楊　彪， 王　瑤， 趙曉光， 王　磊

(1西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨科，西安　710077； 2西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科；*通訊作者，E-mail:95244556@qq.com)

?

γ干擾素誘導(dǎo)蛋白-10在強(qiáng)直性脊柱炎患者血清中的表達(dá)及其臨床意義

楊彪1， 王瑤2*， 趙曉光1， 王磊1

(1西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院骨科，西安710077；2西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科；*通訊作者，E-mail:95244556@qq.com)

摘要：目的 檢測(cè)強(qiáng)直性脊柱炎(AS)患者血清中γ干擾素誘導(dǎo)蛋白-10(IP-10)的表達(dá)水平，分析IP-10與疾病的關(guān)系，評(píng)價(jià)其在AS疾病活動(dòng)中的臨床意義。方法選取AS活動(dòng)期患者34例、AS穩(wěn)定期患者24例及體檢健康者46例作為研究對(duì)象，采用ELISA法檢測(cè)血清中IP-10、IL-17、IL-23和TNF-α水平，分析血清IP-10水平與AS各臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的相關(guān)性。結(jié)果AS活動(dòng)期組及穩(wěn)定期組患者血清IP-10含量水平均顯著高于健康對(duì)照組(P<0.05)；IP-10在AS活動(dòng)期組含量水平高于穩(wěn)定期組(P<0.05)；兩組AS患者血清IL-17、IL-23及TNF-α含量水平均高于健康對(duì)照組(P<0.05)；IL-17和TNF-α在AS活動(dòng)期組含量水平高于穩(wěn)定期組(P<0.05)。相關(guān)性分析表明，AS患者中IP-10與IL-17、IL-23、TNF-α、PLT、ESR、CRP和BASDAI評(píng)分呈正相關(guān)。結(jié)論血清中IP-10水平可能是AS發(fā)病過(guò)程中重要的免疫學(xué)標(biāo)志，檢測(cè)IP-10有助于對(duì)AS的診斷和病情的評(píng)估。

關(guān)鍵詞：γ干擾素誘導(dǎo)蛋白-10；強(qiáng)直性脊柱炎；細(xì)胞因子

強(qiáng)直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)是一種與遺傳相關(guān)的自身免疫性疾病[1]，主要侵犯骶髂關(guān)節(jié)、脊柱骨突、脊柱旁軟組織及外周關(guān)節(jié)，致殘率高。AS通常在青壯年發(fā)病，目前病因尚未完全闡明，多數(shù)研究顯示其發(fā)病可能與遺傳、感染及免疫環(huán)境等因素有關(guān)[2]。

γ干擾素誘導(dǎo)蛋白-10(interferon-γ-inducible protein 10,IP-10)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種在誘導(dǎo)白細(xì)胞遷移至炎癥部位的過(guò)程中扮演重要角色的趨化因子。已有研究證實(shí)IP-10通過(guò)促進(jìn)CD4+T細(xì)胞和F4/80+巨噬細(xì)胞的遷移及上調(diào)滑膜CD4+T細(xì)胞核因子-κB受體活化因子配體表達(dá)等多種方式引發(fā)骨質(zhì)破壞，是風(fēng)濕及類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、幼兒特發(fā)性關(guān)節(jié)炎等骨關(guān)節(jié)炎癥性疾病的重要發(fā)病因素[3-5]。本文以AS患者為研究對(duì)象，以健康人作為對(duì)照，檢測(cè)血清中IP-10含量，結(jié)合IL-17、IL-23和TNF-α的分泌水平，探討IP-10與IL-17、IL-23和TNF-α分泌模式在AS患者致病過(guò)程中發(fā)生的變化，為進(jìn)一步了解IP-10的致病機(jī)制提供資料。

