麻淑磊,鄒艷君,林　勉,顧　超

1.永嘉縣中醫(yī)醫(yī)院，浙江 溫州 325401;2.浙江中醫(yī)藥大學，杭州 310053

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丹參原兒茶醛水提法和堿提法的比較

麻淑磊1,鄒艷君1,林勉1,顧超2

1.永嘉縣中醫(yī)醫(yī)院，浙江 溫州 325401;2.浙江中醫(yī)藥大學，杭州 310053

[摘要]目的優(yōu)化丹參口服液的制備工藝，確保制備的丹參口服液質(zhì)量符合《丹參口服液國家藥品標準》。方法在水提方法的基礎上，采用弱堿性水溶液作為提取溶劑，考察不同pH值的NaOH溶液的提取效果，確定最佳制備工藝，并將最佳工藝與原工藝進行對比。結(jié)果最佳工藝的提取溶劑pH值為8.5；最佳工藝的原兒茶醛含量達到0.3 mg/mL，達到了《標準》的要求，且穩(wěn)定性良好；最佳工藝與原工藝相比，不僅原兒茶醛含量提高，其余有效成分含量也高于原工藝。結(jié)論最佳工藝制備的丹參口服液，各項指標均符合《標準》中的規(guī)定，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可靠，且通過HPLC指紋圖譜的對比，最佳工藝制備的口服液品質(zhì)更加優(yōu)良。

[關鍵詞]丹參；原兒茶醛；HPLC；指紋圖譜

0引言

丹參為唇形科鼠尾草植物丹參(Salvia miltiorrhiza)的干燥根及根莖，具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩的功效。臨床上用于治療心絞痛[1-2]、冠心病[3]等心血管疾病。丹參主要含有水溶性和脂溶性兩類成分。水溶性成分主要是酚酸類，如丹酚酸B、丹參素、原兒茶醛[4]等。

丹參口服液屬于醫(yī)保乙類藥，具有較為優(yōu)良的療效，且不良反應相對較小。目前，國內(nèi)有5個廠家具有丹參口服液的生產(chǎn)批件，但是市場上沒有丹參口服液產(chǎn)品在流通。原因是藥材的提取效率過低[前期試驗發(fā)現(xiàn)，按照國家食品藥品監(jiān)督管理局2003頒布的《丹參口服液國家藥品標準》[5](以下簡稱《標準》)中的規(guī)定，轉(zhuǎn)移率僅有14%]，若要保證產(chǎn)品合格，只能增加投藥量，直接導致了生產(chǎn)成本過高，甚至高于零售價。若使用丹參提取物，雖然能夠保證原兒茶醛的含量合格，但是提取出的有效成分種類較少，降低了中成藥的療效；并且提取過程多使用有機溶劑，提取物中必然會殘留一定量的有機溶劑，長期服用也會危及患者的健康。所以具有生產(chǎn)批件的廠家均放棄了丹參口服液的生產(chǎn)。因此，在保證產(chǎn)品質(zhì)量的同時，增加丹參口服液的提取效率、降低生產(chǎn)成本，成為迫在眉睫的問題。本文采用弱堿作為提取溶劑，使丹參藥材中原兒茶醛的轉(zhuǎn)移率達到25.2%，含量高于《標準》中的要求。

1儀器與試藥

LC-20AB高效液相色譜儀[島津(中國)有限公司]；Venusil XBP C18色譜柱(博納艾吉爾科技有限公司)；EL104型分析天平[梅特勒-托利多(上海)有限公司]；PHS-3C型精密pH計(上海精科儀器有限公司)；RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士步琦有限公司)。丹參(批號：141201，產(chǎn)地山東)購自浙江中醫(yī)藥大學中藥飲片有限公司；原兒茶醛(批號：110810-201007，含量：98.2%)；氫氧化鈉(分析純，江蘇永華精細化學品有限公司)；無水乙醇、醋酸(分析純，南京化學試劑有限公司)；明膠(藥用，青島市豐樂化工有限公司)；液相用甲醇(色譜純，美國天地試劑公司)。

