倫巍巍，張曦，朱建坡，程國梅鄭州大學第三附屬醫(yī)院婦產科，河南鄭州　450052

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早發(fā)型重度子癇前期患者胎盤組織M-CSF、CRH和HO-2表達的研究

倫巍巍，張曦，朱建坡，程國梅
鄭州大學第三附屬醫(yī)院婦產科，河南鄭州450052

［摘要］目的研究早發(fā)型重度子癇前期患者胎盤組織中巨噬細胞集落刺激因子（MCSF）、促腎上腺皮質激素釋放激素（CRH）、血紅素氧化酶-2（HO-2）的表達，探討它們在早發(fā)型重度子癇前期發(fā)病機制中的作用。方法整群選擇選自2013年9月—2014年8月在鄭州大學第三附屬醫(yī)院住院的孕婦73例，年齡22～37歲，孕周32～37周。早發(fā)型重度子癇前期患者25例，晚發(fā)型重度子癇前期患者23例，正常妊娠對照組25例進行實驗對照研究，應用免疫組化方法研究M-CSF、CRH、HO-2的表達情況。結果①三期組孕婦之間年齡、終止妊娠孕周比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）（見表1）。②與正常妊娠組比較，早發(fā)型及晚發(fā)型重度子癇前期組M-CSF表達水平均明顯升高；早發(fā)型組M-CSF表達水平明顯高于晚發(fā)型組。③與正常妊娠組比較，早發(fā)型及晚發(fā)型組CRH表達水平均明顯升高；早發(fā)型組CRH表達水平明顯高于晚發(fā)型組。④與正常妊娠組比較，早發(fā)型及晚發(fā)型組HO-2表達水平均明顯降低；早發(fā)型組HO-2表達水平低于晚發(fā)型組，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。結論胎盤中MCSF、CRH的表達增加和HO-2表達降低可能與早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)病有關。

［關鍵詞］重度子癇前期；巨噬細胞集落刺激因子；促腎上腺皮質激素釋放激素；血紅素氧化酶-2；胎盤

早發(fā)型重度子痢前期是指發(fā)生于孕34周以前的重度子癇前期［1］，多伴有胎兒生長受限和很高的醫(yī)源性早產率，圍生兒死亡率高達13.3％［2］。早發(fā)型重度子癇前期因發(fā)病早，病程進展快，常伴有較多并發(fā)癥合并癥，較早發(fā)生多臟器功能受損，嚴重威脅孕婦和胎兒安危，有較高的孕產婦和圍生兒病死率。因此，尋找早發(fā)型重度子癇前期的病因，如何從病因上著手控制并減少早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)生是產科醫(yī)生面臨的難題，現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

在患者知情同意的前提下，整群選取2013年9月—2014年8月在鄭州大學第三附屬醫(yī)院住院部的孕婦73例，年齡22～37歲，孕周32～37周。共分為3組，其中早發(fā)型重度子癇前期患者25例；晚發(fā)型重度子癇前期23例；正常妊娠對照組（無高血壓及妊高癥家族史，因計劃生育、胎膜早破、早產等原因要求剖宮產的患者）25例，正常妊娠組與早發(fā)型及晚發(fā)型重度子癇前期組比較年齡、孕周均差異無統(tǒng)計學意義（表1），該研究經鄭大三附院倫理委員會批準，經孕婦口頭同意。重度子癇前期以發(fā)病孕周＜34周為早發(fā)型，≥34周為晚發(fā)型，選擇病例為農村無業(yè)患者。重度子癇前期的診斷依據茍文麗、謝幸主編的《婦產科學》第八版［3］的診斷標準。

1.2研究方法

標本采集：所有標本均采集自剖宮產術中胎盤娩出后5 min內的胎盤取母面中央絨毛組織1 cm×1 cm× 1 cm，中性福爾馬林溶液中固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋。

1.3M-CSF、CRH和HO-2的檢測

包埋后的蠟塊經切片、常規(guī)HE染色后做免疫組化染色。試劑盒分別購于中山公司、博士德公司及博奧森公司，測定其平均灰度值并應用SPSS17.0分析軟件分析。

1.4統(tǒng)計方法

2　結果

2.13組一般資料對比

正常妊娠組與子癇前期組，及早發(fā)型與晚發(fā)型重度子癇前期組比較年齡、終止妊娠孕周均差異無統(tǒng)計學意義，P＞0.05（表1），且所有研究對象均為剖宮產分娩。

表1　正常對照組和早發(fā)型及晚發(fā)型重度子癇前期組年齡、終止妊娠孕周比較（±s）

表1　正常對照組和早發(fā)型及晚發(fā)型重度子癇前期組年齡、終止妊娠孕周比較（±s）

組別　年齡（歲）　分娩孕周（周）正常妊娠組（n=25）早發(fā)型組（n=25）晚發(fā)型組（n=23）F值P值28.71±7.20 29.25±4.16 29.64±4.27 0.098 0.906 34.96±2.17 34.25±1.93 35.23±1.06 1.084 0.347

