張丹丹，陶遵威（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津0019；2.天津醫(yī)院，天津00211；.天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所，天津00020）

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HPLC法測(cè)定芩?；殿w粒中黃芩苷的含量

張丹丹1，2，陶遵威3
（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193；2.天津醫(yī)院，天津300211；3.天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所，天津300020）

摘要目的：建立HPLC測(cè)定芩桑化痰顆粒中黃芩苷含量的方法。方法：色譜柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸水溶液（47∶53）；流速：1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm。結(jié)果：黃芩苷在0.184 μg～1.840 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 9），平均回收率為100.42%，RSD為0.02%。結(jié)論：該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于芩?；殿w粒的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞芩?；殿w粒；黃芩苷；高效液效果色譜法；含量測(cè)定

芩桑化痰顆粒由黃芩、桑白皮、桔梗、陳皮等多種藥材組成，屬于在研六類新藥，具有止咳平喘、清肺祛痰之功效。方中黃芩為君藥，性苦、寒，歸心、肝、肺、胃經(jīng)，具有清熱瀉火、消炎解毒之功效［1］。而黃芩苷是黃芩的主要有效成分之一［2］，具有抗菌、消炎、保肝、降壓、抗腫瘤等藥理作用［3］，也是評(píng)價(jià)黃芩藥材質(zhì)量的法定指標(biāo)成分。為控制其質(zhì)量，現(xiàn)以黃芩苷為定量指標(biāo)，采用高效液相色譜法（HPLC）進(jìn)行含量測(cè)定。

1儀器與試藥

島津LC-20ATvp高效液相色譜儀，二極管陣列檢測(cè)器，Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），AE240天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司），HS3120超聲儀（天津恒奧科技發(fā)展有限公司）；黃芩苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所購(gòu)置，批號(hào)110715-201318，供含量測(cè)定用，含量以93.3%計(jì)），3批芩?；殿w粒（批號(hào)20140401、20140402、20140403）及黃芩陰性顆粒劑（天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所制劑室提供）。色譜甲醇（色譜純，sigma科技有限公司），水為娃哈哈純凈水，乙醇、磷酸等試劑均為分析純（天津市化學(xué)試劑批發(fā)公司）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.2%磷酸水溶液（47∶53）；流速：1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算不低于2 500。對(duì)照品、供試品及陰性溶液色譜見圖1～圖3。

圖1　對(duì)照品溶液色譜圖（黃芩苷）

2.2溶液的制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備取黃芩苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含黃芩苷91.9 μg的對(duì)照品溶液。

圖2　供試品溶液色譜圖

圖3　陰性對(duì)照溶液色譜圖

2.2.2供試品溶液的制備取本品，研細(xì)，取約1g，精密稱定，精密加入70%乙醇40 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液過(guò)0.45 μm微孔濾膜，即得。

2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備按處方配比，取除黃芩外其他藥材，按供試品溶液制備方法，制得陰性樣品溶液。

2.3線性關(guān)系考察

分別吸取黃芩苷（91.9 μg/mL）對(duì)照品溶液2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL注入液相色譜儀，按照“2.1”所述色譜條件分析，測(cè)定峰面積，以對(duì)照品進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為Y = 377 882X-3 079（r= 0.999 9）。結(jié)果表明黃芩苷在0.184 μg～1.840 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.4精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一份供試品溶液10 μL，按“2.1”色譜條件分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，供試品溶液中黃芩苷峰面積值的RSD為0.17%，結(jié)果表明進(jìn)樣精密度良好。

2.5重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)20131017）6份，按照“2.2.2”供試品溶液制備操作，按“2.1”色譜條件分析，測(cè)定，計(jì)算其含量。RSD為0.63%。

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一份供試品溶液（批號(hào)20140401）按照“2.2.2”供試品溶液制備操作，按“2.1”色譜條件分析，精密吸取供試品溶液10 μL，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h進(jìn)樣，測(cè)定黃芩苷的RSD為1.43%，結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)20140401），研細(xì)，取6份，每份約0.5g，精密稱定，精密加入每1 mL含黃芩苷對(duì)照品0.035 9 mg以及70%乙醇溶液40 mL，按照“2.2.2”供試品溶液制備操作，制得供回收率用供試品溶液，按“2.1”色譜條件分析，計(jì)算回收率，結(jié)果黃芩苷平均回收率為100.42%，RSD為0.02%。

2.8樣品含量測(cè)定

取3個(gè)不同批號(hào)的樣品，按照“2.2.2”供試品溶液制備操作，按“2.1”色譜條件分析，分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μL，測(cè)定，計(jì)算1g樣品中黃芩苷含量。結(jié)果見表1。

表1　芩?；殿w粒劑中黃芩苷的含量測(cè)定結(jié)果?。╪=3）

3討論

3.1流動(dòng)相的選擇

黃芩苷呈弱酸性，在流動(dòng)相中加酸可改善峰型。參照藥典及相關(guān)文獻(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)采用甲醇-醋酸-水、甲醇-0.2%磷酸、乙腈-0，2%磷酸等流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行考察，結(jié)果表明，以甲醇-0.2%磷酸（47∶53）為流動(dòng)相，色譜分離能達(dá)到滿意的效果，分離度和峰型較好。

3.2提取方法的優(yōu)化

在芩?；殿w粒劑中，黃芩為君藥，而黃芩苷是其主要的有效成分之一。為使被測(cè)化合物提取效果最佳，考察了不同提取方法（超聲、回流）、不同提取溶劑（50%甲醇、70%甲醇、甲醇、50%乙醇、70%乙醇、乙醇）和不同提取時(shí)間（30 min、60 min、90 min）等因素對(duì)提取效率的影響，最終確定70%乙醇回流60 min提取效果最好。

參考文獻(xiàn)

［1］王建.中醫(yī)藥學(xué)概論［M］.6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：154.

［2］施高翔，邵菁，汪天明，等.黃芩及其有效成分抗菌作用新進(jìn)展［J］.中國(guó)中藥雜志，2014，39（19）：3 713-3 718.

［3］杜仲業(yè)，陳一強(qiáng)，孔晉亮，等.黃芩苷對(duì)金黃色葡萄球菌生物膜抑制作用的體外研究［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012，22（8）：1 541-1 543.

（編輯：梁葆朱）

Determination of baicalin in Qinsang Huatangranules by HPLC

Zhang Dandan1，2，Tao Zunwei3
（1.Tianjin University of TCM，Tianjin 300193；2.Tianjin Hospital，Tianjin 300211；3.Tianjin Institute of Medical Science，Tianjin 300020）

AbstractObjective：To establish a method for determinating baicalin in Qinsang Huatangranules by HPLC.Methods：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）was used.The mobile phase was methyl alcohol-0.2% phosphoric acid（47∶53），the flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 280 nm.Results：The calibration curve showed agood linear correlation in the range of 0.184 μg～1.840 μg（r=0.999 9）for baicalin.The average recovery rate of baicalin was 100.42%（RSD=0.02%）.Conclusion：The method is simple，accurate and hasgood repeatability，and could be used for the quality control of Qinsang Huatangranules.

Key wordsQinsang Huatangranules；baicalin；HPLC；determination

中圖分類號(hào)：R284.2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1671-0258（2016）02-0029-02

［作者簡(jiǎn)介］張丹丹，初級(jí)藥師，E-mail：9444608@qq.com

［通訊作者］陶遵威，研究員