穆素雨，柳東陽(yáng)，白淵哲，楊萬(wàn)云，師玉露，李　爽，寧夢(mèng)夏，楊雪峰（河南科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，河南新鄉(xiāng)453003）

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氯甲酚納米乳消毒劑的消毒效果觀察

穆素雨，柳東陽(yáng)，白淵哲，楊萬(wàn)云，師玉露，李爽，寧夢(mèng)夏，楊雪峰
（河南科技學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，河南新鄉(xiāng)453003）

摘要：利用物體表面現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)方法，觀察了氯甲酚納米乳消毒劑的消毒效果。結(jié)果表明，氯甲酚納米乳消毒劑的消毒效果隨消毒劑濃度的升高和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)。當(dāng)高于0.1%氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)衛(wèi)生間水泥地面的自然菌作用5 min以上時(shí)，殺滅對(duì)數(shù)值均大于1，消毒合格；0.5%氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)兔舍地面的自然菌作用10 min以上，高于1.0%氯甲酚納米乳消毒劑作用5 min以上時(shí)，殺滅對(duì)數(shù)值均大于1，消毒合格。結(jié)果提示，氯甲酚納米乳消毒劑的消毒效果良好，值得在畜牧獸醫(yī)實(shí)踐中推廣應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：氯甲酚；納米乳；消毒劑；物體表面現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)

氯甲酚（Chlorocresol）是一種酚類衍生物消毒劑，不但能損害菌體細(xì)胞膜，使菌體內(nèi)含物逸出和蛋白質(zhì)變性，呈殺菌作用，而且還可通過(guò)抑制細(xì)菌脫氫酶和氧化酶等酶的活性，呈現(xiàn)抑菌作用[1]。氯甲酚對(duì)細(xì)菌繁殖體、真菌和結(jié)核桿菌均有較強(qiáng)的殺滅作用[2]，主要適用于畜禽舍、車(chē)輛、器物及環(huán)境等消毒。實(shí)踐中，因氯甲酚具有難溶于水和酚臭味重的缺點(diǎn)而限制了其作為消毒劑的開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用。為此，楊雪峰等利用納米乳藥物載體的優(yōu)勢(shì)[3-5]，研制出了一種水溶性好、酚臭味弱、消毒作用強(qiáng)、生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單的新型環(huán)境消毒劑-氯甲酚納米乳消毒劑，并就其制備方法申請(qǐng)了國(guó)家發(fā)明專利。本試驗(yàn)利用物體表面現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)對(duì)氯甲酚納米乳消毒劑的消毒效果進(jìn)行了觀察，以為其在畜牧獸醫(yī)實(shí)踐中的應(yīng)用提供參考。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)指標(biāo)菌金黃色葡萄球菌ATCC6538，由河南科技學(xué)院藥理實(shí)驗(yàn)室保存并提供。

1.2主要試劑氯甲酚（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20121115）；營(yíng)養(yǎng)瓊脂（青島市高科園海博生酪物技術(shù)有限公司，批號(hào)20130319）；MHB培養(yǎng)基（北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司，批號(hào)：20090102）；聚氧乙烯蓖麻油-40（EL-40，藥用級(jí)，天津市浩元精細(xì)化工有限公司）；肉豆蔻酸異丙酯（IPM，藥用級(jí)，浙江物美化學(xué)品有限公司）；吐溫-80（天津市瑞金特化學(xué)品有限公司）；硫代硫酸鈉（焦堿集團(tuán)化學(xué)試劑廠）；卵磷脂（天津市博迪化工有限公司）等。

1.3氯甲酚納米乳消毒劑的制備制備方法如下：（1）分別稱取適量的氯甲酚、冰醋酸、EL-40、IPM和純化水，備用；（2）室溫下，先將冰醋酸、EL-40和IPM混勻，然后緩慢加入純化水，并不停攪拌，以形成澄明均一的納米乳藥物載體；（3）將處方量的氯甲酚加入上述納米乳藥物載體中溶解完全即可。使用時(shí)，利用純化水稀釋成所需濃度。

