徐　偉，孫俊哲，趙明早，王靖雯，董　相，姜　北*

（1.大理大學藥物研究所，云南大理　671000；2.大理大學藥學與化學學院，云南大理　671000）

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線紋香茶菜地下部分甾體與神經(jīng)酰胺類成分

徐偉1，2，孫俊哲1，2，趙明早1，2，王靖雯1，2，董相1，2，姜北1，2*

（1.大理大學藥物研究所，云南大理671000；2.大理大學藥學與化學學院，云南大理671000）

［摘要］目的：對線紋香茶菜（Isodon lophanthoides）地下部分化學成分進行研究。方法：采用硅膠、Sephadex LH-20等多種柱層析方法對線紋香茶菜地下部分進行分離純化，并運用現(xiàn)代波譜學技術與理化性質(zhì)等手段對分離的化合物進行結構鑒定。結果：從線紋香茶菜地下部分70%丙酮-水提取物的乙酸乙酯部位分離得到5個甾體類化合物和2個神經(jīng)酰胺類化合物，分別鑒定為：豆甾-4-烯-3-酮（1）、豆甾醇（2）、7α-羥基谷甾醇（3）、胡蘿卜苷（4）、5α，6β-二羥基胡蘿卜苷（5）、（2S，3S，4R，8E）-2-［（2′R）-2′-羥基-二十四酰氨基］-8-十八烯-1，3，4-三醇（6）、（2S，3R，4E，8Z）-1-O-β-D-葡萄糖-2-［（2′R）-2′-羥基-二十四酰氨基］-4，8-十八二烯-1，3-二醇（7）。結論：化合物1、3、5～7為首次從該植物中分離得到，其中化合物5～7為首次從該屬植物地下部分分離得到。

［關鍵詞］線紋香茶菜；地下部分；甾體；神經(jīng)酰胺

［DOI］10. 3969 / j. issn. 2096-2266. 2016. 04. 001

線紋香茶菜（Isodon lophanthoides）為唇形科香茶菜屬植物，主要分布于我國西南、中南及華南地區(qū)，生長于海拔500～2 700 m的沼澤地上或林下潮濕處。民間藥用記載該植物全草入藥可用于治療急性黃疸型炎癥、急性膽囊炎、咽喉炎、婦科病、瘤型麻風，也可解草烏中毒〔1-2〕。王兆全等〔3〕已對該植物的化學成分進行了初步研究，但僅限于其地上部分的莖葉，而針對其地下部分疙瘩狀根莖的研究至今報道甚少。為了解與認識該植物地下部分的化學成分，本實驗對采自云南大理地區(qū)的線紋香茶菜地下部分乙酸乙酯部位進行了系統(tǒng)的研究，提取分離得到了5個甾體類化合物和2個神經(jīng)酰胺類化合物，分別為：豆甾-4-烯-3-酮（1）、豆甾醇（2）、7α-羥基谷甾醇（3）、胡蘿卜苷（4）、5α，6β-二羥基胡蘿卜苷（5）、（2S，3S，4R，8E）-2-［（2′R）-2′-羥基-二十四酰氨基］-8-十八烯-1，3，4-三醇（6）、（2S，3R，4E，8Z）-1-O-β-D-葡萄糖-2-［（2′R）-2′-羥基-二十四酰氨基］-4，8-十八二烯-1，3-二醇（7）。見圖1。

圖1　化合物1～7的結構

1　儀器與材料

1.1實驗材料本實驗所用植物于2010年10月采自云南省大理市下關南郊大風壩，由中科院昆明植物研究所向春雷博士鑒定為線紋香茶菜Isodon lophanthoides（Buch.-Ham. ex D. Don）H. Hara，植物標本（編號：20101003-1b）存放于大理大學藥物研究所姜北教授研究組。

1.2儀器與試劑Bruker Avance III-400核磁共振波譜儀（TMS為內(nèi)標）；Waters AutoSpec Premier P776雙聚焦三扇型磁質(zhì)譜儀，電離條件為70 eV；Bruker HCT Esquire 3000液相色譜/離子阱質(zhì)譜聯(lián)用儀；電子分析天平〔賽多利斯科學儀器（北京）有限公司〕；旋轉蒸發(fā)儀RE-52AA（上海亞榮生化儀器廠）；柱色譜硅膠與薄層色譜硅膠GF254（青島海洋化工廠）；Sephadex LH-20（Amersham Biosciences）；石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇等均為工業(yè)級有機溶劑，經(jīng)重蒸后使用；正丁醇、異丙醇均為分析純。