2HPLC測定原兒茶醛的含量

2.1HPLC色譜條件參考文獻報道[6]，經(jīng)過調(diào)整，最終的HPLC色譜條件：Venusil XBP C18色譜柱，流動相為甲醇-0.2%醋酸(20∶80)，進樣量10 μL，柱溫35 ℃，檢測波長280 nm。理論塔板數(shù)按原兒茶醛計算≥8 000，各組分與相鄰色譜峰的分離度均>1.5，且各組分的色譜峰對稱，色譜圖見圖1。經(jīng)計算，丹參藥材中原兒茶醛含量為0.601 mg/g。

圖1　丹參口服液原兒茶醛含量測定HPLC色譜圖

2.2對照品溶液的制備精密稱取原兒茶醛標準品3.66 mg于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成儲備液。據(jù)下述實驗要求，將標準品稀釋，濃度分別為9.15、12.2、18.3、36.6、73.2、183 μg/mL。

2.3供試品溶液的制備精密吸取丹參口服液1.0 mL，于5 mL容量瓶中，加3.5 mL甲醇超聲30 min，超聲頻率40 Hz。放冷，加甲醇至刻度，搖勻，取適量續(xù)濾液至離心管中，于12 000 r/min條件下離心10 min，即得。

2.4線性關系考察以進樣量(μg/mL)為橫坐標，測定峰面積為縱坐標，作標準曲線。并以最小二乘法計算得回歸方程：Y=0.639 7 X+1.109 9，R2=0.999 8，結(jié)果顯示，進樣量在9.15～183.0(μg/mL)范圍內(nèi)有良好的線性關系。

2.5精密度試驗按“2.1”項色譜條件，取對照品溶液10 μL注入高效液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，結(jié)果原兒茶醛峰面積的RSD值為0.16%(n=6)，說明此條件下精密度良好。

2.6準確性試驗精密量取已知含量丹參口服液1 mL，共6份，置5 mL量瓶中，加入適量原兒茶醛對照品按“2.2”項下供試品制備方法制備。在“2.1”項色譜條件下，分別進樣10 μL，進樣測定，計算加樣回收率，結(jié)果原兒茶醛的平均加樣回收率為98.9%，RSD為1.96%(n=6)，表明方法準確性良好。

2.7穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，在0、5、10、15、20、25 h分別進樣10 μL，記錄峰面積，計算，結(jié)果原兒茶醛峰面積的RSD值分別為1.50%(n=6)，說明在25 h內(nèi)，供試品溶液穩(wěn)定。

2.8重服性試驗取同一批號丹參口服液，同時制備5份供試品溶液，各進樣10 μL，進樣測定，計算得原兒茶醛平均質(zhì)量濃度分別為0.142 mg/mL，RSD為1.25%(n=5)，表明方法重復性良好。

3丹參口服液提取方法的優(yōu)化

3.1最佳pH值的確定以水為提取溶劑，優(yōu)化篩選得最佳加水量為11倍，提取2次，第1次2 h，第2次1.5 h，本試驗將水調(diào)節(jié)為不同pH梯度弱堿水，進一步對提取工藝進行優(yōu)化。稱取丹參藥材50 g若干份，分別加入pH為7.5、8、8.5、9、9.5的11倍量堿性水，煎煮2次，每次煎煮1 h，其余制備過程同《丹參口服液國家藥品標準》。依上述方法進行原兒茶醛含量測定，并測定相對密度，結(jié)果見表1。經(jīng)比較，當提取溶劑的pH為8.5時，轉(zhuǎn)移率達到25%左右，每支口服液10 mL計，原兒茶醛的含量達到3.0 mg，高于《丹參口服液國家藥品標準》中要求(2.0 mg/支)，故最佳工藝為提取溶劑pH=8.5，液料比11，提取2次，每次1 h，其余制備過程同《丹參口服液國家藥品標準》。

表1　丹參口服液各制備工藝原兒茶醛含量、轉(zhuǎn)移率

注：原兒茶醛轉(zhuǎn)移率=藥材中原兒茶醛含量×藥材量/相應藥材提取物中原兒茶醛含量×提取物量

3.2工藝穩(wěn)定性考察分別取同批次丹參飲片3份，每份50 g，按“3.1”項下最佳工藝制備丹參口服液3批，測定密度及原兒茶醛含量，結(jié)果見表2。

3.3優(yōu)化工藝與原工藝對比原工藝：以水為提取溶劑，加水量為11倍，提取2次，第1次2 h，第2次1.5 h。優(yōu)化工藝：以pH=8.5的弱堿水為提取溶劑，加水量為11倍，提取2次，第1次2 h，第2次1.5 h。

