劉鐸，魯建美，呂露陽(yáng)

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吳茱萸炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

劉鐸，魯建美，呂露陽(yáng)

［摘要］目的：建立吳茱萸炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用顯微鑒別、薄層鑒別和水分、灰分及浸出物等方法對(duì)吳茱萸炮制品進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法，測(cè)定了吳茱萸炮制品中的檸檬苦素含量。結(jié)果：顯微鑒別等能夠很好地鑒別吳茱萸炮制品，薄層色譜鑒別專屬性較強(qiáng)。結(jié)論：所建立的質(zhì)量控制方法結(jié)果準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好，可控制吳茱萸炮制品的質(zhì)量。

［關(guān)鍵詞］吳茱萸炮制品；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；含量測(cè)定

［作者單位］西 南民族大學(xué)民族醫(yī)藥研究院，四川 成都 610041

吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Euodia rutaecarpa （Juss.） Benth、疏毛吳茱萸Euodia rutaecarpa （Juss.）Benth.var. bodinieri （Dode） Huang或石虎Euodia rutaecarpa （Juss.） Benth var.officinalis （Dode） Huang的干燥近成熟果實(shí)。8～11月果實(shí)尚未開裂時(shí)，剪下果枝，低溫干燥或曬干，除去葉、枝、果梗等雜質(zhì)。吳茱萸具有降逆止嘔，散寒止痛，助陽(yáng)止瀉的功效。臨床用于寒疝腹痛，厥陰頭痛，寒濕腳氣，經(jīng)行腹痛，嘔吐吞酸，脘腹脹痛，五更泄瀉等癥狀。對(duì)于吳茱萸炮制品自漢代起就有記載，對(duì)于吳茱萸的炮制方法全國(guó)各地方也收載了很多。［1-7］《中國(guó)藥典》［8］2010版中吳茱萸的炮制品僅收錄了甘草制吳茱萸和除去雜質(zhì)的吳茱萸，《全國(guó)中藥炮制規(guī)范》中收載了鹽吳茱萸［9］，而2002版《四川省中藥飲品炮制規(guī)范》收載有清炒吳茱萸、醋炙吳茱萸、鹽炙吳茱萸、黃連炙吳茱萸。但《四川省中藥飲品炮制規(guī)范》質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有吳茱萸的炮制方法及炮制品的性狀，并沒有進(jìn)行TLC和HPLC實(shí)驗(yàn)，因此我們收集了上述四種吳茱萸炮制品進(jìn)行系統(tǒng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，用以規(guī)范吳茱萸炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器

KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器 （昆山市超聲儀器有限公司）；STI-501型液相色譜儀（杭州賽智科技有限公司）；水浴鍋等。

1.2 試藥

乙腈為色譜純（天津科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20100106 ）；四氫呋喃（成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：2014092201），甲醇（成都市科龍化工試劑廠，批號(hào)：2014102901），乙醇（成都市科龍化工試劑廠批號(hào)：20120306），冰醋酸（成都市科龍化工試劑廠批號(hào)：20090910）均為分析純，水為高純水。

1.3 藥物飲片

吳茱萸炮制品分別購(gòu)于四川德仁堂中藥飲片有限公司（批號(hào)：130804），四川德仁堂中藥飲片有限公司（批號(hào)：140501），四川科倫藥業(yè)（批號(hào)：111202），四川省中藥飲片有限責(zé)任公司（批號(hào)：140314），四川利民中藥飲片有限責(zé)任公司（批號(hào)：140301），四川省中藥飲片有限責(zé)任公司（批號(hào)：140820），成都萬(wàn)好藥房，綿陽(yáng)神農(nóng)藥業(yè)有限公司（批號(hào)：131201），四川省中藥飲片有限責(zé)任公司，四川省洪雅縣瓦屋山藥業(yè)有限公司。

2　實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 性狀

同《四川省中藥飲片炮制規(guī)范》2002年版中炒吳茱萸、醋炙吳茱萸、鹽吳茱萸、黃連炙吳茱萸。炒吳茱萸：表面呈黑褐色。醋炙吳茱萸：經(jīng)炮制后呈黑褐色，含有醋香味。鹽吳茱萸：經(jīng)炮制后表面呈淺灰褐色，味苦、咸，苦。黃連炙吳茱萸：經(jīng)炮制后表面呈黑褐色，味極苦。

2.2 鑒別

2.2.1 顯微鑒別 采用吳茱萸藥材粉末《中國(guó)藥典》2010年版顯微鑒別標(biāo)準(zhǔn)。本品粉末呈褐色。腺毛頭部為7～14細(xì)胞，橢圓形，常含黃棕色內(nèi)含物。非腺毛長(zhǎng)140～350μm，2～6細(xì)胞，壁疣明顯，有的胞腔內(nèi)含棕黃色至棕紅色物；柄一般為2～5細(xì)胞。草酸鈣簇晶較多，偶有方晶；直徑10～25μm。石細(xì)胞類圓形或長(zhǎng)方形，直徑35～70μm，胞腔很大。有時(shí)可見油室碎片，呈淡黃色。（圖略）

