鄧 君，劉 蔚，洪 華，孫昌瑞(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 成都 610071)

MUC1基因表達(dá)與其它腫瘤標(biāo)志物在乳腺癌診斷中的應(yīng)用

鄧 君，劉 蔚，洪 華，孫昌瑞
(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 成都 610071)

目的 探討MUC1基因表達(dá)水平在乳腺癌診斷中的應(yīng)用。方法 采用熒光定量PCR(FQ-PCR)技術(shù)檢測(cè)50例健康女性體檢者、87例良性乳腺腫瘤和106例乳腺癌外周血中MUC1基因表達(dá)量，用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)CA125、CA153和CEA，并進(jìn)行對(duì)比分析研究。結(jié)果 MUC1對(duì)乳腺癌診斷靈敏度顯著高于CA153、CA125和CEA。結(jié)論 采用FQ-PCR檢測(cè)MUC1基因表達(dá)水平可有效監(jiān)測(cè)乳腺癌的診斷。

MUC1；CA153；CA125；CEA；乳腺癌

分子生物學(xué)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于乳腺癌的基因研究，目前發(fā)現(xiàn)多種癌基因表達(dá)異常與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后有關(guān)，如C-ERBB2[1]、CK19[2]和MUC1[3]等。本文采用FQ-PCR檢測(cè)50例健康女性體檢者、87例良性乳腺腫瘤和106例乳腺癌外周血中MUC1 基因表達(dá)量，同時(shí)用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)其CA153、CA125和CEA，并進(jìn)行對(duì)比分析研究。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年1月至2015年12月四川省人民醫(yī)院體檢中心的50例健康女性體檢者(正常對(duì)照組)，年齡25～75歲；106例乳腺癌患者，年齡27～78歲；87例良性乳腺腫瘤患者，年齡23～77歲。87例良性乳腺腫瘤中47例為纖維瘤，40例為脂肪瘤，106例乳腺癌患者均為經(jīng)病理確診的初診者，排除患其它腫瘤的可能性，術(shù)前采取靜脈血。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞分離和總RNA的提取 取5 ml靜脈血，經(jīng)過1 mg/mL EDTA抗凝處理后，加入10 ml左右的生理鹽水稀釋2～3倍，再使用淋巴細(xì)胞分離液將淋巴細(xì)胞分離，采用異硫氰酸胍-酚-氯仿一步法[4]將細(xì)胞總RNA提取處理。

1.2.2 引物和探針 采用PE公司Primer Express軟件設(shè)計(jì)MUC1的引物和探針，由廣州達(dá)安基因生物公司合成。MUC1 正義引物，5’-3’CGTCGTGGACATTGATGGTACC，MUC1反義引物，5’-3’GGTACCTCCTCTCACCTCCTCCAA。

1.2.3 GAPDH內(nèi)對(duì)照試劑盒 由美國ABI生物公司生產(chǎn)。

1.2.4 FQ-PCR ①cDNA合成[5]；②FQ-PCR反應(yīng)[5]：在7700 Sequence Detector 分析儀(美國ABI公司)上進(jìn)行DNA擴(kuò)增和分析，每份標(biāo)本均作MUC1和GAPDH測(cè)定。擴(kuò)增參數(shù)為：50 ℃2 min，95 ℃15 min后；再94 ℃0.5 min，65 ℃1 min，42次循環(huán)；③制備標(biāo)準(zhǔn)曲線：每次擴(kuò)增均使用標(biāo)準(zhǔn)曲線，范圍為102～106拷貝/ml。④定量分析：儀器根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線自動(dòng)計(jì)算GAPDH和MUC1拷貝數(shù)/mL，以MUC1和GAPDH比值作為MUC1的表達(dá)水平。

1.2.5 CEA、CA153和CA125的檢測(cè) 采用IMMELITE WANG化學(xué)發(fā)光儀(天津得普)進(jìn)行測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間比較采用t檢驗(yàn)；率的比較采用卡方檢驗(yàn)。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MUC1、CA153、CA125和CEA測(cè)定結(jié)果 乳腺癌組與正常對(duì)照組和良性乳腺疾病組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05)，正常對(duì)照組和良性乳腺疾病組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表1。

