黃 燚，劉 丹(.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 成都 6007；.四川大學(xué)華西醫(yī)院呼吸內(nèi)科，四川 成都 6004)

雅培ARCHITECT c16000全自動(dòng)生化分析儀血清指數(shù)在生化檢測(cè)中的應(yīng)用

黃 燚1，劉 丹2
(1.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 成都 610072；2.四川大學(xué)華西醫(yī)院呼吸內(nèi)科，四川 成都 610041)

目的 探討血清指數(shù)在辨別血清樣本溶血、黃疸和脂血等常見(jiàn)干擾中的作用。方法 收集臨床常規(guī)檢測(cè)的血清樣本1733例，經(jīng)肉眼辨別無(wú)溶血、黃疸和脂血，通過(guò)雅培ARCHITECT c16000全自動(dòng)生化分析，采用生理鹽水法檢測(cè)1733例樣本的溶血、黃疸和脂血的干擾指數(shù)。結(jié)果 在1733例經(jīng)肉眼未發(fā)現(xiàn)溶血、黃疸和脂血的血清樣本中，126例血清指數(shù)偏高。其中溶血50例，黃疸76例，未檢測(cè)出樣本脂血指數(shù)偏高。126例干擾樣本中，50例樣本的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、鎂(Mg2+)、二氧化碳(CO2)檢測(cè)受溶血影響，黃疸和脂血均未對(duì)肉眼辨別無(wú)干擾的樣本檢測(cè)產(chǎn)生影響。結(jié)論 通過(guò)全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清指數(shù)判定溶血、黃疸和脂血經(jīng)濟(jì)、高效，是生化檢測(cè)中有效的判定常見(jiàn)干擾的方法。

雅培；全自動(dòng)生化分析儀；血清指數(shù)；干擾

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)受多種因素影響，其中，溶血、黃疸和脂血樣本是檢測(cè)中常見(jiàn)的干擾因素，對(duì)檢測(cè)產(chǎn)生嚴(yán)重影響，干擾結(jié)果判讀。Romero等報(bào)道由溶血導(dǎo)致的樣本拒收占分析前不合格樣本的36.2%[1]，Jane等報(bào)道門診不合格樣本中，18.1%是由于溶血導(dǎo)致[2]。盡管近年來(lái)自動(dòng)化分析和臨床檢驗(yàn)技術(shù)不斷提高，檢測(cè)錯(cuò)誤仍在不斷發(fā)生。Plebani等研究表明68.2%的檢測(cè)錯(cuò)誤是由于分析前因素導(dǎo)致。影響檢驗(yàn)分析前因素眾多，不同患者的生理或病理狀態(tài)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果都會(huì)造成影響。另外，檢驗(yàn)樣本的采集和運(yùn)輸?shù)纫矔?huì)對(duì)檢測(cè)指標(biāo)產(chǎn)生不同的影響[3]。現(xiàn)有國(guó)內(nèi)臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)于樣本質(zhì)量的判斷主要還是依靠肉眼，其中最常見(jiàn)的即對(duì)于溶血、黃疸和脂血樣本的判斷。溶血、黃疸和脂血樣本對(duì)檢測(cè)結(jié)果會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重干擾[4]，肉眼判斷樣本質(zhì)量可以在很大程度上過(guò)濾有效信息并反饋給臨床，給臨床醫(yī)生對(duì)于檢驗(yàn)結(jié)果判讀提供幫助。然而，Glick等報(bào)道肉眼判斷血清溶血、黃疸和脂血結(jié)果是不可靠的[5]。在國(guó)內(nèi)大型醫(yī)院檢驗(yàn)樣本量逐年增加的背景下，肉眼判斷樣本質(zhì)量也會(huì)大大增加檢驗(yàn)工作者的工作量。因此，自動(dòng)化的、快速的對(duì)于血清干擾的判斷是臨床自動(dòng)化工作的趨勢(shì)。本研究利用全自動(dòng)生化分析儀自帶的血清指數(shù)，對(duì)1733例血清樣本進(jìn)行評(píng)估，并將血清指數(shù)的自動(dòng)檢測(cè)和實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng)(LIS)進(jìn)行關(guān)聯(lián)，通過(guò)雙向通訊自動(dòng)檢測(cè)樣本血清指數(shù)。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2016年5月在四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院申請(qǐng)的門診、住院和體檢常規(guī)生化樣本1733例，均為早晨空腹靜脈血。按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程采集于4.0 ml BD血清真空采血管(BD，F(xiàn)ranklin Lakes，NJ，USA)中，待樣本凝集后，3000 rpm離心5分鐘，離心后血清樣本經(jīng)生化檢驗(yàn)組工作人員經(jīng)過(guò)肉眼判定排除溶血、黃疸和脂血干擾。