2　提取分離

線紋香茶菜干燥塊狀根莖（9.0 kg）粉碎后用70%丙酮-水室溫冷浸提取4次，減壓濃縮所得總浸膏用適量水混懸后依次用乙酸乙酯、正丁醇分配數(shù)次；乙酸乙酯部分減壓濃縮得浸膏183.6 g，與適量粗硅膠（80～100目）混合拌樣后經(jīng)200～300目硅膠柱色譜，氯仿-丙酮混合溶劑梯度洗脫（1：0至0：1），經(jīng)TLC（薄層層析法）檢測合并相同流分得5個組分（A～E）。組分B經(jīng)Sephadex LH-20（氯仿：甲醇=1：1）柱層析、重結晶（石油醚-乙酸乙酯）以及硅膠柱層析（石油醚-乙酸乙酯）得到化合物2（6.3 mg）和3 （37.7 mg）。組分C經(jīng)Sephadex LH-20（氯仿：甲醇= 1：1）柱層析與反復硅膠柱層析（石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、氯仿-甲醇）得到化合物1（2.5 mg）。組分D經(jīng)硅膠柱層析（氯仿-丙酮10：1）和重結晶（氯仿-丙酮）的方法得到化合物6（10.5 mg）。組分E經(jīng)反復硅膠柱層析（氯仿-丙酮、氯仿-甲醇）、Sephadex LH-20（氯仿：甲醇=1：1）柱層析以及重結晶（氯仿-甲醇）的方法得到化合物7（49.2 mg）、4 （44.0 mg）和5（68.3 mg）。

3　實驗結果

化合物1：白色粉末。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.63（1H，s，H-4），1.23（3H，s，M-19），0.95（3H，d，J=6.6 Hz，M-21），0.87（3H，d，J=6.9 Hz，Me-26），0.86（3H，t，J=7.2 Hz，Me-29），0.83（3H，d，J=6.9 Hz，M-27），0.72（3H，s，Me-18）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：35.7（C-1），33.8（C-2），198.4（C-3），123.4 （C-4），171.0（C-5），32.7（C-6），32.0（C-7），35.5 （C-8），53.9（C-9），38.5（C-10），20.9（C-11），39.6（C-12），43.3（C-13），55.9（C-14），24.0（C-15），28.1（C-16），56.0（C-17），11.7（C-18），17.0（C-19），36.0（C-20），18.7（C-21），33.8（C-22），25.9（C-23），45.8（C-24），29.6（C-25），19.5（C-26），18.7（C-27），22.9（C-28），11.7（C-29）。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻〔4〕報道的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故確定1為豆甾-4-烯-3-酮。

化合物2和3在TLC上選擇石油醚-乙酸乙酯、氯仿-丙酮、氯仿-甲醇、環(huán)己烷-異丙醇等溶劑系統(tǒng)分別展開，其Rf值及斑點顏色均與對照品一致，故確定2和3分別為豆甾醇和7α-羥基谷甾醇。

化合物4：白色粉末。1H NMR（400 MHz，C5D5N）δ：5.38（1H，brd，J=4.0 Hz，H-6），5.10（1H，d，J= 7.6 Hz，H-1′），4.62（1H，dd，J=11.8，2.4 Hz，H-6′a），4.45（1H，dd，J=11.8，5.2 Hz，H-6′b），4.04（1H，t，J=7.6 Hz，H-2′），4.01（1H，m，H-3），0.99（1H，d，J=6.5 Hz，H-21），0.93（3H，s，H-19），0.89（3H，t，J = 7.2 Hz，H-29），0.88（1H，d，J = 7.1 Hz，H-26），0.87（1H，d，J = 7.1 Hz，H-27），0.66（3H，s，H-18）；13C NMR（100 MHz，C5D5N）δ：38.2（C-1），30.9 （C-2），79.0（C-3），40.6（C-4），141.5（C-5），122.5 （C-6），34.8（C-7），32.7（C-8），50.9（C-9），37.5 （C-10），21.9（C-11），39.9（C-12），43.1（C-13），57.5（C-14），25.1（C-15），29.2（C-16），56.8（C-17），12.6（C-18），19.8（C-19），36.8（C-20），19.5 （C-21），34.8（C-22），26.9（C-23），46.6（C-24），30.1（C-25），20.6（C-26），19.9（C-27），23.9（C-28），12.8（C-29），103.2（C-1′），75.9（C-2′），78.5 （C-3′），72.4（C-4′），79.2（C-5′），63.4（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻〔5〕報道的波譜數(shù)據(jù)一致，故確定4為胡蘿卜苷。

