB2 Mutation［J］.Chinese Journal of Otology，2014，12（1）：34-36.

12王秋菊．新生兒聾病易感基因篩查的意義和策略［J］．中國(guó)醫(yī)學(xué)文摘耳鼻咽喉科學(xué)，2007，22（1）：21-22．Qiuju Wang.The meaning and strategy of neonatal deaf disease sus?ceptibility gene screening［J］．Chinese ENT News and Reviews，2007，22（1）：21-22．

13Wang QJ，Zhao YL，Rao SQ，et a1．A distinct spectrum of SLC26A4 mutations in patients with enlarged vestibular aqueduct in China［J］．Clin Genet，2007，72（3）：245-254．

14戴樸，于飛，劉新，等．18個(gè)省市聾校學(xué)生非綜合征性聾病分子流行病學(xué)研究（I）—GJB2 235delC和線粒體DNA 12SrRNA A1555G突變篩查報(bào)告［J］．中華耳科學(xué)雜志，2006，4（1）：1—5．Pu Dai，F(xiàn)ei Yu，Xin Liu，et a1．Molecular etiology of patients with nonsyndromic hearing loss from deaf-mute schools in 18 provinces of China［J］．Chinese Journal of Otology，2006，4（1）：1—5．

15于飛，韓東一，戴樸，等．1190例非綜合征耳聾患者GJB2基因突變序列分析［J］．中華醫(yī)學(xué)雜志，2007，87（40）：2814-2819．Fei Yu，Dongyi Han，Pu Dai，et a1．Mutation of GJB2 gene in non?syndromic hearing impairment patients：analysis of 1190 cases［J］．National Medical Journal of China，2007，87（40）：2814-2819．

16Wang Q，Wang S，Yao J，et a1．Genetic mutations of GJB2 and mi?tochondrial 12S rRNA in nonsyndromic hearing loss in Jiangsu Prov?ince of China［J］．Transl Med，2013，11（15）：1-10.

17Chen GM，He F，F(xiàn)u SQ，et a1．GJB2 and mitochondrial DNA 1555A＞G mutations in students with hearing loss in the Hubei Prov?ince of China［J］．Int J Pediatr Otorhinolaryngol，2011，75（9）：1156-1159．

18王春英，劉平，崔忠濤，等.黑龍江省部分地區(qū)非綜合征型聾患者GJB2、SLC26A4和線粒體DNA 12SrRNA基因檢測(cè)結(jié)果分析［J］.聽力學(xué)及言語疾病雜志，2015，23（6）：651-653.Chunying Wang，Ping Liu，Zhongtao Cui，et a1．In parts of heilongji?ang province，the syndrome type of deaf patients GJB2，SLC26A4 and mitochondrial DNA 12SrRNA gene analysis of the test results［J］.Journal of Audiology and Speech Pathology，2015，23（6）：651-653.

19陳俞，瑪依拉·吐地，張華，等．新疆維吾爾族與漢族非綜合征性耳聾患者四個(gè)耳聾基因突變譜的篩查［J］．中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，33（11）：1083-1087．Yu Chen，Mayila·Tudi，Hua Zhang，et a1．The screening of four common deafness gene mutations spectrum in Uigur and Han pa?tients with non-syndromic deafness in Xinjiang Autonomous Region ［J］．Chinese Journal of Laboratory Medicine，2010，33（11）：1083-1087．

20牟書瑜，劉琳，崔玲，等.大連地區(qū)耳聾人群常見聾病基因突變的研究［J］．大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，37（1）：34-36.Shuyu Mou，Lin Liu，Ling Cui，et a1．Study on common gene muta?tion of the deaf population in Dalian［J］．Journal of Dalian Medical University，2015，37（1）：34-3 6.