1.2 方法 將肉眼判斷無(wú)干擾的血清樣本在雅培ARCHITECT c16000全自動(dòng)生化分析儀上利用生理鹽水法檢測(cè)血清指數(shù)。通過(guò)LIS自動(dòng)將待測(cè)血清樣本的檢測(cè)指令發(fā)送到生化分析儀，分別將5.3 μl血清與200 μl生理鹽水混合檢測(cè)，儀器通過(guò)檢測(cè)7個(gè)波長(zhǎng)的吸光度，利用自帶的計(jì)算公式求出血清指數(shù)。其中溶血指數(shù)的界值為0.3 Index，黃疸指數(shù)的界值為34.2 Index，脂血指數(shù)的界值為0.57 Index，血清指數(shù)的結(jié)果也可以用1+、2+、3+和4+表示，對(duì)應(yīng)關(guān)系如表1所示。

表1 血清溶血、黃疸和脂血指數(shù)檢測(cè)值的換算

血清指數(shù)與干擾樣本濃度的相關(guān)性：將洗滌紅細(xì)胞加生理鹽水稀釋，反復(fù)凍融離心取上清，制作血紅蛋白溶液，利用XN1000血常規(guī)流水線(Sysmex，Kobe，Japan)檢測(cè)血紅蛋白濃度，收集混合嚴(yán)重黃疸和嚴(yán)重脂血樣本，利用ABBOTT c16000生化儀檢測(cè)血清總膽紅素(TBIL)水平。收集正常對(duì)照混合血清，按不同比例混合血紅蛋白溶血和黃疸樣本。計(jì)算血清指數(shù)和血紅蛋白和TBIL濃度的相關(guān)性，脂血指數(shù)即通過(guò)生化儀直接檢測(cè)樣本濁度。

2 結(jié)果

2.1 血清樣本的一般情況 在1733例肉眼判斷無(wú)干擾的血清樣本中，通過(guò)血清指數(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，127例樣本的血清指數(shù)增高，其中溶血50例，黃疸76例，未檢測(cè)出樣本脂血指數(shù)偏高。溶血和黃疸樣本分別占總樣本量的2.89%和4.39%；在所有存在干擾的樣本中，溶血樣本占39.68%，黃疸占60.32%。

2.2 血清指數(shù)的相關(guān)性驗(yàn)證 將血紅蛋白溶血檢測(cè)后稀釋到7.2 g/L作為原液，嚴(yán)重黃疸血清TBIL濃度為251.7 μmol/L，嚴(yán)重脂血血清甘油三酯濃度為10.29 mmol/L，將三種干擾樣本按不同比例稀釋，分別檢測(cè)不同濃度干擾樣本的溶血指數(shù)、黃疸指數(shù)和脂血指數(shù)，見(jiàn)表2。利用回歸方程分別計(jì)算樣本濃度和血清指數(shù)的相關(guān)性后顯示，溶血指數(shù)和血紅蛋白濃度的相關(guān)系數(shù)r=0.9991，黃疸指數(shù)和TBIL濃度的相關(guān)系數(shù)r=1.0000，脂血指數(shù)和甘油三酯濃度的相關(guān)系數(shù)r=0.9997，見(jiàn)圖1。分析黃疸指數(shù)和黃疸樣本的血清TBIL和直接膽紅素(DBIL)水平可見(jiàn)，103例肉眼可見(jiàn)和肉眼未見(jiàn)的黃疸樣本血清TBIL、DBIL和黃疸指數(shù)的相關(guān)系數(shù)r=0.9892；r=0.9827，見(jiàn)圖2。