化合物5：白色粉末。1H NMR（400 MHz，C5D5N）δ：4.95（1H，d，J=7.7 Hz，H-1′），4.45（1H，dd，J= 11.9，2.4 Hz，H-6′a），4.36（1H，dd，J=11.9，5.0 Hz，H-6′b），4.25（1H，t，J=9.0 Hz，H-4′），4.16（1H，t，J = 8.9 Hz，H-3′），4.11（1H，brs，H-6），4.01（1H，dd，J=8.9，7.7 Hz，H-2′），3.72（1H，m，H-5′），2.81 （1H，t，J = 11.8 Hz，H-4a），2.44（1H，dd，J = 13.1，4.9 Hz，H-4b），1.54（3H，s，H-19），1.00（3H，d，J= 6.4 Hz，H-21），0.90（3H，t，J=7.8 Hz，H-29），0.88 （3H，d，J=7.1 Hz，H-27），0.86（3H，d，J=7.1 Hz，H-26），0.70（3H，s，H-18）；13C NMR（100 MHz，C5D5N）δ：32.8（C-1），30.9（C-2），75.1（C-3），38.4 （C-4），75.3（C-5），76.0（C-6），35.4（C-7），30.1 （C-8），45.6（C-9），38.9（C-10），23.1（C-11），40.4 （C-12），42.8（C-13），56.3（C-14），24.4（C-15），29.2（C-16），56.3（C-17），12.1（C-18），16.7（C-19），36.3（C-20），19.0（C-21），34.0（C-22），26.3（C-23），45.8（C-24），29.2（C-25），19.0（C-26），19.7（C-27），23.2（C-28），11.9（C-29），102.1（C-1′），74.8（C-2′），78.4（C-3′），71.4（C-4′），78.0（C-5′），62.5（C-6′）。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻〔6〕報道的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故確定5為5α，6β-二羥基胡蘿卜苷。

化合物6：白色粉末。ESI-MS m/z：704［M+ Na］+（23），691（19），413（42），313（46），302（100），172（45），159（31）；1H NMR（400 MHz，C5D5N）δ：8.59（1H，d，J=8.9 Hz，NH），5.53（2H，m，H-8，9），5.11（1H，m，H-2），4.63（1H，dd，J=7.7，3.7 Hz，H-2′），4.52（1H，dd，J=10.8，4.6 Hz，H-1a），4.43（1H，dd，J=10.8，4.9 Hz，H-1b），4.36（1H，dd，J=6.7，4.6 Hz，H-3），4.29（1H，m，H-4），1.18～2.35（m，H-11～17，5′～23′），0.87（6H，t，J=7.1 Hz，H-18，24′）；13C NMR （100 MHz，C5D5N）δ：62.5（C-1），53.5（C-2），77.3 （C-3），73.4（C-4），34.3（C-5），27.2（C-6），33.5 （C-7），131.2（C-8），131.3（C-9），33.8（C-10），30.0～30.5（C-11～15），32.6（C-16），23.4（C-17），14.8（C-18），175.7（C-1′），72.9（C-2′），36.2（C-3′），26.3（C-4′），30.0～30.5（C-5′～21′），32.6（C-22′），23.4（C-23′），14.8（C-24′）。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻〔7〕報道的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故確定6為（2S，3S，4R，8E）-2-［（2′R）-2′-羥基-二十四酰氨基］-8-十八烯-1，3，4-三醇。

化合物7：白色粉末。EI-MSm/z：825〔M〕+（8），798（13），714（8），696（13），534（38），315（31），314（100），297（88），262（41），163（6）；1H NMR （400 MHz，CD3OD）δ：7.84（1H，d，J=9.0 Hz，NH），5.90（1H，dt，J=15.4，6.3 Hz，H-5），5.66（1H，dd，J=15.4，7.2 Hz，H-4），5.53（2H，t，J=4.3 Hz，H-8，9），4.46（1H，d，J=7.6 Hz，H-1′′），4.31（1H，m，H-3），4.27（1H，dd，J=10.2，5.5 Hz，H-1a），4.18（1H，m，H-2′），4.16（1H，m，H-2），4.03（1H，d，J=11.9 Hz，H-6′′a），3.90（1H，m，H-1b），3.84（1H，m，H-6′′b），3.55（1H，m，H-5′′），3.47（1H，m，H-4′′），3.46（1H，m，H-3′′），3.37（1H，m，H-2′′），2.29（1H，m，H-7），2.24（1H，m，H-6），2.21（1H，m，H-10），1.82（1H，m，H-3′），1.58（1H，m，H-11），1.39～1.88（m，H-11～17，5′～23′），1.06（6H，t，J = 6.8 Hz，H- 18，24′）；13C NMR（100 MHz，CD3OD）δ：69.7（C-1），54.4（C-2），72.7（C-3），134.0（C-4），131.3（C-5），33.5（C-6），27.8（C-7），131.2（C-8），130.0（C-9），28.1（C-10），26.1（C-11），27.6～32.9（C-12～17），14.8（C-18），177.0（C-1′），72.9（C-2′），35.7（C-3′），27.6-32.9（C-4′～21′），32.6（C-22′），14.8（C-24′），104.5（C-1′），74.8（C-2′），77.8（C-3′），71.4 （C-4′），77.7（C-5′），62.5（C-6′）。上述波譜數(shù)據(jù)與文獻〔8〕報道的波譜數(shù)據(jù)基本一致，故確定7為（2S，3R，4E，8Z）-1-O-β-D-葡萄糖-2-［（2′R）-2′-羥基-二十四酰氨基］-4，8-十八二烯-1，3-二醇。