1材料與方法

1.1研究對(duì)象

研究對(duì)象為2014-03～2015-12在我院門(mén)診或收治住院中符合2010年中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病分會(huì)制定的《強(qiáng)直性脊柱炎診斷及治療指南》[6]中疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者58例，按照強(qiáng)制性脊柱炎疾病活動(dòng)指數(shù)(bath ankylosing spondylitis disease activity index,BASDAI)計(jì)分方法進(jìn)行評(píng)分，將其分為兩組：活動(dòng)期組34例(定義為BASDAI≥4分)，穩(wěn)定期組24例(定義為BASDAI<4分)。46例本院體檢健康者入選標(biāo)準(zhǔn)：肝腎功能、血脂、血常規(guī)、尿常規(guī)、影像學(xué)檢查均正常，與AS組的性別、年齡相匹配。所有參與研究的AS患者及健康對(duì)照組均排除:①處于急性或慢性感染期；②患有嚴(yán)重心、肝、腎及血液系統(tǒng)疾??；③合并其他診斷明確的自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、嚴(yán)重性腸病、銀屑病、葡萄膜炎等；④患有糖尿病、甲狀腺等內(nèi)分泌系統(tǒng)疾?。虎菽[瘤患者。

1.2研究方法

所有研究對(duì)象均在臨床干預(yù)治療前清晨空腹采集靜脈血，送我院檢驗(yàn)科，常規(guī)檢查血分析、血沉、C反應(yīng)蛋白、類(lèi)風(fēng)濕因子、HLA-B27等相關(guān)項(xiàng)目，同時(shí)另采集靜脈血3 ml，3 500 r/min離心10 min，取血清于-80 ℃冷凍保存待測(cè)。采用雙抗體夾心ELISA法，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的操作要求檢測(cè)外周血清中IP-10、IL-17、IL-23和TNF-α水平。

對(duì)所有研究對(duì)象進(jìn)行詳細(xì)的審查、登記，填寫(xiě)統(tǒng)一編制的表格，內(nèi)容包括一般情況(如：姓名、性別、年齡、身高、體重、BMI等)及檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)及結(jié)果，數(shù)據(jù)編入計(jì)算機(jī)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)所用人IP-10 ELISA監(jiān)測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Biosource公司，IL-17及IL-23 ELISA監(jiān)測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)B&D公司,TNF-α ELISA監(jiān)測(cè)試劑盒購(gòu)自上海北諾公司。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2結(jié)果

2.1一般資料比較

AS活動(dòng)期組、AS穩(wěn)定期組及健康對(duì)照組在性別、年齡、BMI和類(lèi)風(fēng)濕因子上的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)、血沉(ESR)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、HLA-B27陽(yáng)性率和BASDAI評(píng)分上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且AS活動(dòng)期組的PLT、CRP和BASDAI評(píng)分均顯著高于AS穩(wěn)定期組(P<0.05，見(jiàn)表1)。

表1AS患者與健康對(duì)照一般資料比較

Table 1Comparison of general datum between AS patients and healthy controls

組別n男性[例(%)]年齡(歲)BMI(kg/m2)白細(xì)胞計(jì)數(shù)(×109/L)血小板計(jì)數(shù)(×109/L)類(lèi)風(fēng)濕因子(IU/ml)血沉(mm/h)C反應(yīng)蛋白(mg/L)HLA-B27陽(yáng)性率(%)BASDAI評(píng)分(分)AS活動(dòng)期組3428(82.4)29.0±7.323.0±5.19.6±5.1*303.0±116.2*6.8±2.130.9±14.2*19.3±14.1*91.2*6.1±1.1*AS穩(wěn)定期組2419(79.2)28.8±11.724.7±4.89.0±4.7*241.6±103.8*#7.1±1.226.2±14.7*11.7±6.1*#87.5*2.4±0.7*#健康對(duì)照組4637(80.4)30.1±9.224.8±4.96.8±1.7184.8±72.17.0±2.87.3±4.62.1±1.42.20.6±0.8

與健康對(duì)照組比較，*P<0.05；與AS活動(dòng)組比較，#P<0.05

2.2血清IP-10、IL-17、IL-23和TNF-α含量檢測(cè)結(jié)果比較

AS活動(dòng)期組及穩(wěn)定期組患者血清IP-10含量水平均顯著高于健康對(duì)照組(F分別為88.68，12.81，均P<0.05)；IP-10在AS活動(dòng)期組含量水平高于穩(wěn)定期組(F=26.80，P<0.05)。兩組AS患者血清IL-17、IL-23及TNF-α含量水平均高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F分別為99.49，59.19，15.96，均P<0.05)；IL-17和TNF-α在AS活動(dòng)期組含量水平高于穩(wěn)定期組(F分別為12.14，5.24，均P<0.05,見(jiàn)表2)。