表2 不同濃度干擾樣本中各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果

2.3 干擾與生化檢測(cè)結(jié)果的關(guān)系 本實(shí)驗(yàn)室采用中生雅培試劑，在常用生化檢測(cè)項(xiàng)目中，不對(duì)檢測(cè)產(chǎn)生明顯影響的干擾物濃度，見(jiàn)表2。溶血樣本對(duì)血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、TBIL、DBIL、Mg、CO2檢測(cè)產(chǎn)生影響，也會(huì)導(dǎo)致K+濃度增高；脂血樣本對(duì)TBIL和DBIL檢測(cè)產(chǎn)生影響。利用回歸方程，參照表3將干擾物濃度換算為血清指數(shù)后發(fā)現(xiàn)：在1733例肉眼判斷無(wú)干擾的樣本中，利用溶血指數(shù)判定，50例樣本的ALT、AST、LDH、TBIL、DBIL、Mg2+、CO2檢測(cè)受血紅蛋白影響；利用黃疸指數(shù)判定，23例樣本的高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)檢測(cè)受膽紅素(BIL)影響；利用脂血指數(shù)計(jì)算，未發(fā)現(xiàn)檢測(cè)受脂血濁度的影響。

圖1 血紅蛋白溶液及混合血清與溶血指數(shù)、黃疸指數(shù)和脂血指數(shù)的相關(guān)性驗(yàn)證 a：溶血指數(shù)；b：黃疸指數(shù)；c：脂血指數(shù)

圖2 103例黃疸樣本血清總膽紅素、直接膽紅素和黃疸指數(shù)的相關(guān)關(guān)系散點(diǎn)圖 a：總膽紅素；b：直接膽紅素

表3 常用生化檢測(cè)試劑的方法學(xué)和抗干擾能力

3 討論

溶血、黃疸和脂血是臨床檢驗(yàn)最常見(jiàn)的干擾。在臨床檢驗(yàn)分析前環(huán)節(jié)，樣本溶血在不合格和拒收樣本比例中占36.2%～70%[1，2，6]。本研究中，溶血樣本占所有受干擾樣本的39.68%，黃疸樣本占60.32%。

溶血是紅細(xì)胞膜破壞后血紅蛋白由細(xì)胞內(nèi)釋放到細(xì)胞外造成的，通常要通過(guò)分離血清或血漿才能通過(guò)肉眼識(shí)別。當(dāng)血紅蛋白濃度超過(guò)0.3 g/L時(shí)，通過(guò)肉眼可以根據(jù)血清或血漿的顏色變化判斷是否溶血。然而，肉眼判斷帶有一定的主觀性和個(gè)體差異，容易將輕度溶血樣本漏檢。溶血對(duì)多種檢測(cè)項(xiàng)目的準(zhǔn)確度造成影響，如血清K+、Na+、Ca2+、Mg2+、BIL、LDH、TP、AST、ALT、γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移酶(GGT)等[7，8]。在本實(shí)驗(yàn)中，按檢測(cè)試劑的干擾實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，在1733例樣本中，50例樣本ALT、AST、LDH、TBIL、DBIL、Mg2+、CO2的檢測(cè)受溶血影響。由于紅細(xì)胞內(nèi)K+含量遠(yuǎn)高于血清，50例樣本的血清K+檢測(cè)也受溶血影響。

血清TBIL在17.1～34.2 μmol/L，而肉眼看不出黃疸時(shí)，稱隱性黃疸；當(dāng)血清TBIL濃度超過(guò)34.2 μmol/L時(shí)，稱為顯性黃疸。通過(guò)檢測(cè)103例黃疸樣本的血清TBIL、DBIL和黃疸指數(shù)，進(jìn)一步驗(yàn)證了血清BIL和黃疸指數(shù)具有良好的相關(guān)性。在本研究使用的各種常規(guī)生化試劑中，干擾實(shí)驗(yàn)抗黃疸的cut-off值均高于隱性黃疸水平，故在肉眼辨別無(wú)干擾的樣本中，未發(fā)現(xiàn)其受黃疸影響。

在脂血樣本中，常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目只有BIL檢測(cè)直接受脂血影響，本研究的納入樣本中同樣未發(fā)現(xiàn)樣本檢測(cè)受脂血影響。臨床上，最常見(jiàn)的導(dǎo)致脂血的原因主要是飲食、酒精攝入、糖尿病、高甘油三酯血癥、慢性腎衰竭、胰腺炎等。本研究發(fā)現(xiàn)混合的嚴(yán)重脂血血清與脂血指數(shù)具有良好的相關(guān)性。脂血指數(shù)即檢測(cè)血清樣本的濁度而非血清甘油三酯的濃度，脂血的干擾機(jī)制有光散射、不可溶的物質(zhì)增多導(dǎo)致濁度增加和樣本內(nèi)物質(zhì)的極性與非極性增加三種，主要由乳糜微粒(CM)和極低密度脂蛋白(VLDL)導(dǎo)致。因此，在在臨床檢測(cè)中，通過(guò)濁度推算甘油三酯濃度是不可信的[9，10]。本研究在評(píng)估脂血指數(shù)的相關(guān)性時(shí)旨在利用樣本濁度評(píng)價(jià)其與儀器脂血指數(shù)(濁度)檢測(cè)的相關(guān)性。

