韓宗利　齊　輝　尹　衛(wèi)　杜艷麗.北京大學(xué)深圳醫(yī)院神經(jīng)外科，廣東深圳　58036；2.深圳職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)護(hù)學(xué)院，廣東深圳　58055

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泌乳素腺瘤中間質(zhì)成纖維細(xì)胞激活蛋白的表達(dá)及其意義

韓宗利1齊輝1尹衛(wèi)1杜艷麗2▲
1.北京大學(xué)深圳醫(yī)院神經(jīng)外科，廣東深圳518036；2.深圳職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)護(hù)學(xué)院，廣東深圳518055

［摘要］目的探討腫瘤間質(zhì)活化的成纖維細(xì)胞激活蛋白在垂體泌乳素腺瘤組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法采用2012年2月～2015年1月間我院60例泌乳素腺瘤的患者標(biāo)本。根據(jù)術(shù)前影像資料和術(shù)中所見(jiàn)將其分為腫瘤侵襲組和腫瘤非侵襲組。采用免疫組化法檢測(cè)標(biāo)本間質(zhì)中FAP的表達(dá)，并用IPP7.0圖像分析軟件統(tǒng)一定量分析兩組標(biāo)本免疫組化圖片的光密度值（OD值）。結(jié)果FAP在侵襲組表達(dá)率為87.5%（21/24），非侵襲組表達(dá)率為69.4%（25/36）。侵襲組與非侵襲組的表達(dá)強(qiáng)度OD值分別為（0.2282±0.0553）、（0.1592±0.0662），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論成纖維細(xì)胞激活蛋白在侵襲性和非侵襲性泌乳素腺瘤中均有表達(dá)，但表達(dá)強(qiáng)度在兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，成纖維細(xì)胞激活蛋白可能作為鑒別泌乳素腺瘤的侵襲性的一個(gè)生物標(biāo)志物。

［關(guān)鍵詞］成纖維細(xì)胞激活蛋白；腫瘤間質(zhì)；垂體腺瘤；侵襲性

▲通訊作者

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與腫瘤環(huán)境中的間質(zhì)細(xì)胞緊密相關(guān)，活化的間質(zhì)細(xì)胞通過(guò)分泌細(xì)胞因子和基質(zhì)蛋白酶等促使腫瘤的增殖、浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移。腫瘤相關(guān)性成纖維細(xì)胞（tumor-associated fibro-blast，TAF）在腫瘤進(jìn)展中發(fā)揮重大作用，其分泌的成纖維細(xì)胞激活蛋白（fibroblast activation protein，F(xiàn)AP）主要表達(dá)于上皮癌和惡性間葉細(xì)胞中［1，2］，在正常成人靜息的成纖維細(xì)胞中通常不表達(dá)，提示其是一個(gè)增生性成纖維細(xì)胞的表面標(biāo)志物，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲中起重要作用［2，3］。近年來(lái)，F(xiàn)AP在腫瘤組織中的表達(dá)備受關(guān)注；但是在垂體瘤組織中的表達(dá)則鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究主要通過(guò)檢測(cè)垂體泌乳素腺瘤組織中FAP的表達(dá)分析其與泌乳素腺瘤侵襲性的關(guān)系，旨在為泌乳素腺瘤預(yù)后判斷提供新的評(píng)價(jià)指標(biāo)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1　材料與方法

1.1材料來(lái)源

收集2012年2月～2015年1月間我院60例泌乳素腺瘤的患者標(biāo)本。其中侵襲性24例，非侵襲性36例。侵襲組男16例，女8例，平均年齡（32±6）歲，泌乳素水平（862.63±111.73）ng/mL；非侵襲組男22例，女14例，平均年齡（40±8）歲，泌乳素水平（616.04± 90.52）ng/mL。

1.2分組標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)術(shù)前核磁共振增強(qiáng)相上結(jié)果作出初步診斷，再根據(jù)術(shù)中所見(jiàn)將垂體泌乳素腺瘤分為侵襲性和非侵襲性?xún)山M。術(shù)前影像學(xué)分期主要參照Hardy-Wilosn［4］分級(jí)分期和Knosp［5］分級(jí)。術(shù)中見(jiàn)腫瘤明顯向鞍上池及兩側(cè)海綿竇侵襲的定為侵襲性腺瘤。

1.3FAP檢測(cè)