1.4試驗(yàn)方法

1.4.1中和劑篩選試驗(yàn)以金黃色葡萄球菌ATCC6538為試驗(yàn)指標(biāo)菌，以3.0%吐溫-80 PBS、0.5%硫代硫酸鈉PBS、1.0%吐溫-80+1.0%卵磷脂+0.5%硫代硫酸鈉PBS為擬篩選中和劑，試驗(yàn)分8組，見(jiàn)表1，并依據(jù)文獻(xiàn)[6]中的懸液定量殺菌試驗(yàn)程序進(jìn)行。結(jié)果判定：第1、2組不長(zhǎng)菌或菌數(shù)較少，第3、4、5組的組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過(guò)15%，第6、7、8組不長(zhǎng)菌。試驗(yàn)重復(fù)3次結(jié)果一致，表明所選中和劑及其濃度適宜。

1.4.2物體表面現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)分別選擇河南科技學(xué)院實(shí)驗(yàn)樓的衛(wèi)生間水泥地面和實(shí)驗(yàn)中心兔舍地面進(jìn)行物體表面現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)，具體試驗(yàn)步驟如下：（1）在地面上，標(biāo)定多個(gè)相鄰的面積各為5.0 cm×5.0 cm的區(qū)塊，1個(gè)作為消毒前共用采樣對(duì)照區(qū)，其余作為消毒后采樣試驗(yàn)區(qū)；（2）在采樣對(duì)照區(qū)，將無(wú)菌棉拭在含10 mL PBS稀釋液試管中浸濕并擠干后，對(duì)對(duì)照區(qū)塊涂抹采樣，作為陽(yáng)性對(duì)照組樣本；（3）在消毒后采樣試驗(yàn)區(qū)，分別用不同濃度的氯甲酚納米乳消毒劑消毒作用至不同設(shè)定時(shí)間，然后將無(wú)菌棉拭在含10 mL中和劑溶液試管中浸濕并擠干，對(duì)各個(gè)消毒區(qū)塊涂抹采樣，無(wú)菌操作將棉拭采樣端剪入原中和劑溶液試管內(nèi)，以作為各試驗(yàn)組樣本；（4）將陽(yáng)性對(duì)照組和試驗(yàn)組樣本，分別接種培養(yǎng)后觀察，并記錄最終結(jié)果，按照公式：殺滅對(duì)數(shù)值=對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值-試驗(yàn)組活菌濃度對(duì)數(shù)值，計(jì)算平均殺滅對(duì)數(shù)值。同時(shí)將本次試驗(yàn)未用完的同批次中和劑溶液、稀釋液、棉拭、培養(yǎng)基等分別設(shè)為陰性對(duì)照。最后，參考文獻(xiàn)[6]的評(píng)價(jià)規(guī)定，當(dāng)平均殺滅對(duì)數(shù)值≥1.00，判定為消毒合格。

2.2物體表面現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)衛(wèi)生間水泥地面的現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)結(jié)果氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)衛(wèi)生間水泥地面的現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。隨著氯甲酚納米乳消毒劑的濃度升高和作用時(shí)間延長(zhǎng)，其對(duì)衛(wèi)生間水泥地面的消毒效果呈逐漸增強(qiáng)趨勢(shì)。高于0.1%氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)自然菌作用5 min以上時(shí)，殺滅對(duì)數(shù)值均大于1，消毒合格，其中1.0%和5.0%氯甲酚納米乳消毒劑分別作用10 min以上時(shí)，能全部殺滅衛(wèi)生間水泥地面上的自然菌。結(jié)果說(shuō)明，氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)衛(wèi)生間水泥地面的現(xiàn)場(chǎng)消毒效果好。

表1　中和劑篩選試驗(yàn)分組

2　結(jié)果與分析

2.1中和劑篩選試驗(yàn)結(jié)果3.0%吐溫-80 PBS、0.5%硫代硫酸鈉PBS、1.0%吐溫-80+1.0%卵磷脂+0.5%硫代硫酸鈉PBS三種中和劑對(duì)金黃色葡萄球菌在第3、4、5組的組間菌落數(shù)誤差率見(jiàn)表2。由表2可知，以1%吐溫-80+1%卵磷脂+0.5%硫代硫酸鈉PBS作為中和劑較為適宜。

表2　氯甲酚納米乳消毒劑的中和劑篩選試驗(yàn)

表3　氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)衛(wèi)生間水泥地面的現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)

2.2.2氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)兔舍地面的現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)結(jié)果氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)兔舍地面的現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可知，氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)兔舍地面的消毒效果隨消毒劑濃度的升高和作用時(shí)間延長(zhǎng)而增強(qiáng)。0.5%氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)自然菌作用10 min以上，高于1.0%氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)自然菌作用5 min以上時(shí)，殺滅對(duì)數(shù)值均大于1，消毒合格，說(shuō)明氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)兔舍地面的現(xiàn)場(chǎng)消毒效果好。