通過(guò)全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清指數(shù)判定溶血、黃疸和脂血經(jīng)濟(jì)、高效，是生化檢測(cè)中有效的判定常見(jiàn)干擾的方法。

[1] Romero A，Cobos A，López-León A，et al.Preanalytical mistakes in samples from primary care patients [J].Clin Chem Lab Med，2009，47(12):1549-1552.

[2] Dale JC，Novis DA.Outpatient phlebotomy success and reasons for specimen rejection [J].Archives of Pathology & laboratory Medicine，2002，126(4):416-419.

[3] Plebani M，Carraro P.Mistakes in a stat laboratory: types and frequency [J].Clinical Chemistry，1997，43(8 Pt 1):1348-1351.

[4] Kroll MH，Elin RJ.Interference with clinical laboratory analyses [J].Clinical chemistry，1994，40(11):1996-2005.

[5] Glick MR，Ryder KW，Glick SJ，et al.Unreliable visual estimation of the incidence and amount of turbidity，hemolysis，and icterus in serum from hospitalized patients [J].Clinical chemistry，1989，35(5):837-839.

[6] Jones BA，Calam RR，Howanitz PJ.Chemistry specimen acceptability: a College of American Pathologists Q-Probes study of 453 laboratories [J].Archives of pathology & laboratory Medicine，1997，121(1):19-26.

[7] Guder WG.Haemolysis as an influence and interference factor in clinical chemistry[J].Journal of Clinical Chemistry and Clinical Biochemistry，1986，24(2):125-126.

[8] Ji JZ，Meng QH.Evaluation of the interference of hemoglobin，bilirubin，and lipids on Roche Cobas 6000 assays [J].Clinica Chimica Acta; International Journal of Clinical chemistry，2011，412(17-18):1550-1553.

[9] Lim KH，Lian WB，Yeo CL.Does visual turbidity correlate with serum triglyceride levels in babies on total parenteral nutrition [J].Annals of the Academy of Medicine，2006，35(11):790-793.

[10]Twomey PJ，Don-Wauchope AC，McCullough D.Unreliability of triglyceride measurement to predict turbidity induced interference [J].Journal of clinical pathology，2003，56(11):861-862.

Application of serum indices of ABBOTT c16000 automated analyzer in biochemistry detection

HUANGYi1，LIUDan2
(1.ClinicalLaboratory,SichuanAcademyofMedicalSciences&SichuanProvincialPeople’sHospital,Chengdu610072，China；2.DepartmentofRespiratoryandCriticalCareMedicine,WestChinaHospital,SichuanUniversity,Chengdu610041,China)

Objective To evaluate the role of serum indices in distinguishing the disturbance by hemolysis, lipemia and icterus of serum samples. Methods We collected 1,733 serum samples without hemolysis, lipemia and icterus identified by naked eye, and then analyzed serum indices of hemolysis, lipemia and icterus on ABBOTT ARCHITECT c16000 autoanalyzer using the Saline protocol. Results One hundred and twenty seven samples with interferences that could not be detected previously by naked eye were detected. These samples included 50 samples with hemolysis and 76 with icterus. Among the 126 samples interfered, 50 samples were influenced by hemolysis when determined serum ALT, AST, LDH, TBIL, DBIL, Mg2+, CO2, while none of the samples was influenced by icterus or lipemia when determined routine chemistry parameters. Conclusion Automated analyzers should be used for exclusion of pre-analytical errors induced by hemolysis, lipemia and icterus instead of visual detection.

ABBOTT； Automated analyzer； Serum index； Interference

四川省醫(yī)學(xué)科院·四川省人民醫(yī)院博士基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：30305030563)

R446.11

A

1672-6170(2016)05-0077-04

2016-05-09；

2016-06-24)