表2　最佳制備工藝原兒茶醛含量、轉(zhuǎn)移率及相對密度

3.4原兒茶醛含量對比依上述方法進行原兒茶醛含量測定，并測定相對密度，結(jié)果見表3。優(yōu)化工藝與原工藝相比，口服液相對密度基本無差別，原兒茶醛的轉(zhuǎn)移率提高1倍多。

表3　最佳制備工藝與原工藝制備原兒茶醛含量、

3.5HPLC指紋圖譜對比采用Venusil XBP C18為色譜柱。以乙腈(A)-0.2%醋酸溶液(B)為流動相，進行梯度洗脫：0～10 min，5%～20% A；10～20 min，20%～25% A；20～50 min，25%～30% A。檢測波長為280 nm，流速1.0 mL/min，柱溫為35 ℃。

優(yōu)化工藝與原工藝HPLC指紋圖譜對比見圖2。最佳工藝與原工藝相比所含有效成分種類無差異，但多數(shù)有效成分含量高于原工藝，表明優(yōu)化后丹參口服液的制備工藝更加適合工業(yè)化生產(chǎn)。

圖2　最佳工藝與原工藝HPLC指紋圖譜對比

4討論

本研究在對煎煮次數(shù)、液料比和煎煮時間試驗的基礎上，進一步對提取溶劑水進行pH調(diào)節(jié)，經(jīng)試驗驗證以pH=8.5的弱堿水為提取溶劑，加水量為11倍，提取2次，第1次2 h，第2次1.5 h為最佳提取工藝。相對于原工藝，優(yōu)化工藝具有如下的優(yōu)點：在沒有提高丹參飲片規(guī)格的前提下，制備的丹參口服液中原兒茶醛含量明顯提高，符合《丹參口服液國家藥品標準》中的規(guī)定；提取的成分種類無明顯變化，但是各物質(zhì)含量均提高很多。

參考文獻：

[1]王影.注射用丹參凍干對心絞痛患者血液流變學、心電圖的影響[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011,20(17):2128-2129.

[2]周松,范叔清,張喜民,等.丹參在治療心絞痛中成藥組分中的應用分析[J].中成藥,2015,37(4):925-928.

[3]劉志寧,趙慶霞,尤莉.丹參多酚鹽注射液對猝死型冠心病復蘇過程中的心肌保護作用[J].南方醫(yī)科大學學報,2010,30(3):645-646.

[4]高傳長,鄒書兵.丹參及其主要成分在冠心病及胰腺炎等疾病中的致病機制[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2010,30(11):1222-1226.

[5]國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品標準.丹參口服液藥品標準[S].2003,71,WS-73(Z-12)9.

[6]黃趙剛,劉鋼,夏泉.等.HPLC法測定不同廠家丹參注射液中丹參素和原兒茶醛的含量[J].安徽醫(yī)藥,2008,12(11):1055-1056.

Comparative study of conventional extraction and alkali extraction of protocatechuic aldehyde from Salvia miltiorrhiza

MA Shu-lei1,ZOU Yan-jun1,LIN Mian1,GU Chao2

(1.Yongjia Hospital of TCM,Wenzhou 325401,China;2.Zhejiang TCM University,Hangzhou 310053,China)

[Abstract]ObjectiveTo optimize the salvia oral preparation,and to ensure the quality is in line with “National Drug Standards for Salvia Oral Solution”.MethodsAlkaline water was used as extraction solvent to study the extraction influence of NaOH solution with different pH,and determine the best preparation crafts upon concentration and relative density;compare the best preparation process with the original process.ResultsThe pH of best extraction solvent was 8.5;the concentration made by the best process was up to 0.3 mg/mL,which reached the request of “National Drug Standards for Salvia Oral Solution”,and the stability of the best process was ideal;concentration of protocatechuic aldehyde as well as other active ingredients was higher than that of the original process.ConclusionThe indexes of Salvia oral solution prepared by the best process meet the request of “National Drug Standards for Salvia Oral”,and is better than which prepared by original process.

Key words：Salvia miltiorrhiza;Protocatechuic aldehyde;HPLC;Finger print

收稿日期：2015-08-23

基金項目：永嘉縣科技發(fā)展計劃項目(2015306)

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201604026