FAP檢測(cè)根據(jù)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。主要采用試劑：鼠抗人FAP單克隆抗體（德國(guó)Calbiochem公司）用于檢測(cè)成纖維細(xì)胞激活蛋白（FAP）一抗；即用型S-P免疫細(xì)胞化學(xué)染色超敏試劑盒（武漢博士德）為抗小鼠IgG（二抗），DAB顯色試劑盒（武漢博士德）行免疫組化顯色。染色黃色為陽(yáng)性，同一條件下拍照待統(tǒng)一定量分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有免疫組化圖片經(jīng)IPP（Image-Pro Plus version 7.0）軟件統(tǒng)一條件下測(cè)定其光密度OD（Optic Density Value）值；OD=IOD/Area，OD：平均光密度；IOD：累積光密度；Area：陽(yáng)性區(qū)域面積。所有計(jì)量資料均以（±s）表示，組間差異采用t檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1泌乳素腺瘤組織切片分析結(jié)果

泌乳素腺瘤組織切片分析結(jié)果提示，F(xiàn)AP在兩組中均有陽(yáng)性表達(dá)，各組FAP表達(dá)情況見(jiàn)封三圖1～4。表達(dá)部位主要位于腫瘤細(xì)胞周?chē)g質(zhì)，部分組織可見(jiàn)血管周?chē)年?yáng)性表達(dá)（封三圖2）。陽(yáng)性率在侵襲組為87.5%（21/24），非侵襲組為69.4%（25/36）。

2.2兩組FAP表達(dá)強(qiáng)度（OD值）比較

兩組FAP表達(dá)強(qiáng)度（OD值）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1　FAP在不同侵襲性腫瘤中的表達(dá)（±s）

表1　FAP在不同侵襲性腫瘤中的表達(dá)（±s）

注：*分組標(biāo)準(zhǔn)參照Knosp的分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

組別*　n　FAP（OD值）　t值　P值侵襲組非侵襲組24 36 0.2282±0.0553 0.1592±0.0662　3.460　0.001

3　討論

腫瘤組織中除了瘤細(xì)胞，還包括間質(zhì)細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）、血管和免疫細(xì)胞。腫瘤的演進(jìn)不僅是由癌基因和抑癌基因來(lái)調(diào)控，還依賴(lài)于由間質(zhì)形成的微環(huán)境的作用［6］。腫瘤細(xì)胞可通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤基質(zhì)（主要是成纖維細(xì)胞）表達(dá)FAP等一些基質(zhì)蛋白從而促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。這些基質(zhì)蛋白對(duì)腫瘤發(fā)生、生長(zhǎng)、血管形成，浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移有重要作用，并具有器官特異性［7］。許多體外實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明TAF有刺激腫瘤組織增殖的作用［8］。類(lèi)似的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步支持了以上結(jié)果［9］：將腫瘤細(xì)胞株接種于裸鼠時(shí)，TAF不僅可以縮短裸鼠成瘤的時(shí)間且提高了接種的成瘤率；同時(shí)可顯著減少接種細(xì)胞株總的劑量。以上研究結(jié)果都說(shuō)明成纖維細(xì)胞激活在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著誘導(dǎo)和協(xié)助的作用。

FAP是脯氨?；禺惖慕z氨酸寡肽酶家族成員之一，是由單克隆抗體F19識(shí)別的一種膜結(jié)合糖蛋白，由FAP-A和FAP-B兩個(gè)亞單位組成分子量為170 kDa的二聚體，僅選擇性表達(dá)于腫瘤微環(huán)境、愈合的創(chuàng)面及器官的生理性重建等。FAP可選擇性表達(dá)于90%以上的上皮源性惡性腫瘤的間質(zhì)成纖維細(xì)胞上，如胰腺癌、食管癌、宮頸癌等，另外FAP也表達(dá)于骨及骨髓中的惡性間葉細(xì)胞，皮膚黑色素瘤等［1］，但在正常組織中的成纖維細(xì)胞和良性腫瘤間質(zhì)中幾乎無(wú)陽(yáng)性表達(dá)，這提示其可能是一個(gè)增生性成纖維細(xì)胞的表面標(biāo)志物。體外研究表明，F(xiàn)AP具有膠原酶以及類(lèi)似二肽肽酶的活性，能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)組分，參與趨化因子和神經(jīng)肽的裂解，使癌細(xì)胞更容易脫離原來(lái)的位置，從而促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移和組織重塑。此外，F(xiàn)AP陽(yáng)性的腫瘤間質(zhì)細(xì)胞會(huì)抑制機(jī)體自身的抗腫瘤免疫反應(yīng)，從而協(xié)助腫瘤細(xì)胞躲避免疫攻擊.為腫瘤發(fā)展?fàn)I造更合適的微環(huán)境［10］。