2.3AS患者IP-10與IL-17、IL-23、TNF-α、WBC、PLT、ESR、CRP和BASDAI評(píng)分間相關(guān)性分析

經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，AS患者中IP-10與IL-17、IL-23、TNF-α、PLT、ESR、CRP和BASDAI評(píng)分呈正相關(guān)，與WBC無(wú)相關(guān)性(見(jiàn)表3)。

表2三組血清IP-10、IL-17、IL-23和TNF-α水平比較(pg/ml)

Table 2Serum IP-10,IL-17,IL-23 and TNF-α levels in three groups(pg/ml)

組別nIP-10IL-17IL-23TNF-αAS活動(dòng)期組34256.32±119.53*39.50±12.60*46.44±17.14*17.14±7.58*AS穩(wěn)定期組24120.71±58.70*#28.92±9.39*#39.16±13.72*13.08±5.06*#健康對(duì)照組4669.78±54.589.37±6.9415.85±8.528.93±6.17

與健康對(duì)照組比較，*P<0.05；與AS活動(dòng)組比較，#P<0.05

表3AS患者IP-10與IL-17、IL-23、TNF-α、WBC、PLT、ESR、CRP和BASDAI評(píng)分間相關(guān)性分析

Table 3Correlation analysis between IP-10 and IL-17,IL-23,TNF-α,WBC,PLT,ESR,CRP,BASDAI score

檢驗(yàn)項(xiàng)目因子rPIL-170.53<0.01IL-230.58<0.01TNF-α0.39<0.01WBC0.120.23PLT0.29<0.01ESR0.55<0.01CRP0.55<0.01BASDAI0.70<0.01

3討論

AS是一種多因素共同參與的慢性炎癥性疾病，發(fā)病年齡輕，致殘率高，嚴(yán)重影響病人的生活質(zhì)量。雖然近年來(lái)對(duì)AS的診斷與治療均已取得了長(zhǎng)足的進(jìn)步，但目前仍然無(wú)法完全闡明該病發(fā)生的確切病因，無(wú)法找到根治性的治療方法。

γ干擾素誘導(dǎo)蛋白-10(IP-10)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的半胱氨酸-X-半胱氨酸(CXC)類(lèi)谷氨酸-亮氨酸-精氨酸(Glu-Leu-Arg,ELR)亞族趨化因子,又名CXC趨化因子配體10(CXCL10)。是由γ干擾素所誘導(dǎo)產(chǎn)生的一類(lèi)可以趨化淋巴細(xì)胞的蛋白質(zhì)，主要表達(dá)在活化的T淋巴細(xì)胞上，特別是Th1型T淋巴細(xì)胞，IP-10與之結(jié)合后能夠誘導(dǎo)Th1細(xì)胞活化并定向遷移至特定的組織中從而調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。此外IP-10還具有介導(dǎo)細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)靶細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖、調(diào)節(jié)血管生成等功能。近年來(lái)，已有研究證實(shí)IP-10參與多種器官特異性自身免疫性疾病(如1型糖尿病、自身免疫性甲狀腺炎、Graves病等)和系統(tǒng)性自身免疫性疾病(如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化等)的發(fā)病過(guò)程[7]，同時(shí)也是風(fēng)濕、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、幼兒特發(fā)性關(guān)節(jié)炎等骨關(guān)節(jié)炎癥性疾病的重要發(fā)病因素[3-5]。

通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)，AS患者血清中的IP-10含量明顯高于健康對(duì)照組(P<0.05)，說(shuō)明AS患者存在IP-10表達(dá)的增加。同時(shí)，AS活動(dòng)期患者血清IP-10水平高于穩(wěn)定期組，提示IP-10水平與AS病程分期密切相關(guān)。進(jìn)一步分析顯示，AS患者外周血中IL-17、IL-23的水平明顯高于健康對(duì)照組(P<0.05)，并且IL-17與IL-23的表達(dá)呈正相關(guān)，這與近年來(lái)內(nèi)外相關(guān)研究的結(jié)果相一致[8-13]。而TNF-α通過(guò)激活多形核細(xì)胞，刺激前列腺素產(chǎn)生，抑制堿性磷酸酶和膠原的合成及促進(jìn)軟骨細(xì)胞分泌纖維蛋白溶解酶激活劑，促使纖維蛋白酶的合成等多種機(jī)制在AS的致病過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用已經(jīng)成為學(xué)者們公認(rèn)的事實(shí)[14-16]。通過(guò)相關(guān)性分析，可以看出，AS患者IP-10水平與IL-17、IL-23、TNF-α、PLT、ESR、CRP和BASDAI評(píng)分均呈顯著正相關(guān)，而與WBC無(wú)相關(guān)性，這些結(jié)果再次提示IP-10在AS的發(fā)生和進(jìn)展過(guò)程中起到了重要的作用，是AS特異性極強(qiáng)的敏感性指標(biāo)，檢測(cè)血清IP-10水平可能有助于對(duì)AS疾病活動(dòng)性的評(píng)估。