2.23組研究對象胎盤組織中M-CSF的表達

M-CSF的陽性顆粒為棕黃色，主要表達于絨毛滋養(yǎng)層細胞、絨毛間質細胞及蛻膜細胞，早發(fā)型和晚發(fā)型重度子癇前期組M-CSF表達水平明顯高于正常妊娠組（P＜0.05），且早發(fā)型組高于晚發(fā)型組（P＜0.05），差異均有統(tǒng)計學意義，見表2。

表2　3組孕婦胎盤組織M-CSF表達水平的定量比較（±s）

表2　3組孕婦胎盤組織M-CSF表達水平的定量比較（±s）

注：△與正常妊娠組比較P＜0.05；*與早發(fā)型重度子癇前期組比較P＜0.05。

組別平均灰度正常妊娠組（n=25）早發(fā)型重度子癇前期組（n=25）晚發(fā)型重度子癇前期組（n=23）F值P值（87.62±10.83）* （100.60±14.05）△（96.28±12.27）△*14.314 0.001

2.33組孕婦胎盤組織中CRH的表達

CRH主要表達于胎盤絨毛合體滋養(yǎng)層細胞和胎盤小葉血管內皮細胞的胞漿和胞膜，早發(fā)型和晚發(fā)型重度子癇前期組CRH表達水平明顯高于正常妊娠組（P＜0.05），且早發(fā)型組高于晚發(fā)型組（P＜0.05），差異有統(tǒng)計學意義，見表3。

表3　3組孕婦胎盤組織CRH表達水平的定量比較（±s）

表3　3組孕婦胎盤組織CRH表達水平的定量比較（±s）

注：△與正常妊娠組比較P＜0.05；*與早發(fā)型重度子癇前期組比較P＜0.05。

組別平均灰度正常妊娠組（n=25）早發(fā)型重度子癇前期組（n=25）晚發(fā)型重度子癇前期組（n=23）F值P值（86.36±10.37）*（95.18±12.23）△（90.82±9.88）△*10.716 0.001

2.43組孕婦胎盤組織中HO-2的表達

HO-2主要表達于合體滋養(yǎng)細胞、細胞滋養(yǎng)細胞以及終末絨毛毛細血管內皮細胞胞漿和胞膜，早發(fā)型和晚發(fā)型重度子癇前期組HO-2表達水平明顯低于正常妊娠組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；早發(fā)型組低于晚發(fā)型組，但二者比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表4。

表4　3組孕婦胎盤組織HO-2表達水平的定量比較（±s）

表4　3組孕婦胎盤組織HO-2表達水平的定量比較（±s）

注：△與正常妊娠組比較，P＜0.05。

例數平均灰度正常妊娠組（n=25）早發(fā)型重度子癇前期組（n=25）晚發(fā)型重度子癇前期組（n=23）F值P值86.74±8.25 （81.34±10.67）△（82.78±8.12）△4.501 0.013

3　討論

早發(fā)型重度子癇前期由于其發(fā)病早、孕周小、程度重，因此母兒圍生結局較晚發(fā)型差［4］。相對早發(fā)型重度子癇前期，整個晚發(fā)型重度子癇前期的發(fā)生過程，看來更像是機體與疾病之間一個長期耐受最終失衡的溫和過程。另外，近年還有研究認為早發(fā)型重度子癇前期孕婦相對于正常孕婦胎盤組織中存在差異表達基因，并參與免疫反應、氧化應激反應和炎癥反應等病理機制，與早發(fā)型重度子癇前期的發(fā)生密切相關［5］，并且還與遠期心血管病發(fā)生相關［6］。研究認為早發(fā)型及晚發(fā)型重度子癇前期的發(fā)病機理不同，相對于早發(fā)型的“胎盤淺著床”，晚發(fā)型是“母體因素”導致的疾病，孕婦有著共同的危險因素如肥胖、糖尿病或慢性高血壓等，而胎盤是正常的［7］。

孕期蛻膜基質細胞和滋養(yǎng)細胞產生大量的MCSF，蛻膜中的其它細胞如CD16、CD56等細胞也產生M-CSF［6］。胎盤滋養(yǎng)細胞表達M-CSF以及對胎盤滋養(yǎng)細胞的作用是妊娠免疫耐受建立與維持的重要機制。重度子癇前期患者的胎盤中細胞滋養(yǎng)細胞膨脹，并在短期內大批轉化為合體滋養(yǎng)細胞，分泌大量的M-CSF；并且炎性細胞浸潤、激活而產生M-CSF，M-CSF又可通過其受體引起內皮細胞、單核巨噬細胞釋放更多的M -CSF，導致重度子癇前期患者M-CSF升高［8］。

