盧鴻 侯淵博 陳志明

摘 要：為檢測與評價(jià)自配新型防霉劑對墻體霉菌的抑菌、殺菌效果，采集墻體上的霉菌，分離、純化及18S-rDNA測序鑒定，確定優(yōu)勢菌株；將鑒定出的優(yōu)勢霉菌接種在沙堡培養(yǎng)基中，37 ℃恒溫培養(yǎng)2～3 d，采用某市售品牌防霉劑A，不同濃度H2O2及自配防霉劑BIT進(jìn)行抑菌處理，通過比較抑菌圈大小評估抑制效果。次共分離出3種霉菌屬，分別是毛霉菌屬、曲霉菌屬、毛殼霉菌屬；三種方式處理后都能抑制霉菌生長，從抑菌圈大小進(jìn)行比較得出自配防霉劑的抑菌效果更好。自配新型防霉劑可以用于處理墻體霉變。

關(guān) 鍵 詞：防霉劑；霉菌；抑菌效果

中圖分類號：TQ 028 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A 文章編號： 1671-0460（2016）08-1685-03

Abstract： In order to detect and evaluate the antibacterial effect of new self-made mildew-proof agent， the mildews from the wall were collected， isolated and purified. The dominant mildews were determined by sequencing of 18S rDNA. And then， the dominant mildews were cultured in the PDA agar medium， and incubated at 37 ℃ for 2～3 d. Using the inhibition zone method， the antibacterial effects of market mildew-proof agent （A）， self-made mildew-proof agent （BIT）， and H2O2 on the mildews were compared. The results show that Mucor， Aspergillus and Chaetomium are the major mildews. The above three kinds of mildew-proof agents show antibacterial effect on the walls mildews， the self-made mildew-proof agent has the best antibacterial effect. So this self-made mildew-proof agent can be used as an anti- mildew regent to deal with the walls mildews.

Key words： mildew-proof agent； mildew； antibacterial effect

溫州屬亞熱帶季風(fēng)氣候，溫度適中，雨水充沛。潮濕的環(huán)境容易引起墻體發(fā)霉。墻體由于霉菌的生長導(dǎo)致裝飾涂層褪色乃至脫落，不僅影響了建筑的美觀，還破壞了墻體結(jié)構(gòu)，降低墻體的使用壽命[1]。墻體發(fā)霉也極大地危害了人類健康，長期接觸和吸入霉菌會(huì)引發(fā)呼吸道炎癥及過敏性疾病，產(chǎn)生鼻炎、過敏反應(yīng)、肺部疾病等癥狀[2]。目前市售防霉劑種類繁多，但墻體專用防霉劑研究較少。本次實(shí)驗(yàn)旨在研發(fā)一種新型的墻體專用防霉劑，使其能有效地抑制墻體表面霉菌生長。

1 試驗(yàn)部分

1.1 試驗(yàn)菌種

從我校教學(xué)樓霉變的墻體分離得到的毛霉、曲霉和毛殼霉作為試驗(yàn)測試菌株。

1.2 培養(yǎng)基

從我校教學(xué)樓霉變的墻體分離得到的毛霉、曲霉和毛殼霉作為試驗(yàn)測試菌株。

1.3 試劑

實(shí)驗(yàn)室自配防霉劑BIT；市場購買某品牌防霉劑A；30%雙氧水；無菌生理鹽水。

1.4 主要儀器與設(shè)備

恒溫培養(yǎng)箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠）；高壓滅菌鍋（上海生銀醫(yī)療儀器儀表有限公司）；空白濾紙片，直徑6 mm（杭州天和微生物有限公司）；打孔器及其他常規(guī)儀器。

2 試驗(yàn)方法

2.1 防霉劑的制備

自配防霉劑BIT用蒸餾水稀釋3個(gè)濃度即1/1000，2/1000和3/1000；雙氧水共2個(gè)濃度（5%，10%）；市售某品牌防霉劑A按說明書制備，稀釋為3個(gè)濃度即1/1000，2/1000和3/1000；無菌生理鹽水做空白對照。

2.2 墻體霉菌的分離、純化和鑒定

參照文獻(xiàn)方法，對墻體霉菌進(jìn)行分離、純化和鑒定[3]。用無菌生理鹽水浸濕的棉簽拭子在發(fā)霉的墻體擦拭，然后均勻涂布在沙堡氏培養(yǎng)基平板，在溫度（28±2） ℃、濕度大于90% 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3 d。對生長出的霉菌進(jìn)行分離、純化，直至獲得純化的菌種。并根據(jù)菌落形態(tài)（大小、顏色、質(zhì)地、有無氣生菌絲體、滲出物、氣味等 ）、菌體特征（菌絲形態(tài)、孢子形態(tài)、孢子產(chǎn)生方式、排列特征）進(jìn)行鑒定，綜合觀察到的菌落特征、鏡檢特征、菌種的培養(yǎng)特點(diǎn)和個(gè)體形態(tài)；采用NCBI 中BLAST 工具進(jìn)行查看和比對分析DNA 序列，鑒定霉菌優(yōu)勢菌種。將鑒定好的純菌用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.3 對比不同防霉劑對菌種的抑菌作用