2.2.2 薄層鑒別 采用《中國(guó)藥典》2010年版吳茱萸藥材薄層鑒別法，作吳茱萸炮制品薄層色譜。

取本品粉末0.4g，加乙醇10ml浸泡，靜置30分鐘后，于超聲清洗儀里處理30分鐘，濾過(guò)后取濾液作為供試品溶液。另取吳茱萸堿對(duì)照品、吳茱萸次堿對(duì)照品，加乙醇分別制成每1ml含1.5mg和0.2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》附錄ⅥB）進(jìn)行試驗(yàn)，分別吸取上述三種溶液2μl，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，用展開劑石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯-三乙胺（7∶3∶0.1）展開，取出，晾干，在365nm波長(zhǎng)的紫外光燈下檢視。在供試品色譜中，與對(duì)照品色譜中相應(yīng)的位置上，顯示的熒光斑點(diǎn)顏色相同，各樣品均能檢出吳茱萸堿和吳茱萸次堿，但吳茱萸堿在色譜中顯示不明顯（見圖1A）。

圖1（A） 10批吳茱萸炮制品TLC圖

由圖1A可見，采用《中國(guó)藥典》2010年版吳茱萸藥材薄層鑒別法，吳茱萸堿在色譜中顯示也不明顯，而且增加吳茱萸堿的點(diǎn)樣量也不能改善，因此采用《中國(guó)藥典》2005年版吳茱萸藥材薄層鑒別法與其進(jìn)行對(duì)比，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-三乙胺（19:5:1:1）為展開劑作薄層鑒別，結(jié)果顯示各樣品均能檢出吳茱萸次堿和吳茱萸堿，但吳茱萸堿在色譜中同樣顯示不明顯，增加點(diǎn)樣量也不能改善（見圖1B）。

S1：吳茱萸次堿；S2：吳茱萸堿；1～5：炒吳茱萸；6～7：鹽吳茱萸；8：醋吳茱萸；9～10：黃連炙吳茱萸

2.3 檢查

2.3.1 水分 按《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅨH第一法，于干燥至恒重的扁形稱量瓶中平鋪供試品2～5g，厚度一般為5mm左右；供試品疏松程度不超過(guò)10mm；精密稱定，在100～105℃打開瓶蓋干燥5小時(shí)，干燥好后移置干燥器中，冷卻30分鐘，再次精密稱定，再在上述溫度下干燥1小時(shí)，冷卻，稱重，至干燥后每?jī)纱畏Q重的差值不超過(guò)5mg為止。根據(jù)減少的重量，計(jì)算供試品中含水量（%）。分別測(cè)定了10批樣品，測(cè)定結(jié)果為5.8～12.2%（見表1）。

2.3.2 總灰分 按《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅨK方法，測(cè)定用的供試品使其粉碎后能通過(guò)二號(hào)篩，混合均勻后取供試品2～3g/3～5g（如須測(cè)定酸不溶性灰分），置熾灼的坩堝中，坩堝需恒重，稱定總重量（準(zhǔn)確至0.01g），緩緩熾熱，至完全炭化，避免燃燒，然后逐漸升溫至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根據(jù)前后稱重，計(jì)算供試品中總灰分的含量（%）。分別測(cè)定了10批樣品，測(cè)定結(jié)果為6.6～8.1%（見表1）。

2.3.3 浸出物 醇溶性浸出物：按《中國(guó)藥典》2010年版一部浸出物項(xiàng)下熱浸法，以稀乙醇為溶劑，取精密稱定供試品2～4g，置100～250ml的錐形瓶中，加稀乙醇50～100ml，密塞，稱定重量，靜置1小時(shí)后，采用回流裝置，加熱至沸騰，保持微沸1小時(shí)。放冷后，密塞，再稱定重量，用水補(bǔ)足減少的重量，搖勻后用干燥濾器濾過(guò)，精密量取濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中、用水浴蒸干，于105℃條件下干燥3小時(shí)，再置干燥器中冷卻30分鐘，迅速稱重。分別測(cè)定了10批樣品，測(cè)定結(jié)果為43.3～55.7%。（見表1）。

表1 不同批次吳茱萸炮制品水分、總灰分和浸出物測(cè)定結(jié)果

2.4 檸檬苦素含量測(cè)定

按《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VID，采用高效液相色譜法，分別測(cè)定了10批樣品中的檸檬苦素含量。

