高權(quán)利，劉　陽，張智鵬，李艷明，蘭天馳，張　靖，熊偉曼，趙　力（陜西省漢中市動物疾病預(yù)防控制中心，陜西漢中723000）

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豬（O）型口蹄疫政府統(tǒng)購苗和市場高效商品苗免疫效果比較分析

高權(quán)利，劉陽，張智鵬，李艷明，蘭天馳，張靖，熊偉曼，趙力
（陜西省漢中市動物疾病預(yù)防控制中心，陜西漢中723000）

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性、熱性、高度接觸性傳染病，易感動物達70多種，主要侵害偶蹄類動物，少見于人。豬口蹄疫是國家強制免疫的重大動物疫病之一，疫苗由國家統(tǒng)一免費供應(yīng)。但在實際應(yīng)用中，一些疫苗經(jīng)銷商為了推銷所經(jīng)銷的疫苗，在沒有開展實驗室檢驗對比的情況下，冒然下結(jié)論，認(rèn)為政府免費發(fā)放的疫苗，效果差，并將這些觀點在養(yǎng)殖場中散播，一些養(yǎng)殖戶信以為真，不用免費發(fā)放的政府苗，轉(zhuǎn)而尋求和購買市場銷售的疫苗，導(dǎo)致政府統(tǒng)購苗的大量浪費，增加了養(yǎng)殖成本，降低了養(yǎng)殖效益。為此，本試驗選擇（O）型口蹄疫政府統(tǒng)購苗和當(dāng)?shù)匾?guī)模化豬場使用較多的自購商品苗進行對比試驗，分析兩者的免疫效果，從而客觀公正的評價（O）型口蹄疫政府統(tǒng)購疫苗的免疫效果，為廣大養(yǎng)殖戶選擇口蹄疫疫苗提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗時間與地點本試驗于2014年4-7月在陜西省漢中市勉縣良種場和勉縣黑河豬場同時進行。

1.2試驗材料

1.2.1試驗疫苗豬口蹄疫O型滅活苗（O/MYA98/ XJ/2010株+O/GX/09-7株），為陜西省口蹄疫強制免疫政府統(tǒng)購苗，生產(chǎn)批號：1402004，規(guī)格：100 mL/瓶；豬口蹄疫O型滅活苗（O/MYA98/BY/2010株），由中農(nóng)威特生物科技股份有限公司生產(chǎn)，為自購市場高效商品苗，生產(chǎn)批號：H140209J，規(guī)格：100 mL/瓶。

1.2.2試劑口蹄疫O型間接血凝抗體檢測試劑盒，購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，批號：2014052304。

1.3儀器單道、8道微量移液器，均購自德國Brand公司；高速離心機、微量振蕩器、96孔U型聚乙烯反應(yīng)板。

1.4試驗設(shè)計

1.4.1預(yù)試驗為降低母源抗體過高對免疫抗體的影響，以及母源抗體過低導(dǎo)致豬群處于易感染狀態(tài)，在試驗前，項目組對勉縣良種場和黑河豬場兩個場進行了母源抗體檢測。選擇母源抗體處于24～25的仔豬進行試驗。分別對30、40、50日齡和60日齡的仔豬進行了檢測，40日齡的平均抗體效價為24.0，抗體陽性率為60%，符合試驗條件。

1.4.2試驗動物與分組在勉縣良種場和勉縣黑河豬場各選擇4窩體質(zhì)健康、體重接近的仔豬，隨機分成4組，每組10頭，具體分組見表1。

1.4.3免疫注射仔豬40日齡進行首免，首免30 d后進行二免，免疫劑量參照表1。

1.4.4采樣次數(shù)與時間試驗設(shè)計各場采血4次，首次采血在首免當(dāng)天；第2次采血在首免后30 d，第3次和第4次采血分別在二免后30 d和60 d。

1.4.5結(jié)果判定正向間接血凝試驗（IHA）按試劑盒說明書進行操作。檢測結(jié)果按農(nóng)業(yè)部[農(nóng)醫(yī)發(fā)（2012）2號]文件要求判定，判定標(biāo)準(zhǔn)：其有效抗體效價≥1∶32（第5孔）為免疫合格。

1.4.6飼養(yǎng)管理試驗豬場試驗用豬各組單獨飼養(yǎng)，與其他同齡豬群同舍飼養(yǎng)，按照日常飼養(yǎng)管理操作規(guī)程飼養(yǎng)。

