王亞鳳，黃永林，劉金磊，顏小捷，陳月圓，楊子明，何瑞杰，李典鵬

(廣西壯族自治區(qū)中國科學院廣西植物研究所，廣西植物功能物質研究與利用重點實驗室，廣西桂林　541006)

殼斗科植物種子的多酚類含量及抗氧化能力*

王亞鳳，黃永林**，劉金磊，顏小捷，陳月圓，楊子明，何瑞杰，李典鵬

(廣西壯族自治區(qū)中國科學院廣西植物研究所，廣西植物功能物質研究與利用重點實驗室，廣西桂林541006)

摘要：【目的】測定青岡櫟Cyclobalanopsis glauca(Thunb.) Oerst.、飯甑青岡Cyclobalanopsis fleuryi (Hickel.et A.Camus) Chun ex Q.F.Zheng、大葉櫟Quercus griffithii Hook.f.et Thoms ex Miq.、栲Castanopsis fargesii、椆木Lithocarpus thalassica (Hance) Rehd.種子中的多酚含量，評價其提取物的抗氧化能力，并分析多酚含量與抗氧化能力的關系?！痉椒ā坎捎肍olin-酚法測定多酚含量，通過DPPH·和ABTS·自由基清除法評價種子提取物的抗氧化能力?！窘Y果】在選取的5種殼斗科植物種子中，飯甑青岡的多酚含量最高(14.16%)，其次為大葉櫟(10.89%)，栲的含量最低(0.44%)；各提取物均表現(xiàn)出良好的抗氧化能力，其中青岡櫟的半清除率質量濃度IC50均優(yōu)于抗壞血酸(Vc)，飯甑青岡IC50與Vc相當?！窘Y論】青岡櫟與飯甑青岡種子提取物可作為天然抗氧化劑應用于保健品、化妝品乃至藥品等行業(yè)。

關鍵詞：殼斗科總酚含量測定抗氧化能力

0引言

【研究意義】殼斗科植物因其種子均有包含種子的殼斗而得名，主要產于亞洲東南部及南部，中國分布的有栗屬(Castanea)、錐屬(Castanopsis)、水青岡屬(Fagus)、柯屬(Lithocarpus)、櫟屬(Quercus)、青岡屬(Cyclobalanopsis)和三棱櫟屬(Trigonobalanus)等7屬，約300種。除新疆維吾爾自治區(qū)有引種外，其它各省均為自然分布。殼斗科植物多為常綠或落葉喬木，稀灌木，是山地水源林的重要成分及主要用材樹種[1]?！厩叭搜芯窟M展】現(xiàn)有的研究表明殼斗科植物樹葉、樹皮均富含多酚類成分，并具有很好的抗氧化活性[2-8]。關小麗等[4]對8種殼斗科植物葉中總酚的含量進行測定并進行抗氧化能力檢測，表明研究的8種殼斗科植物葉中均含有多酚類成分并具有較好的抗氧化能力。Huang等[5]對大葉櫟新鮮葉子提取物進行化學成分分離，得到大量多酚類化合物，并對主要成分進行脂肪酶抑制活性研究和ORAC值測定。Huang等[6-8]還從苦櫧葉、米櫧葉中分離得到多種多酚物質?！颈狙芯壳腥朦c】目前對于殼斗科植物種子的研究主要集中在總脂肪、蛋白質、還原糖、淀粉、果膠等營養(yǎng)成分的比較分析上，還未見有關化學成分及藥理活性方面的公開報道[9]。因此本文從種子的化學成分入手，研究其應用價值?！緮M解決的關鍵問題】測定種子中多酚類成分的含量、類型及其抗氧化能力，為全面開發(fā)利用殼斗科植物資源提供科學依據。

1材料與方法

1.1儀器

JA2003N電子天平(上海菁海儀器有限公司)；AS5150A超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；N-1100旋轉型蒸發(fā)儀(東京理化)；CA-1111冷卻水循環(huán)(東京理化)；十兩裝高速中藥粉碎機(浙江瑞安市百信藥機器械廠)；TDZ4A-WS低速臺式離心機(湘儀離心機有限公司)；電子恒溫不銹鋼水浴鍋(上海宜昌儀器紗篩廠)；RT-9100半自動生化分析儀(深圳雷杜生命科學股份有限公司)。