表1 三組MUC1、CA153、CA125和CEA測(cè)定結(jié)果比較

#以MUC1 /GAPDH比值作為MUC1基因表達(dá)水平；* 與正常對(duì)照組和良性乳腺疾病組比較，P< 0.01

2.2 MUC1和腫瘤標(biāo)記物用于乳腺癌診斷的評(píng)價(jià)

表2 MUC1、CA153、CA125和CEA對(duì)乳腺癌診斷的方法學(xué)評(píng)價(jià)

3 討論

MUC1基因定位于染色體1q21，是一類高分子量糖蛋白，廣泛表達(dá)于消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)的正常黏膜表面，其異常表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移、粘附以及機(jī)體的免疫監(jiān)控有關(guān)[6]。研究表明MUC1在95%的乳腺癌中呈50～100倍高表達(dá)，并伴隨著極性消失。MUC1 異常表達(dá)與腫瘤的惡性程度及預(yù)后不良密切相關(guān)[7]。人們?cè)絹碓蕉嗟貙⑵溆糜谌橄侔┫嚓P(guān)基因的研究[8]，但是對(duì)于MUC1和其它用于乳腺癌診斷的腫瘤標(biāo)記物，如CA153、CA125和CEA等的相關(guān)性研究較少，本研究采用FQ-PCR法定量檢測(cè)了MUC1在外周血中的表達(dá)，并與其它的腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行了比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

臨床上目前用于乳腺癌診斷的腫瘤血清學(xué)標(biāo)記物主要有CEA、CA153和CA125等，但這些標(biāo)志物的靈敏度均很低，CA153是報(bào)道較多的對(duì)乳腺癌特異性較高的標(biāo)記物，但陽性率較低[9，10]，CA125和CEA的陽性率則更低，且對(duì)早期乳腺癌診斷的陽性率亦很低。

本試驗(yàn)用FQ-PCR檢測(cè)了50例健康女性體檢者、87例良性乳腺腫瘤和106例乳腺癌的外周血中MUC1的基因表達(dá)，并與CA153、CA125和CEA進(jìn)行了對(duì)比分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)MUC1對(duì)乳腺癌診斷靈敏度(46.2%)顯著高于CA153(35.8%)、CA125(32.1%)和CEA(28.3%)。

FQ-PCR具有高特異性、高靈敏性、高精確性和污染小等優(yōu)于常規(guī)PCR的特點(diǎn)[11]，采用FQ-PCR檢測(cè)MUC1的基因表達(dá)水平在外周血的表達(dá)，標(biāo)本來源容易，可有效監(jiān)測(cè)乳腺癌的診斷。

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Application of MUC1 gene expression and other tumor markers in the diagnosis of breast cancer

DENGJun，LIUWei，HONGHua，SUNChang-rui
(ClinicalLaboratory，SichuanAcademyofMedicalSciences&SichuanProvincialPeople’sHospital，Chengdu610071，China)

Objective To investigate the application of MUC1 gene expression in the diagnosis of breast cancer.Methods Clinical samples of 50 health women，87 patients with benign breast disease and 106 patients with breast cancer were detected by FQ-PCR. Serum levels of CA125，CA153 and CEA were detected by chemical luminous method. The results were analyzed comparatively.Results The sensitivity of MUC1 in the diagnosis breast cancer was higher when compared to CA153，CA125 and CEA.Conclusion Gene expression of MUC1 detected by FQ-PCR can give objective evidence for the diagnosis of patients with breast cancer.

MUC1；CA153；CA125；CEA；Breast cancer

四川省青年科研基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：2007-5-345)；四川省衛(wèi)生廳科研基金資助項(xiàng)目(編號(hào)：050034)

R446.11；R737.9

A

1672-6170(2016)06-0023-03

2016-07-20；

2016-08-24)