CRH的擴血管作用使胎兒的氧氣和營養(yǎng)物質供應增加，有利于緩解胎兒的缺氧狀況，以保證胎兒營養(yǎng)物質的供應，這可能為胎兒缺氧的生理性保護作用。子癇前期時胎盤血管痙攣，胎盤缺血使胎兒缺血缺氧，胎兒的這一生理性保護作用促使CRH表達增［9］。Karteris等研究發(fā)現CRH可誘導內皮型一氧化氮合酶（eNOS）和環(huán)磷鳥苷（cGMP）的表達，通過激活NO/cGMP途徑而調節(jié)胎兒胎盤循環(huán)。

內源性血紅素氧化酶（H0）是一種血紅素降解的起始酶和限速酶，HO-2在胎盤分布豐富，主要參與血管重鑄，維持胎盤血流動力學的穩(wěn)定，維持胎盤氧化和抗氧化平衡狀態(tài)，保證正常的胎盤形成［10］。子癇前期患者胎盤組織中HO-2生成減少，胎盤滋養(yǎng)細胞浸潤能力受到影響，引起胎盤著床淺，螺旋動脈的重鑄受損，血小板黏附和聚集，造成胎盤缺血、缺氧；并且，HO-2的表達降低及缺氧又使HO-2的活性減弱，導致循環(huán)阻力升高并削弱了細胞的保護功能。Ekambaram等通過ELISA方法測定子癇前期患者臍血HO-2表達降低，與我們的研究結果一致［11］。

由于氧化應激使子癇前期患者胎盤組織單核-巨噬細胞及平滑肌細胞增生，分泌大量的M-CSF，而MCSF和M-CSFR結合后又促使單核細胞增殖和巨噬細胞分化，介導炎癥反應。HO-2分解血紅素產生CO，有研究認為低濃度的CO可以選擇性抑制LPS誘導的前炎癥因子TNF-α、IL-l8和巨噬細胞炎癥蛋白l8的表達，而TNF-α可誘導M-CSF的產生，子癇前期患者胎盤組織中HO-2表達降低，對TNF-α的抑制減弱，間接引起M-CSF升高。另外，HO-2表達減少，對自由基的清除能力降低，超氧陰離子增多，加劇了單核-巨噬細胞和平滑肌細胞的增生，也使M-CSF分泌增多，M-CSFR受體上調。

綜上所述，我們可以得出結論，M-CSF、HO-2和CRH通過胎盤血管重鑄障礙、血管內皮損傷及氧化應激等方面來參與子癇前期的發(fā)病過程，且三者相符相依相互影響，促進疾病的進一步發(fā)展，對于早發(fā)型重度子癇前期的預防我們也可以從以上幾點入手，爭取早日從病因上解決疾病的治療。

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Research on M-CSF，CRH and HO-2 Expressions of Placenta Tissues in Patients with Early Onset Severe Preeclampsia

LUN Wei-wei，ZHANG Xi，ZHU Jian-po，CHENG Guo-mei
Department of Obstetrics and Gynecology，The Third Affiliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou，Henan Province，450052 China

［Abstract］Objective To research the macrophage colony stimulating factor，corticotropin releasing hormone and heme oxygenase-2 expressions of placenta tissues in patients with early onset severe preeclampsia and discuss their effects in the early onset severe preeclampsia pathogenesis. Methods The delivery women whose ages were between 22 and 37 and gestational weeks were between 32 and 37 hospitalized in our hospital from September 2013 to August 2014 were selected，among them，25 cases were with early onset severe preeclampsia，23 cases were with late onset severe preeclampsia，25 cases with normal pregnancy were selected as the control group，and the M-CSF，CRH and HO-2 expressions were researched by the immunohistochemical method. Results（1）The differences in the age and terminated gestational week between the three groups had no statistical significance，P＞0.05（2）The M-CSF expression level obviously increased in the early and late onset severe preeclampsia groups compared with that in the control group；the M-CSF expression level in the early onset group was obviously higher than that in the late onset group.（3）The CRH expression level in the early and late onset groups obviously increased compared with that in the control group，the CRH expression level in the early onset group was obviously higher than that in the late onset group.（4）The HO-2 expression level in the early and late onset groups obviously decreased compared with that in the control group；the HO-2 expression level in the early onset group was lower than that in the late onset group，and the difference had no statistical significance，P＞0.05. Conclusion The increase of MCSF and CRH expressions and decrease of HO-2 expression may be correlated with the onset of early onset severe preeclampsia.

［Key words］Severe preeclampsia；Macrophage colony stimulating factor；Corticotropin releasing hormone；Heme oxygenase-2；Placenta

［中圖分類號］R5

［文獻標識碼］A

［文章編號］1674-0742（2016）05（b）-0081-03

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.14.081

［作者簡介］倫巍?。?981.9-），女，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：早發(fā)型重度子癇前期等相關婦產科臨床治療。

收稿日期：（2016-02-19）