4　討論

本實驗從線紋香茶菜地下部分分離鑒定了一系列甾體與神經(jīng)酰胺類化合物，前人研究顯示這兩類都具有豐富的藥理活性。邱瑞霞〔9〕研究表明豆甾類混合物（豆甾-3，5-二烯、豆甾-5-烯-3-醇、豆甾-3，5-二烯-7-酮，豆甾-5，22-二烯-3-醇）對藤黃微球菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌以及大腸埃希菌具有不同程度的抑制作用；祁翠翠〔10〕研究發(fā)現(xiàn)化合物1具有促進骨骼細胞增殖活性；神經(jīng)酰胺類化合物則是皮膚角質(zhì)層的重要組分之一，具有黏合、屏障、保濕、抗過敏和抗衰老等作用，現(xiàn)已廣泛應用于化妝品行業(yè)〔11〕；神經(jīng)酰胺成苷后具有保護神經(jīng)，調(diào)節(jié)細胞生長及凋亡，現(xiàn)已用于神經(jīng)恢復治療的藥物，并有望開發(fā)成為改善阿爾茨海默病的藥物〔12〕；TANG等〔13〕研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)酰胺及其糖苷類化合物對于番茄灰霉菌、瓜果腐霉菌、溶血葡萄球菌、番茄瘡痂病菌具有不同程度的抑制作用。由此可見，線紋香茶菜地下部分含有豐富的甾體與神經(jīng)酰胺類成分對于該植物的生理過程應該十分重要，可能為該植物抵御病菌侵害與生長發(fā)育的重要組成部分。本研究為更好地認識和了解線紋香茶菜的化學品質(zhì)與藥用價值提供了依據(jù)，為更好的開發(fā)與利用該植物資源創(chuàng)造了條件。

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（責任編輯李楊）

Steroidal and Ceramide Constituents from Underground Part of Isodon lophanthoides

Xu Wei1，2，Sun Junzhe1，2，Zhao Mingzao1，2，Wang Jingwen1，2，Dong Xiang1，2，Jiang Bei1，2*
（1. Institute of Materia Medica of Dali University，Dali，Yunnan 671000，China；2. College of Pharmacy and Chemistry，Dali University，Dali，Yunnan 671000，China）

〔Abstract〕Objective: To explore the chemical constituents from the underground part of Isodon lophanthoides. Methods: The compounds were isolated and purified by silica gel and Sephadex LH-20 column chromatography. Their structures were identified by various spectral analysis and physicochemical properties. Results: Five steroidal compounds and two ceramide compounds were obtained from ethyl acetate fraction of 70%acetone-water extract of the Isodon lophanthoides underground part and identified as stigmast-4-ene-3-one（1），stigmasterol（2），7α-hydroxysitosterol（3），daucosterol（4），5α，6β-dihydroxy-daucosterol（5），（2S，3S，4R，8E）-2-［（2′R）-2-hydroxytetracosanoylamino］-1，3，4-octadecanetriol-8-ene（6），and 1-O-β-D-glucopyranosyl-（2S，3R，4E，8Z）-2-［（2′R）-2-hydroxytetracosanoylamino］-1，3-octadecanediol-4，8-diene（7）. Conclusion: All of these compounds except for 2 and 4 were isolated from this plant for the first time，while the compounds 5-7 were firstly obtained from the underground part of Isodon plants.

〔Key words〕Isodon lophanthoides；underground part；steroids；ceramides

［中圖分類號］R284.2

［文獻標志碼］A

［文章編號］2096-2266（2016）04-0001-04

［基金項目］國家自然科學基金資助項目（81060259）

［收稿日期］2015-09-24［修回日期］2015-11-07

［作者簡介］徐偉，碩士研究生，主要從事天然產(chǎn)物研究.

*通信作者：姜北，教授，博士.