本研究發(fā)現(xiàn)FAP在泌乳素腺瘤中均有陽(yáng)性表達(dá)（見(jiàn)封三圖1～4），但表達(dá)強(qiáng)度不同。在侵襲組呈強(qiáng)表達(dá)，在非侵襲組FAP呈弱表達(dá)，表達(dá)強(qiáng)度通過(guò)其OD值來(lái)表示，侵襲組約為非侵襲組的1.5倍。有研究顯示［11］在垂體腺瘤周?chē)材X膜的標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)，微腺瘤、大腺瘤及巨腺瘤的微侵襲率在80%以上且依次升高。相反，相同研究中的術(shù)中所見(jiàn)的腫瘤侵襲率僅40%左右。本實(shí)驗(yàn)中的“非侵襲組”的標(biāo)本也有陽(yáng)性表達(dá)正好驗(yàn)證了這一點(diǎn)，因?yàn)榭此品乔忠u性的腫瘤實(shí)際上已經(jīng)被“侵襲性”了。

FAP在腫瘤間質(zhì)中表達(dá)的作用機(jī)制尚未得到充分的闡明，現(xiàn)研究結(jié)果認(rèn)為，F(xiàn)AP的功能有以下幾種：降解細(xì)胞外基質(zhì)，腫瘤細(xì)胞的侵襲和參與腫瘤組織的重塑；可激活另一種蛋白酶原而間接起到降解的作用降解細(xì)胞外基質(zhì)；解離與降解細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合的生長(zhǎng)因子，如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、血小板生生長(zhǎng)因子等，使腫瘤向惡性轉(zhuǎn)化；參與腫瘤血管生成過(guò)程。有研究發(fā)現(xiàn)FAP的酶活性在細(xì)胞株移植成瘤系統(tǒng)中是必需的［12］。Loeffler等［13］構(gòu)建了一種口服的針對(duì)FAP靶點(diǎn)的DNA疫苗，在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)其能抑制小鼠結(jié)腸癌和乳腺癌生長(zhǎng)，在機(jī)體中并未發(fā)現(xiàn)影響傷口愈合或發(fā)生免疫降低等不良反應(yīng)。Kelly等［14］通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)提出，破壞FAP分子復(fù)合物阻斷后續(xù)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)可以實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的定點(diǎn)抑制。應(yīng)用FAP多克隆抗體處理移植瘤后可使腫瘤生長(zhǎng)減慢，同時(shí)有研究通過(guò)siRNA敲除FAP基因來(lái)達(dá)到抑制甚至逆轉(zhuǎn)FAP介導(dǎo)的侵襲［15］。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，F(xiàn)AP在侵襲性垂體腺瘤組中的表達(dá)強(qiáng)度與非侵襲組有顯著差異，提示FAP可能作為一種鑒別及判定預(yù)后的指標(biāo)。FAP可作為研究CAFs功能的新的靶點(diǎn)。但FAP的腫瘤生物學(xué)活性與腫瘤發(fā)展進(jìn)程、預(yù)后評(píng)估等方面還需要進(jìn)行進(jìn)一步的研究。

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Expression and its clinical significance of FAP in the prolactinoma

HAN Zongli1QI Hui1YIN Wei1DU Yanli2
1.Department of Neurosurgery，Peking University Shenzhen Hospital，Shenzhen 518036，China；2.School of Medical Technology and Nursing，Shenzhen Polytechnic，Shenzhen 518055，China

［Abstract］Objective To observe the difference of FAP expression in invasive or noninvasive prolactinoma and disscus the possible clinical applications. Methods Sixty cases of prolactinoma from February 2012 to January 2015 were enrolled，who were divided into invasive and noninvasive group according to the preoperative clinical data and intraoperative finding. The FAP expression in both invasive and noninvasive prolactinoma specimens were detected by immunohistochemical assay（S-P method）. Image dissector（IPP 7.0）was used to determine corresponding optical density（OD value）that represents its expression intensity. Results FAP was detected in the invasive prolactinoma of 87.5%（21/24）and 69.4%（25/36）in the noninvasive prolactinoma which was observed in the prolacinomas or in the cytoplasm of the tumor. The expression of OD values of the two groups were（0.2282±0.0553）and（0.1592±0.0662）respectively，the difference was statistically significant（P＜0.05）. Conclusion The FAP is expressed in both invasive and noninvasive prolatinomas with different expression intensity. FAP maybe used as a marker to distinguish invasive from noninvasive prolactinoma.

［Key words］Fibroblast activation protein（FAP）；Tumor stroma；Prolactinoma；Invasive

［中圖分類(lèi)號(hào)］R736.4；R730.231

［文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼］A

［文章編號(hào)］1673-9701（2016）10-0004-03

收稿日期：（2015-12-21）