21袁永一，王國(guó)建，黃德亮，等．大前庭水管相關(guān)SLC26A4基因熱點(diǎn)突變區(qū)域篩查方案探討［J］．中華耳科學(xué)雜志，2010，8（3）：292-295．Yongyi Yuan，Guojian Wang，Deliang Huang，et a1．Screening strat?egies for SLC26A4 gene hot spot mutation regions in patients with enlarged vestibular aqueduct in China［J］．Chinese Journal of Otolo?gy，2010，8（3）：292-295．

22胡煜，孫敬武，孫家強(qiáng)，等.非綜合征型聾患者常見耳聾基因突變分析［J］.中華耳科學(xué)雜志，2013，11（1）：121-125.Yu Hu，Jingwu Sun，Jiaqiang Sun，et a1．Common Deafness Genes Mutations in Non-Syndromic Deafness Patients［J］.Chinese Journal of Otology，2013，11（1）：121-125.

23郭玉芬，徐百成，韓東一，等.中國(guó)西北地區(qū)線粒體DNA 12SrRN?AA1555G和GJB2基因突變［J］.中國(guó)耳鼻咽喉頭頸外科，2006，13 （10）：666-669.Yufen Guo，Baicheng Xu，Dongyi Han，et a1．Molecular analysis of mitochondrial DNA A1555G and connexin 26 gene（GJB2）in Chi?nese Northwest population with nonsyndromic sensorineural hearing loss［J］.Chinese Archives of Otolaryngology-Head and Neck Sur?gery，2006，13（10）：666-669.

24袁永一，戴樸.耳聾基因診斷—轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)推動(dòng)耳科學(xué)發(fā)展的范例［J］.中華耳科學(xué)雜志，2014，12（1）：1-5.Yongyi Yuan，Pu Dai.Deafness Genetic Testing-an Example of Translational Medicine Accelerating the Progress of Otology［J］.Chi?nese Journal of Otology，2014，12（1）：1-5.

·臨床研究·

Analysis of deafness-related genes test results in135 deaf college students

PAN Lei，CHEN Yaqiu，LIU Jin，LIU Hongyan
Tianjin Women and Children’s Health Center，Tianjin，300070 Corresponding author：CHEN YaqiuEmail：qianyi3@sina.com

【Abstract】Objective To study prevalence of 20 mutations in four genes among college students with hearing impairment in order to detect deafness-related gene disorders and provide a basis for prevention and control of deafness.Methods Using Matrix assisted laser ion time-of-flight mass spectrometry，peripheral blood were collected from 135 deaf college students for detection of mutations in four gene，i.e.GJB2，GJB3，SLC26A4 and mitochondria 12SrRNA.Results The rate of mutations detection in the 135 subjects was 57.04%，including 23 cases of heterozygous mutations，34 cases of homozygous mutations and 20 cases of compound heterozygous mutations.The c.235 delC mutation accounted for 91.11%（41/45）of GJB2 gene mutations and c.IVS7-2A＞G accounted for 79.31%（23/29）of SLC26A4 gene mutations.For the 12SrRNA gene，there were only 3 cases of homogeneity mutations of m.1555A locus.Check out 1 cases of heterozygous mutations of c.547G＞A locus in GJB3 genes.Conclusions In the 135 cases，the rate of GJB2，GJB3，SLC26A4 and mitochondria 12SrRNA gene mutations was 57.04%.The c.235 delC mutation is the most common GJB2 gene mutation，while c.IVS7-2A＞G is common in SLC26A4 gene mutations.There were only a few cases of mitochondria 12SrRNA gene mutation，which is closely related to aminoglycoside drugs ototoxicity.GJB3 gene mutations appear rare.Testing of deafness-related genes in patients with hearing loss will not only help provide clear etiology at the level of molecular diagnosis，but also targeted prevention and genetic counseling for deafness，as well as potentially improving the gene pool.

【Keywords】Deafness；Deaf disease susceptibility genes；Genetic mutations；Genetic counseling

【中圖分類號(hào)】R764.43

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1672-2922（2016）03-365-5

DOI：10.3969 / j.issn.1672-2922.2016.03.010

作者簡(jiǎn)介：潘蕾，本科，研究方向：聽力基因篩查

通訊作者：陳亞秋，Email：qianyi3@sina.com

收稿日期：（2016-03-28審核人：袁永一）