1.2試劑

沒食子酸對照品(中國藥品生物制品檢定所)；2，2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS，美國Sigma公司)；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH，美國Sigma公司)；福林酚試劑(GOLD WHEAT)；抗壞血酸(Vc，中國藥品生物制品檢定所)；純凈水；其它試劑均為分析純。

1.3樣品

實驗樣品經廣西植物研究所呂仕洪副研究員鑒定分別為青岡櫟Cyclobalanopsis glauca(Thunb.) Oerst.、飯甑青岡Cyclobalanopsis fleuryi (Hickel.et A.Camus) Chun ex Q.F.Zheng、大葉櫟Quercus griffithii Hook.f.et Thoms ex Miq.、栲Castanopsis fargesii、椆木Lithocarpus thalassica (Hance) Rehd.的種子。憑證標本保存于廣西植物功能物質研究與利用重點實驗室。

1.4方法

1.4.1含量測定方法

有關對照品溶液的配制以及標準曲線的制作均參考文獻[10]。

1.4.1.1對照品溶液的配制

精密稱取干燥至恒重的沒食子酸對照品10.5 mg，置于100 mL容量瓶中，用50%(V/V)甲醇溶解并定容至刻度并搖勻，即得0.105 g·L-1的沒食子酸對照品溶液。

1.4.1.2標準曲線的建立

分別精確吸取50 μL、100 μL、150 μL、200 μL、250 μL、300 μL對照品溶液于具塞試管中，加入蒸餾水稀釋至1 mL(同時以1 mL蒸餾水作對照)，然后加入0.5 mL Folin-Ciocalteu試劑搖勻，靜置10 min后分別加入1.5 mL 0.075 g/mL的碳酸鈉溶液及2 mL蒸餾水，搖勻，置于40℃水浴鍋中反應1 h，冷卻，于760 nm波長處測定樣品吸光值。以吸光度(X)為橫坐標，所測定樣品的含量(Y)為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程Y=0.0472X-0.0008(R2=0.9994)，表明在本實驗條件下沒食子酸在0～31.5 μg具有良好線性關系。

1.4.1.3供試品溶液的制備

將真空干燥的種子粉碎，過40目篩，精密稱取粉末1 g，按1∶25的料液比加入80%(V/V)的乙醇超聲提取2次，每次30 min，過濾，合并濾液并轉移至100 mL容量瓶中，用80%(V/V)的乙醇定容至100 mL，搖勻，即得到供試品溶液。

1.4.1.4總多酚含量測定

分別精密取殼斗科植物種子樣品各3份，按照1.4.1.3節(jié)中方法進行供試品溶液的制備，按照1.4.1.2節(jié)中方法顯色及測定吸光度值，并由線性回歸方程計算出樣品中多酚的含量，并計算出各樣品中多酚類物質的百分含量。

1.4.1.5方法學驗證

(1)精密度實驗

精確吸取一定量青岡櫟種子供試品溶液，按1.4.1.2節(jié)中方法顯色，在760 nm波長處進行吸光度測定，連續(xù)測量6次，測得數(shù)據的RSD為0.028%，表明儀器精密度良好。

(2)穩(wěn)定性實驗

精確吸取一定量青岡櫟種子供試品溶液，按1.4.1.2節(jié)中方法顯色，測量240 min內吸光度值，每30 min測一次，測得數(shù)據的RSD為0.46%，表明該樣品在顯色后240 min內穩(wěn)定性良好。

(3)重現(xiàn)性實驗

參考文獻[4，11]，分別稱取一定量青岡櫟種子粉末，按1.4.1.3節(jié)中方法制備供試品溶液6份，從每份供試品溶液中精確吸取一定量的溶液，按1.4.1.2節(jié)中方法顯色，在760 nm波長處測定吸光度值，可計算出青岡櫟種子中多酚類物質的含量為5.11%，其RSD為0.44%，表示該提取方法重復性良好。