本研究通過(guò)監(jiān)測(cè)AS患者及健康人血清中IP-10含量，結(jié)合IL-17、IL-23和TNF-α的分泌水平，探討IP-10與IL-17、IL-23和TNF-α分泌模式在AS患者致病過(guò)程中發(fā)生的變化，證實(shí)IP-10同IL-17、IL-23及TNF-α均可能為AS發(fā)病過(guò)程中重要的免疫學(xué)標(biāo)志，并且在AS發(fā)病的過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。

此外，研究IP-10在AS患者體內(nèi)血清中的表達(dá)及臨床意義，不僅有助于進(jìn)一步了解AS的發(fā)病機(jī)制，還能為AS的臨床治療提供重要實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。已有研究表明，應(yīng)用CXCR3小分子拮抗劑AMG487能顯著降低滑膜細(xì)胞的侵襲性，降低滑液中基質(zhì)金屬蛋白酶水平，阻止IP-10-CXCR3介導(dǎo)的滑膜細(xì)胞的激活，從而減少肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重組及板狀偽足的形成[17]。而應(yīng)用抗IP-10的單克隆抗體治療對(duì)甲氨蝶呤耐藥的RA患者有顯著的療效[18]。因此，針對(duì)IP-10的靶點(diǎn)治療有望成為AS治療的一種新的方向。

由于本研究的樣本量相對(duì)較少，研究方法僅局限于ELISA法定量檢測(cè)，干擾因素相對(duì)較多，可能存在系統(tǒng)誤差等問(wèn)題，IP-10的臨床意義尚需更大的樣本、多中心研究進(jìn)一步驗(yàn)證。但我們有理由相信，IP-10作為一種新型的標(biāo)志物，在不遠(yuǎn)的將來(lái)一定能夠在AS等免疫相關(guān)疾病的早期篩查、輔助診斷、監(jiān)測(cè)病情、療效評(píng)價(jià)及判斷預(yù)后上得到廣泛的應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

[1]Ma B,Yang B,Guo H,etal.The association between tumor necrosis factor alpha promoter polymorphisms and ankylosing spondylitis:A meta-analysis[J].Hum Immunol,2013,74:1357-1362.

[2]劉越,趙艷梅，夏群.強(qiáng)直性脊柱炎的診斷與治療進(jìn)展[J].中國(guó)矯形外科雜志，2015,23(3)：235-238.

[3]Devito A.Interferon γ-induced chemokines in psoriatic arthritis[J].Clin Ter,2014,165(6):442-446.

[4]李瑞娟，唐雪梅，劉瑋,等.幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎白介素6、γ干擾素誘導(dǎo)蛋白10和白介素17的表達(dá)及意義[J].中華兒科雜志，2013,51(6):472-476.

[5]Nikiphorou E,Davies C,Mugford M,etal.Direct health costs of inflammatory polyarthritis 10 years after disease onset: results from the Norfolk Arthritis Register[J].J Rheumatol,2015,42(5):794-798.

[6]中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)分會(huì).強(qiáng)直性脊柱炎診斷及治療指南[J].中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病學(xué)雜志，2010,14(8):557-559.

[7]Antonelli A,Ferrari SM,Giuggioli D,etal.Chemokine(C-X-C motif) ligand(CXCL)10 in autoimmune diseases[J].Autoimmun Rev,2014,13(3):272-280.

[8]Gaffen SL,Jain R,Garg AV,etal.The IL-23/IL-17 immune axis:from mechanisms to therapeutic testing[J].Nat Rev Immunol,2014,14(9):585-600.