2.3.1 霉菌孢子懸液制備

將分離得到的菌種在PDA培養(yǎng)基中培養(yǎng)2～3 d，然后用無菌水洗滌斜面，軟毛刷輕刷菌落表面，經(jīng)過濾除去菌絲，洗滌所得到的菌懸液倒入盛有玻璃球的三角瓶中振蕩分散，獲得霉菌單孢懸液，配成106個(gè)/mL備用。

2.3.2 紙片抑菌圈法

將制備好的試驗(yàn)菌種孢子懸液，用無菌棉簽蘸取后密涂于PDA培養(yǎng)基，并貼入不同防霉劑不同濃度浸泡過的無菌濾紙片，在溫度（28±2） ℃、濕度大于90% 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2～3 d觀察抑菌圈大小，進(jìn)而評價(jià)防霉劑的抑菌效果。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 霉變墻體上的霉菌

本次試驗(yàn)從墻體上分出的菌種經(jīng)鑒定后共有3種優(yōu)勢霉菌種，分別是毛霉菌屬、曲霉菌屬和毛殼霉菌屬。

3.2 抑菌效果評價(jià)

抑菌效果評價(jià)結(jié)果如下表1，表2。

4 結(jié) 論

通過對墻體表面的真菌分離培養(yǎng)，鑒定出主要有三種優(yōu)勢菌屬：毛霉菌屬、曲霉菌屬、毛殼霉菌屬。毛霉菌又叫黑霉菌、長毛霉菌，毛霉菌屬廣泛存在于土壤、糞便及禾草等環(huán)境中，在高溫、高濕度以及通風(fēng)不良的條件下生長良好；曲霉菌屬是引起多種物質(zhì)霉腐的主要微生物之一（如面包腐敗、煤生物分解及皮革變質(zhì)等），為條件致病菌[4]；毛殼霉菌屬屬于子囊菌綱球殼菌目毛殼菌科的真菌，大多數(shù)具有較強(qiáng)的纖維素降解能力，能引起人體感染性真菌疾病[5]。

目前，采用防霉劑進(jìn)行墻體防霉是有效抑制墻體長霉的好方法，但安全高效的墻體防霉劑甚少。墻體防霉主要采用在墻體建筑沙石、涂料中加入一些防霉劑組分，如：五氯酚鈉、苯環(huán)烷酸汞、醋酸苯汞、氯化異肽腈等，此類防霉劑只能保證在較短的時(shí)間內(nèi)具有較好的效果，時(shí)間太久之后霉菌仍會(huì)滋生[6]。因此，我們根據(jù)墻體霉菌分離情況來制備有針對性的防霉劑BIT，并評價(jià)其防霉效果。由表1結(jié)果可以看出，培養(yǎng)2～3 d，5%和10%濃度的H2O2抑菌效果最明顯，但由于H2O2容易分解，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，抑菌圈處會(huì)有霉菌再次生長，不利于墻體霉菌實(shí)際處理；而市售防霉劑和自配防霉劑抑菌圈處隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長不會(huì)有霉菌再次生長；自配新型防霉劑抑菌圈直徑大約為市售某品牌防霉劑的2倍；由于一定濃度的H2O2（如5%，10%）在初期對墻體霉菌有較好的抑制效果，將自配防霉劑與H2O2聯(lián)合運(yùn)用效果更佳（表2）。同一防霉劑處理?xiàng)l件下，毛殼霉菌屬的抑菌圈直徑小于另外兩種霉菌屬，說明該菌屬對防霉劑的抵抗性較強(qiáng)，應(yīng)引起重視。

綜上，自配新型防霉劑BIT與市面最常用的防霉劑A相比具有更為高效的防霉效果，并且BIT中所應(yīng)用的防霉成分安全、環(huán)保、成本較低，因此該自配防霉劑具有較大的實(shí)用的價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

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[2] 蘇澤斌. 墻面發(fā)霉的原因及對策[J]. 山西建筑，2010，36（19）：144-145.

[3] 劉俊，劉佳明，周鐵麗，等. 溫州地區(qū)皮革制品霉菌分離及自配防霉劑研究[J]. 中國皮革，2013，42（11）：23-24.

[4] 王紅，劉維達(dá). 曲霉病研究的某些新進(jìn)展.國外醫(yī)學(xué)皮膚性病學(xué)分冊[J] . 1998，24（3）：150-151.

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[6] Vacher S， Hernandez C， Ba rtschi C， et a1. Impact of paint and wall paper on mould growth on plaster boards and aluminum [J]. Building and Environment， 2010， 45（4）：916-921.