2　結(jié)果與分析

試驗結(jié)果統(tǒng)計兩場各組口蹄疫免疫抗體檢測合格率結(jié)果統(tǒng)計見表2。

3　結(jié)果分析

3.1勉縣良種場免疫抗體合格率分析見圖1。

3.1.1同種疫苗不同劑量對比由圖1可以看出，無論是政府苗還是自購苗，加大免疫劑量的試驗二組免疫抗體合格率明顯優(yōu)于試驗一組，尤其是政府苗一組和二組差異較大。加大免疫劑量的政府苗二組首免后3次檢測，免疫抗體合格率均高于政府苗一組，且在二免后30 d合格率超過70%（農(nóng)業(yè)部免疫抗體合格標(biāo)準(zhǔn)），并且可以長時間的保持較高抗體合格率，免疫效果明顯優(yōu)于一組，即政府苗劑量加大優(yōu)勢明顯；自購苗首免后30 d，兩組抗體合格率一致，都為50%，二免后30 d和60 d，兩組免疫抗體合格率都在80%以上，且兩組數(shù)據(jù)差距不明顯，即自購疫苗劑量加大優(yōu)勢不明顯。

3.1.2同種疫苗免疫次數(shù)對比由圖1可以看出，無論是政府苗還是自購苗，2次免疫后，免疫抗體合格率明顯高于1次免疫，且能保持在較高水平。4個組在首免后30 d，免疫抗體合格率均未達到70%，均不能對試驗豬群形成有效的保護。二免后30 d除政府苗一組外，其余各組免疫抗體合格率均超過了70%，二免后60 d各組免疫抗體合格率都超過了70%，即無論是政府苗還是自購苗都需要2次加強免疫，才能保證豬只長時間保持較高的抗體合格率。

3.1.3不同種疫苗對比由圖1可以看出，首免后3次檢測，政府苗一組免疫抗體合格率明顯低于自購苗一組。說明在標(biāo)準(zhǔn)劑量免疫情況下，自購苗的免疫效果要好于政府苗；首免后30天政府苗二組免疫抗體合格率為60%，自購苗二組為50%，都沒有達到標(biāo)準(zhǔn)，兩者相差不大。二免后30 d和60 d時，免疫抗體合格率都在90%以上。說明在加大劑量免疫情況下，二者免疫效果沒有明顯差異。

3.2勉縣黑河豬場免疫抗體合格率分析見圖2。

圖1　良種場各試驗組口蹄疫免疫抗體合格率比較

圖2　黑河豬場各試驗組口蹄疫免疫抗體合格率比較

3.2.1同種疫苗不同劑量對比由圖2可以看出，無論是政府苗還是自購苗，加大免疫劑量的試驗二組免疫抗體合格率明顯優(yōu)于試驗一組，這與勉縣良種場的試驗結(jié)論相一致。加大免疫劑量的政府苗二組首免后3次檢測，免疫抗體合格率除二免后60天外均高于政府苗一組，且在二免后30 d合格率均超過70%，并且可以長時間的保持較高抗體合格率，免疫效果明顯優(yōu)于政府苗一組，即政府苗劑量加大優(yōu)勢明顯；自購苗首免后30 d，加大劑量的二組抗體合格率迅速上升到100%，并且保持高位，直到二免后60 d才下降為80%。而標(biāo)準(zhǔn)計量的自購苗一組首免后30 d，免疫抗體合格率迅速下降到50%，下降幅度達30%，這可能是因為一組試驗豬群母源抗體過高，對疫苗免疫應(yīng)答產(chǎn)生了負(fù)面影響，二免后30 d，抗體合格率又迅速上升到100%，二免后60 d下降到70%。排除母源抗體的干擾，自購苗兩組在二免后30、60 d，都能保持較高的免疫抗體水平，豬群免疫抗體合格率均能達到農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)，說明自購疫苗加大劑量免疫優(yōu)勢不明顯。

3.2.2同種疫苗免疫次數(shù)對比由圖2可以看出，無論是政府苗還是自購苗，二次免疫后，抗體合格率明顯高于一次免疫，且能保持在較高水平。4個組在首免后30 d，除政府苗二組和自購苗二組免疫抗體合格率達到70%外，其余兩組均未達到70%。二免后30 d、60 d各組免疫抗體合格率均超過了70%，即無論是政府苗還是自購苗都需要二次加強免疫，才能保證豬只長時間保持較高的抗體水平。