[9]Kenna TJ,Davidson SI,Duan R,etal.Enrichment of circulating interleukin-17-secreting interleukin-23 receptor-positive gamma/delta T cells in patients with active ankylosing spondylitis[J].Arthritis Rheum,2012,64(5):1420-1429.

[10]徐忠玉，房光萃，陳開(kāi)杰，等.強(qiáng)直性脊柱炎與IL-23R基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)的Meta分析[J].現(xiàn)代免疫學(xué)，2015,35(6)：477-481.

[11]趙瑞梅，孫永平.強(qiáng)直性脊柱炎患者外周血TNR-α、IL-17、IL-23的表達(dá)及相關(guān)性分析[J].實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志，2015,19(9)：38-40.

[12]Ebihara S,Date F,Dong Y,etal.Interleukin-17 is a critical target for the treatment of ankylosing enthesitis and psoriasis-like dermatitis in mice[J].Autoimmunity,2015,48(4):259-266.

[13]Toussirot E.The IL-23/Th17 pathway as a therapeutic target in chronic inflammatory diseases[J].Inflamm Allergy Drug Targets,2012,11(2):159-168.

[14]張璐，鄒紅云，于武忠，等.強(qiáng)直性脊柱炎患者TNF-α表達(dá)水平測(cè)定分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2014,18(4)：589-592.

[15]Zhang JR,Liu XJ,Xu WD,etal.Effects of tumor necrosis factor-α inhibitors on new bone formation in ankylosing spondylitis[J].Joint Bone Spine,2015,12(8):1297-1319.

[16]Liu KG,He QH,Tan JW,etal.Expression of TNF-α,VEGF,and MMP-3 mRNAs in synovial tissues and their roles in fibroblast-mediated osteogenesis in ankylosing spondylitis[J].Genet Mol Res,2015,14(2):6852-6858.

[17]Laragione T，Brenner M,Sherry B,etal.CXCL10 and its receptor CXCR3 regulate synovial fibroblast invasion in rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheum,2011,63(11):3274-3283.

[18]DiDomenicantonio A.Aheumatoid arthritis and the alphachemokine IP-10[J].Clin Ter,2014,165(6):447-451.

Expression of interferon-γ-inducible protein-10 in serum of patients with ankylosing spondylitis and its clinical significance

YANG Biao1, WANG Yao2*, ZHAO Xiaoguang1, WANG Lei1

(1DepartmentofOrthopedics,FirstAffiliatedHospitalofXi’anMedicalUniversity,Xi’an710077,China;2DepartmentofLaboratoryMedicine,FirstAffiliatedHospitalofXi’anMedicalUniversity;*Correspondingauthor，E-mail: 95244556@qq.com)

Abstract：ObjectiveTo investigate the levels of serum interferon-γ-inducible protein 10(IP-10) in patients with ankylosing spondylitis(AS)，and evaluate its clinical significance in the disease activity of AS.MethodsThe levels of IP-10,IL-17,IL-23 and TNF-α in serum from 34 patients with active ankylosing spondylitis,24 patients at stable phase and 46 healthy controls were detected by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA). The correlation of serum IP-10 level with AS-associated clinical and laboratorial indexes were analyzed. ResultsThe levels of serum IP-10 in active and stable phase AS patients were significantly higher than that of healthy controls(P<0.05),and the serum IP-10 level in active AS patients was significantly higher than that in inactive AS patients(P<0.05). The levels of serum IL-17,IL-23 and TNF-α in AS patients were higher than that of healthy controls(P<0.05),and the levels of serum IL-17 and TNF-α in active AS patients were significantly higher than those of inactive AS patients(P<0.05). Correlation analysis showed that the level of IP-10 was positively correlated with IL-17,IL-23,TNF-α,PLT,ESR,CRP, BASDAI score in AS patients.ConclusionThe serum IP-10 level may be an important immune marker in the process of AS, and it can be helpful to diagnose and evaluate AS.

Key words:interferon-γ-inducible protein-10；ankylosing spondylitis；cytokines

作者簡(jiǎn)介：楊彪，男，1977-03生，碩士，主治醫(yī)師,E-mail:yangbiao1977@126.com

收稿日期：2016-03-06

中圖分類(lèi)號(hào)：R593.23

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1007-6611(2016)05-0459-04

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2016.05.014