(4)加樣回收率實驗

精密稱取已知多酚含量樣品6份，按1.4.1.3節(jié)中方法制備供試品溶液，再分別吸取一定量的供試品溶液，并加入一定量的對照品，按1.4.1.2節(jié)中方法顯色并測定吸光度值，計算平均加樣回收率為100.87%，RSD為0.66%，說明該方法具有較高的準確性。

1.4.2抗氧化能力測定

實驗方法參考文獻[11-15]，有所改動。

1.4.2.1供試品溶液的制備

將真空干燥的種子粉碎，過40目篩，精密稱取粉末10 g，按1.4.1.3節(jié)中方法進行提取，過濾，合并濾液并減壓濃縮干燥，即得供試樣品，然后通過1.4.1.2節(jié)中的方法測定提取物中多酚含量。

1.4.2.2DPPH·自由基清除實驗

精密吸取不同濃度的樣品溶液0.5 mL于具塞試管中，加入0.5 mL DPPH乙醇溶液(0.394 g·L-1)混勻(空白組用溶劑代替樣品溶液，對照組用溶劑代替DPPH溶液)。以上3組在37℃水浴中放置30 min，于517 nm處測定其吸光度。按照同樣方法以Vc作陽性對照，按照如下公式計算DPPH·自由基的清除率，并計算半清除率質量濃度(IC50)，

DPPH·清除率=[A空白-(A樣品-A對照)]/A空白×100%。

1.4.2.3ABTS·自由基清除實驗

精密吸取不同濃度的樣品溶液200 μL于具塞試管中，然后加入2 mL ABTS溶液混勻(空白組用溶劑代替樣品，對照組用溶劑代替ABTS溶液)。以上3組在室溫下避光放置30 min，于734 nm處測定吸光度。按照同樣方法以Vc作陽性對照，按照如下公式計算ABTS·自由基的清除率，并計算半清除率質量濃度(IC50)，

ABTS·消除率=[A空白-(A樣品-A對照)]/A空白×100%。

2結果與分析

2.1總多酚含量

通過對殼斗科植物種子中多酚類含量測定結果(表1)可知，殼斗科植物種子中均含有多酚類成分，飯甑青岡種子中的總多酚含量最高(14.16%)，其次為大葉櫟(10.89%)，栲含量最低(0.44%)，各植物種子間多酚類物質含量差異大。

表1不同樣品多酚含量(n=3)

Table 1Polyphenol content of samples(n=3)

樣品Samples多酚含量Polyphenolcontent(%)RSD(%)青岡櫟種子SeedsofCyclobalanopsisglauca5.111.43飯甑青岡種子SeedsofCyclobalanopsisfleuryi14.161.56大葉櫟種子SeedsofQuercusgriffithii10.891.92栲種子SeedsofCastanopsisfargesii0.442.10椆木種子SeedsofLithocarpusthalassica1.311.04

2.2抗氧化能力

2.2.1DPPH·自由基清除能力

在同一質量濃度下，經DPPH·自由基清除實驗檢測，吸光度越小說明樣品消除能力越強。如表2所示，在一定質量濃度范圍內，樣品質量濃度與DPPH·清除能力具有明顯的量效關系。青岡櫟種子、飯甑青岡種子提取物樣品的DPPH·清除能力與Vc相當，大葉櫟種子提取物的DPPH·清除能力最弱，這可能與植物的多酚類物質種類有關。

2.2.2ABTS·自由基清除能力

在一定質量濃度下，經ABTS·自由基清除實驗檢測，吸光度越小說明樣品消除能力越強。由表3可知，在一定質量濃度范圍內，樣品質量濃度與ABTS·清除能力具有明顯的量效關系。樣品中除椆木種子提取物外，其他提取物均表現(xiàn)出較強的ABTS·清除能力，其中青岡櫟種子提取物的ABTS·清除能力最強，在同等質量濃度下青岡櫟種子提取物IC50優(yōu)于Vc，飯甑青岡IC50與Vc相當。

表2樣品清除DPPH·自由基能力

Table 2The capability of DPPH· radical scavenging of samples

樣品SamplesIC50(mg·ml-1)青岡櫟種子SeedsofCyclobalanopsisglauca0.38飯甑青岡種子SeedsofCyclobalanopsisfleuryi0.43大葉櫟種子SeedsofQuercusgriffithii4.88栲種子SeedsofCastanopsisfargesii1.10椆木種子SeedsofLithocarpusthalassica3.84Vc0.41