2.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

（1）以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑。

（2）以乙腈-水-四氫呋喃-冰醋酸（41:59:1:0.2）為流動(dòng)相。

（3）檢測(cè)波長(zhǎng)為225nm。

（4）理論塔板數(shù)按檸檬苦素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

按以上色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，色譜峰分離條件好?；旌蠈?duì)照品色譜峰（吳茱萸堿16.727min，吳茱萸次堿28.917min，檸檬苦素35.770min，檸檬苦素對(duì)照品濃度是0.23mg/ml）結(jié)果見圖2。

A：對(duì)照品；B～F：炒吳茱萸1～5；G～H：鹽吳茱萸6～7；I：醋吳茱萸8；J～K：黃連炙吳茱萸9～10：1吳茱萸堿；2吳茱萸次堿；3檸檬苦素

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備 取吳茱萸次堿對(duì)照品、檸檬苦素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含吳茱萸堿0.15mg、吳茱萸次堿0.1mg、檸檬苦素0.7mg的混合溶液，即得。

2.4.3 供試品溶液的制備 取本品粉末（過(guò)三號(hào)篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%乙醇25ml，稱定重量，浸泡1h，超聲處理（功率100w，頻率40kHz）40min，放冷，再稱定重量，用80%乙醇補(bǔ)足減少的重量，搖勻，濾過(guò)，取過(guò)濾液，即得。

2.4.4 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 不同批次吳茱萸炮制品浸出物和檸檬苦素測(cè)定結(jié)果

5炒四川利民中藥飲片有限責(zé)任公司（140301）　0.7 6　　鹽炙　四川省中藥飲片有限責(zé)任公司（140820）　0.6 7鹽炙　　成都萬(wàn)好藥房　1.2 8　　醋炙　　綿陽(yáng)神農(nóng)藥業(yè)有限公司（131201）　2.5 9　黃連炙　　四川省中藥飲片有限責(zé)任公司　0.2 10黃連炙　　四川洪雅瓦屋山藥業(yè)有限公司　0.7

3　結(jié)果與討論

吳茱萸中主要藥效成分是生物堿［10］，吳茱萸生物堿含量因產(chǎn)地不同差異也較大，其中生物堿含量較高的為武漢地區(qū)所產(chǎn)，而吳茱萸中羥基吳茱萸堿和吳茱萸次堿含量最高的為云南地區(qū)所產(chǎn)［11］。據(jù)報(bào)道，吳茱萸止嘔止痛、溫中散寒的作用主要依賴于生物堿［12］，所以最佳者應(yīng)該是炮制后所含揮發(fā)油和生物堿多者。因此本次實(shí)驗(yàn)中主要采用吳茱萸堿和吳茱萸次堿作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照品。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果為吳茱萸各類炮制品中的吳茱萸內(nèi)酯（檸檬苦素）、吳茱萸堿、吳茱萸次堿均有不同程度下降，而且以黃連炙吳茱萸下降最多。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道［13-16］中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同。究其原因，黃連與吳茱萸煎出液可產(chǎn)生沉淀且復(fù)方煎出液中黃連生物堿和吳茱萸生物堿的量均有不同程度的下降。

由于吳茱萸炮制品藥材缺乏統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來(lái)控制質(zhì)量，因此，本研究根據(jù)《中國(guó)藥典》2010版對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定和方法進(jìn)行系統(tǒng)性實(shí)驗(yàn)，為吳茱萸炮制品制定質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，將作為《四川省中藥飲品炮制規(guī)范》制定的重要參考依據(jù)，對(duì)全面控制吳茱萸炮制品的藥材質(zhì)量，保證臨床療效具有重要意義。

感謝四川省食品藥品檢驗(yàn)所、四川省中藥飲片炮制規(guī)范制定委員會(huì)為本次研究提供經(jīng)費(fèi)支持。

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（責(zé)任編輯：胡慧玲）

The quality standards research of Wuzhuyu processed products

IU Duo， LU Jian-mei， LV Lu-yang //（Ethnic MedicineInstitute， Southwest University for Nationalities， Chengdu 610041， Sichuan）

［Abstract］Objective: To establish a quality standard for Wuzhuyu processed product. Method: The microscopic identification， TLC and water， ash， and extractum detection were performed for the qualitatively identification of Wuzhuyu. High performance liquid chromatography （HPLC） method was applied to detect limonin concentration in Wuzhuyu. Result: Wuzhuyu can be well distinguished by microscopic identification， and TLC identification was specific. Conclusion: The established method of quality control is accurate， simple and reproducible which can be used for quality control of Wuzhuyu.

［Key words］Wuzhuyu； processed products； quality standard； content

［中圖分類號(hào)］R 283

［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A

［文章編號(hào)］1674-926X（2016）02-011-04

［作者簡(jiǎn)介］劉 鐸（1989-），男，漢族，碩士研究生，研究方向：中藥、民族藥的藥理與制劑研究

［通訊作者］呂 露陽(yáng)（1974-），女，漢族，講師，博士，主要研究方向：中藥、民族藥的制劑研究

［收稿日期］2016-02-21