孫晉茜，毋桂花（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024）

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鼻敏康顆粒對(duì)肺氣虛變應(yīng)性鼻炎大鼠IL-4、IL-12的影響

孫晉茜，毋桂花
（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024）

摘要目的：探討鼻敏康顆粒對(duì)肺氣虛變應(yīng)性鼻炎（AR）大鼠白細(xì)胞介素4（IL-4）、白細(xì)胞介素12（IL-12）水平的影響，從而分析鼻敏康顆粒的作用機(jī)制。方法：建立肺氣虛變應(yīng)性鼻炎大鼠模型，采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠鼻黏膜中IL-4、IL-12的含量，觀察鼻敏康顆粒對(duì)鼻黏膜T淋巴細(xì)胞的影響。結(jié)果：與模型對(duì)照組比較，西藥組與中藥治療組IL-4水平均降低，IL-12水平均升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)論：鼻敏康顆?？上抡{(diào)肺氣虛AR大鼠鼻黏膜IL-4水平、上調(diào)IL-12水平，通過平衡細(xì)胞因子水平發(fā)揮療效。

關(guān)鍵詞變應(yīng)性鼻炎；鼻敏康顆粒；肺氣虛；IL-4；IL-12

變應(yīng)性鼻炎（allergic rhinitis，AR）屬IgE介導(dǎo)的I型變態(tài)反應(yīng)，以發(fā)作性噴嚏、流涕和鼻塞為主要癥狀［1］。AR本身雖非嚴(yán)重的致命性疾病，但因其病情反復(fù)，若長期不愈，可導(dǎo)致變應(yīng)性鼻竇炎、鼻息肉、哮喘和慢性支氣管炎等一系列呼吸道并發(fā)癥，嚴(yán)重影響人們的健康和生活質(zhì)量［2-3］。所以，如何提高AR的防治水平，減少復(fù)發(fā)頻率，已引起社會(huì)各界的廣泛關(guān)注，成為迫切需要解決的社會(huì)問題。中藥制劑治療AR療效肯定，但作用機(jī)制尚未明確。為進(jìn)一步研究鼻敏康顆粒治療AR的機(jī)制，本文從細(xì)胞因子水平入手，以肺氣虛型AR大鼠為研究對(duì)象，觀察鼻敏康顆粒對(duì)大鼠鼻黏膜白細(xì)胞介素4（IL-4）、白細(xì)胞介素12（IL-12）水平的影響，為鼻敏康顆粒的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和支持，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，雌雄各半，SD大鼠60只，2月齡，體質(zhì)量（200±20）g，以標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料喂養(yǎng)。

1.1.2儀器和藥物超凈工作臺(tái)（型號(hào)：SW-CJ-1F），顯微鏡（型號(hào)：Olympus AX80），煙熏箱（100 cm ×85 cm×85 cm，容積為72 L）。卵白蛋白（OVA）（美國SIGMA公司生產(chǎn)，北京索萊寶科技有限公司分裝），脂多糖（LPS）（美國Sigma公司生產(chǎn)），Al（OH）3粉末（廣州化學(xué)試劑廠生產(chǎn)），PBS（磷酸鹽緩沖液）（上海亨代勞生物有限公司），甲醛溶液、戊二醛（上?；瘜W(xué)試劑公司生產(chǎn)），試劑盒（上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司），紅金龍香煙（湖北中煙工業(yè)有限責(zé)任公司）。鼻敏康顆粒（山西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑室提供，江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)），氯雷他定片（山西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥房提供，上海先靈葆雅制藥有限公司生產(chǎn)）。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1分組大鼠自由喂養(yǎng)1 w后，將大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為4組，每組15只，即空白組、模型對(duì)照組（肺氣虛+AR模型）、中藥治療組（鼻敏康顆粒）、西藥組（氯雷他定）。