表3樣品清除ABTS·自由基能力

Table 3The capability of ABTS· radical scavenging of samples

樣品SamplesIC50(mg·ml-1)青岡櫟種子SeedsofCyclobalanopsisglauca0.13飯甑青岡種子SeedsofCyclobalanopsisfleuryi0.61大葉櫟種子SeedsofQuercusgriffithii2.17栲種子SeedsofCastanopsisfargesii1.96椆木種子SeedsofLithocarpusthalassica4.97Vc0.31

3結論

通過對殼斗科植物種子中多酚類含量的測定可知，飯甑青岡種子中的總多酚含量最高(14.16%)，其次為大葉櫟(10.89%)，栲含量最低(0.44%)，各植物種子間多酚類物質含量差異比較大。綜合2種抗氧化能力試驗結果表明，青岡櫟種子提取物的還原能力均高于對照品Vc，飯甑青岡種子提取物與對照品Vc相當。因此，殼斗科植物中，青岡櫟與飯甑青岡種子提取物可作為天然抗氧化劑應用于保健品、化妝品乃至藥品等行業(yè)。

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(責任編輯：米慧芝)

Content and Antioxidant Capacity of Polyphenols from the Seeds of Fagaceae Plants

WANG Yafeng,HUANG Yonglin,LIU Jinlei,YAN Xiaojie,CHEN Yueyuan,Yan Ziming,HE Ruijie,LI Dianpeng

(Guangxi Key Laboratory of Functional Phytochemicals Research and Utilization,Guangxi Institute of Botany,Guangxi Zhuang Autonomous Region and the Chinese Academy of Sciences，Guilin，Guangxi，541006，China)

Abstract:【Objective】The content of polyphenols from the seeds of Cyclobalanopsis glauca(Thunb.) Oerst.,Cyclobalanopsis fleuryi (Hickel.et A.Camus) Chun ex Q.F.Zheng,Quercus griffithii Hook.f.et Thoms ex Miq.,Castanopsis fargesii and Lithocarpus thalassica (Hance) Rehd.was determined,antioxidant capacities of their extract were compared,and the relationship between the content of polyphenols and antioxidant capacity was analyzed.【Methods】The content of polyphenols was determined by the method of Folin-phenol,and antioxidant capacities of their extract were compared by DPPH· and ABTS· radical scavenging.【Results】The content of polyphenols from C.fleuryi was the highest (14.16%),followed by Q.griffithii(10.89%),and C.fargesii was the lowest (0.44%),and all extracts showed good antioxidant capacity.The IC50value of C.glauca was better than that of Vc,and the IC50of C.fleuryi was similar to that of Vc.【Conclusion】The extracts from the seeds of C.glauca and C.fleuryi could be used in health care products, cosmetics and even pharmaceuticals.

Key words:Fagaceae，polyphenols，content determination，antioxidant capacity

收稿日期：2015-11-12

作者簡介：王亞鳳 (1990-)，女，碩士研究生，主要從事天然產物化學研究。

中圖分類號：TS255.1

文獻標識碼：A

文章編號：1005-9164(2016)02-0180-04

修回日期：2016-01-18

*廣西自然科學基金項目(2014GXNSFCB118001)，中國科學院“西部之光”人才培養(yǎng)計劃項目(科發(fā)人字[2013]165號)，廣西科學院基本科研業(yè)務費項目(15YJ22ZWS22)，廣西植物功能物質研究與利用重點實驗室開放基金項目(ZRJJ2013-7，ZRJJ2014-1)和廣西壯族自治區(qū)八桂學者專項經費項目資助。

**通信作者：黃永林(1974-),男，博士，研究員，碩士生導師，主要從事天然產物化學及開發(fā)利用研究,E-mail:hyl@gxib.cn。

廣西科學Guangxi Sciences 2016,23(2):180～183,188

網絡優(yōu)先數(shù)字出版時間：2016-03-15

網絡優(yōu)先數(shù)字出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/45.1206.G3.20160315.1515.022.html