3.2.3不同種疫苗對比由圖2可以看出，政府苗一組和自購苗一組對比：首免后30 d時，兩組都沒達到70%標(biāo)準(zhǔn)。二免后，政府苗抗體上升較慢，到60 d時，達到高峰，而自購苗二免后抗體上升較快，二免后30 d就達到高峰，到60 d時，已下降至70%。政府苗二組和自購苗二組對比：首免后30 d，兩組都達到農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)，自購苗抗體升高很快，達到100%，二免后30 d和60 d，兩組抗體合格率均超過了70%，且相差不大。

3.3兩場試驗結(jié)果對比通過對兩場試驗結(jié)果的分析，兩場試驗結(jié)果基本一致，即無論是政府苗還是自購苗，都需要進行二次免疫，才能有效發(fā)揮疫苗免疫的作用；政府苗加大劑量免疫效果明顯高于標(biāo)準(zhǔn)劑量，自購苗加大劑量與標(biāo)準(zhǔn)劑量免疫效果差異不大；政府苗加大劑量進行二次免疫，其免疫效果和自購苗二次免疫效果差異不大，都能對豬群形成有效的保護。

4　討論

4.1試驗結(jié)果表明，口蹄疫政府統(tǒng)購苗和市場高效苗都需要進行二次免疫，二次免疫后，豬群可以保持較高的抗體水平，這與魏孔福等[1]的試驗結(jié)果基本一致。首次免疫后，由于機體免疫應(yīng)答潛伏期較長，再加上母源抗體的影響，疫苗不能有效刺激機體迅速產(chǎn)生較高的抗體。首免后30 d二免，機體再次免疫應(yīng)答潛伏期顯著縮短，同時記憶B細(xì)胞快速大量增殖，產(chǎn)生大量的抗體。

4.2政府苗加大劑量免疫效果明顯優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)劑量，標(biāo)準(zhǔn)劑量免疫不能迅速對豬群形成有效保護，需要加大劑量免疫；自購苗加大劑量免疫效果和標(biāo)準(zhǔn)劑量差異不大，不需要加大劑量免疫。分析原因，可能是由于兩種疫苗中病毒含量不同，自購高效商品苗的病毒含量高于政府統(tǒng)購苗，標(biāo)準(zhǔn)劑量免疫就能有效刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。

4.3首免后30 d，有的試驗組免疫抗體合格率不升反將，分析原因主要是受該組母源抗體水平的影響。據(jù)報道，母源抗體可以從細(xì)胞免疫和體液免疫2個方面對疫苗免疫產(chǎn)生干擾[2]，其作用機理主要是加強抗原物質(zhì)的清除，對弱毒疫苗起中和作用、母源抗體對特異性抗原位點的“封閉”而阻止抗原位點與機體免疫相關(guān)細(xì)胞上的抗原受體結(jié)合等，從而導(dǎo)致免疫系統(tǒng)不能對抗原物質(zhì)產(chǎn)生反應(yīng)。盡管本試驗在試驗開展前，做了預(yù)試驗，目的是確定首免日齡，盡量排除母源抗體的干擾作用。但是在實際試驗中，黑河豬場自購苗一組母源抗體水平較高，母源抗體合格率達到80%，首免30 d后免疫抗體合格率迅速下降到50%。因此，在豬O型口蹄疫免疫中，應(yīng)重視母源抗體對疫苗免疫的干擾作用，選擇合適的時機進行疫苗免疫。

4.4試驗也觀察到，各試驗小組中都出現(xiàn)接種同一疫苗，免疫操作和劑量相同，抗體檢測方法和試劑相同，免疫前母源抗體水平一致，同群飼養(yǎng)的情況下，不同豬只產(chǎn)生的抗體水平有高有低，差異較大，說明個體差異對疫苗免疫效果也有較大影響。

參考文獻：

[1]魏孔福，祁淑蕓，林密，等.O型口蹄疫疫苗免疫?？贵w消長動態(tài)的LPB-ELISA檢測[J] .中國獸醫(yī)科學(xué)，2007，37（9）：787-790.

[2]高世杰，竇永喜，程愛華，等.母源抗體對豬口蹄疫疫苗免疫應(yīng)答的影響[J].中國獸醫(yī)學(xué)報，2011，31（1）：45-48.

中圖分類號：S852.65+1

文獻標(biāo)志碼：B

文章編號：0529-6005（2016）05-0047-03

收稿日期：2015-10-15

作者簡介：高權(quán)利（1962-），男，高級畜牧師，本科，主要從事動物疫病防疫工作，E-mail：814222659@qq.com