1.2.2造模先建立肺氣虛模型，再進(jìn)行AR鼻炎模型的復(fù)制。

肺氣虛模型的建立：參照教材《實(shí)用中醫(yī)證候動(dòng)物模型學(xué)》“煙熏肺氣虛造模法”［4］，具體如下：除空白組不作處理外，其余組（模型對(duì)照組、中藥治療組和西藥組）分別于第1天將LPS 200 μg/200 μL注入大鼠氣管內(nèi)，第2～13天每日上午將大鼠置于容積72 L煙熏箱內(nèi)用紅金龍牌香煙熏0.5 h；第14天時(shí)再次注入同樣劑量LPS，第15～28天每日上午同樣方法煙熏大鼠0.5 h。觀察大鼠的食量、活動(dòng)量均減少，體質(zhì)量增幅減輕，蜷縮拱背，呼吸急促，頻發(fā)性咳嗽，行動(dòng)遲緩等提示造模成功。

AR鼻炎模型的復(fù)制：參照目前國內(nèi)“卵白蛋白注射及鼻腔黏膜刺激造模法”［5］，結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定最佳方式如下：①基礎(chǔ)致敏：以0.3 mg OVA+30 mg Al（OH）3作佐劑，配入1 mL NaCl制備成的混懸液對(duì)大鼠行腹腔注射基礎(chǔ)致敏，隔日1次（即第1天，第3天，第5天，第7天，第9天，第11天，第13天），共7次；②激發(fā)（強(qiáng)化致敏）：從第14天開始，以1%OVA滴鼻，每次50 μL，1次/d，連續(xù)14 d。空白組以生理鹽水腹腔注射及滴鼻處理，方法及步驟不變。

1.2.3給藥全身致敏造模結(jié)束后予以藥物治療，西藥組和中藥治療組根據(jù)“實(shí)驗(yàn)動(dòng)物人鼠劑量換算方法計(jì)算用藥量”，分別給予大鼠成人等效量的10倍灌胃（10g/kg），每日1次，連續(xù)7 d?？瞻捉M和模型對(duì)照組用同等劑量生理鹽水灌胃。

1.2.4鼻黏膜分離處理及檢測(cè)各組大鼠在滴鼻結(jié)束后，麻醉（10%水合氯醛腹腔注射）游離上頜骨，沿鼻中線將鼻腔剪開，充分暴露鼻中隔，剝?nèi)”丘つげ⒎Q重。加入一定量的PBS（pH=7.4），用勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20 min左右（2 000～3 000轉(zhuǎn)/min）。收集上清，分裝后一份檢測(cè)IL-4含量、IL-12含量，其余冷凍備用。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)　果

各組大鼠鼻黏膜IL-4、IL-12含量比較，結(jié)果見表1。

表1　大鼠鼻黏膜IL-4、IL-12含量比較?。?±s）

由表1可見，與模型對(duì)照組比較，中藥治療組與西藥組IL-4含量降低，IL-12含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01），且中藥治療組的療效較西藥組更顯著。

3討　論

變應(yīng)性鼻炎（AR）又稱過敏性鼻炎，是耳鼻喉科的常見病、多發(fā)病?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為引起疾病的直接原因是變應(yīng)原，同時(shí)還與遺傳、環(huán)境因素相關(guān)。目前其發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，大量研究表明Th1/Th2的平衡在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵性作用，Thl/Th2細(xì)胞失衡是AR發(fā)病的生物學(xué)基礎(chǔ)［6］。IL-4由活化的Th2細(xì)胞產(chǎn)生，被公認(rèn)為是參與AR發(fā)生過程中最重要的細(xì)胞因子，它可通過刺激B細(xì)胞生長促進(jìn)IgE的合成，激活中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的協(xié)調(diào)影響IgE分泌，加強(qiáng)Th2的促炎癥功能，導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)炎癥。IL-12是由單核細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞對(duì)細(xì)胞內(nèi)寄生物發(fā)生反應(yīng)而產(chǎn)生的一種異源二聚體分子，具有廣泛的免疫活性，并能促進(jìn)炎性組胺釋放減少，是AR發(fā)病過程中重要的抗炎因子，最終抑制AR發(fā)生［7-8］。因此，細(xì)胞因子水平變化在AR發(fā)生過程中起著不同的調(diào)節(jié)作用。