表4　氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)兔舍地面的現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)

3　討論

納米乳是近年來(lái)研究較多的一種藥物載體，具有其他藥物載體所不可比擬的優(yōu)點(diǎn)：制備過(guò)程簡(jiǎn)單、緩釋，能增大難溶性藥物溶解度，能提高易水解藥物穩(wěn)定性和藥物生物利用度，可防止藥物酶解，易于保存，能掩蓋一些藥物的不良?xì)馕禰3]等，因此它被廣泛認(rèn)為是一種極具發(fā)展?jié)摿Φ乃幬镙d體，也使各種難溶性藥物的納米乳劑型研制成為藥劑學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。目前，已有關(guān)于納米乳化技術(shù)應(yīng)用于消毒劑領(lǐng)域的研究報(bào)道。魏坤等[8]研制出一種復(fù)方納米銀抗菌乳液。用該消毒液原液擦拭消毒并作用2 min，對(duì)手上自然菌平均殺滅率達(dá)到97%以上，表明其具有良好的消毒效果。魏秋華等[9]研制出一種皮膚消毒納米乳液，其殺菌效果良好，且在降低醋酸氯己定含量情況下，其殺菌效果仍明顯優(yōu)于有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的含氯己定消毒劑。楊雪峰等以納米乳為藥物載體，以氯甲酚為模型藥物，研制出了水包油型氯甲酚納米乳消毒劑[7]?，F(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)高于0.1%氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)衛(wèi)生間水泥地面的自然菌作用5 min以上時(shí)，殺滅對(duì)數(shù)值均大于1，消毒合格；當(dāng)0.5%氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)兔舍地面的自然菌作用10 min以上，高于1.0%氯甲酚納米乳消毒劑對(duì)兔舍地面的自然菌作用5 min以上時(shí)，殺滅對(duì)數(shù)值均大于1，消毒合格。結(jié)果說(shuō)明，氯甲酚納米乳消毒劑的消毒效果良好，值得在畜牧獸醫(yī)實(shí)踐中推廣應(yīng)用。在臨床應(yīng)用中，當(dāng)消毒污染嚴(yán)重的物體表面或排泄物時(shí)，可以適當(dāng)提高消毒劑的濃度和作用時(shí)間，以保證消毒效果。

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Disinfection efficacy of chlorocresol nanoemulsion disinfectant

MU Su-yu，LIU Dong-yang，BAI Yuan-zhe，YANG Wan-yun，SHI Yu-lu，LI Shuang，NING Meng-xia，YANG Xue-feng
（College of Animal Science，Henan Institute of Science and Technology，Xinxiang 453003，China）

Abstract：Disinfection efficacy of chlorocresol nanoemulsion disinfectant was studied by the on-site disinfection test method of object surface. The results showed that disinfection efficacy was enhanced with increasing of the nanoemulsion disinfectant con?centration and extending of the action time . When the concentration of chlorocresol nanoemulsion disinfectant was higher than 0.1% and the disinfectant acted for more than 5 min against natural bacteria on toilet cement floor，sterilization log values were all higher than 1 and sterilizing effects were qualified.When 0.5% disinfectant acted for more than 10 min against natural bacteria on the ground surface of rabbit hutch，and higher than 1.0% disinfectant acted for more than 5 min，the sterilization log values were al?so all higher than 1 and sterilizing effects were also qualified.These results suggest disinfection efficacy of chlorocresol nanoemul?sion disinfectant is strong and it is worth of popularization and application in animal husbandry and veterinary practice.

Key words：chlorocresol；nanoemulsion；disinfectant；on-site disinfection test of object surface

中圖分類號(hào)：S859.79+9.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：0529-6005（2016）05-0035-03

收稿日期：2015-03-02

基金項(xiàng)目：河南科技學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（2014CX040）；河南科技學(xué)院“標(biāo)志性創(chuàng)新工程”計(jì)劃經(jīng)費(fèi)資助項(xiàng)目（2015ZD09）

作者簡(jiǎn)介：穆素雨（1995-），男，本科生，就讀于動(dòng)植物檢疫專業(yè)，E-mail：693361358@qq.com

通訊作者：楊雪峰，E-mail：yangxuefeng2003@126.com

Corresponding author：YANG Xue-feng