變應(yīng)性鼻炎根據(jù)臨床癥狀與祖國醫(yī)學(xué)的“鼻鼽”“鼻嚏”相類似，中醫(yī)認(rèn)為本病多由臟腑虧損，正氣虛弱，腠理疏松，外邪侵襲所致。風(fēng)寒之邪乘虛犯鼻，肺氣失宣，氣不攝津，津水外溢，而致鼻癢、噴嚏、流清涕，因此其病變部位在肺。劉華平等［9］搜集整理“萬方數(shù)據(jù)庫”關(guān)于AR的相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)該病的辨證進(jìn)行頻數(shù)統(tǒng)計(jì)分析，納入的102篇文獻(xiàn)中以肺氣虧虛型最多。鼻敏康顆粒是導(dǎo)師毋桂花副教授多年總結(jié)的有效經(jīng)驗(yàn)方，由黃芪、防風(fēng)、白術(shù)、白芷、藿香、陳皮、

蟬蛻、細(xì)辛、五味子組成，方中黃芪為君益氣固表，臣以白術(shù)補(bǔ)氣健脾，防風(fēng)、白芷散風(fēng)通竅，細(xì)辛溫肺化飲、宣通鼻竅，佐用蟬衣搜風(fēng)止癢，五味子斂肺止涕，甘草調(diào)和諸藥，共奏補(bǔ)益肺脾、祛風(fēng)止癢之功。本方應(yīng)用整體觀念與專病專方結(jié)合，突出了中醫(yī)藥治療肺氣虛變應(yīng)性鼻炎的優(yōu)勢(shì)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：模型對(duì)照組大鼠鼻黏膜IL-4含量檢測(cè)值較空白組高，IL-12含量檢測(cè)值較空白組低，這種改變提示AR的發(fā)生可能與IL-4升高、IL-12水平降低有關(guān)，證實(shí)了鼻黏膜中Th1/Th2細(xì)胞平衡遭到破壞，Th1/Th2細(xì)胞分泌的炎性因子比例失調(diào)是導(dǎo)致AR發(fā)病的主要因素之一。而中藥可下調(diào)鼻黏膜IL-4水平，上調(diào)IL-12水平，且略優(yōu)于西藥。鼻敏康顆粒從鼻黏膜細(xì)胞因子水平的角度出發(fā)，通過平衡Th1/Th2細(xì)胞水平，達(dá)到治療AR的目的，為鼻敏康顆粒臨床應(yīng)用提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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（編輯：梁葆朱）

The effects of Biminkanggranules on expressions of IL-4 and IL-12 in nasal mucosas of allergic rhinitis rat models with deficiency of lung-qi

Sun Jinqian，Wuguihua
（Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

AbstractObjective：To observe the effect of Biminkanggranules on interleukin 4（IL-4），interleukin 12（IL-12）of allergic rhinitis（lung-qi deficiency）rats and analyze the mechanism of Biminkanggranules.Methods：Rat models of allergic rhinitis with lung-qi deficiency were established，and the contents of IL-4 and IL-12 in nasal mucosa of rats were detected by enzyme linked immunosorbent assay.Results：Compared with the modelgroup，IL-4 levels were decreased，IL-12 levels were elevated in Western medicinegroup and Chinese medicinegroup，the difference is statistically significant（P＜0.05，P＜0.01）.Conclusion：Biminkanggranules can down-regulate the level of IL-12 and up-regulate the level of IL-4.It plays the role on allergic rhinitis（lung-qi deficiency）through balancing cytokine levels.

Key wordsallergic rhinitis；Biminkanggranules；lung-qi deficiency；IL-4；IL-12

中圖分類號(hào)：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1671-0258（2016）02-0020-03

［基金項(xiàng)目］山西省自然科學(xué)基金（2013011055-6）

［作者簡介］孫晉茜，在讀碩士，E-mail：sjx351452671@qq.com

［通訊作者］毋桂花，副教授，碩士研究生導(dǎo)師，E-mail：wgh0306@163.com