黃毓麗，邱麗華

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sTWEAK、TNF-α和IL-10在卵巢上皮性癌患者血清中的表達(dá)及其意義

黃毓麗，邱麗華

【摘要】目的：檢測(cè)上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC）患者外周血可溶性腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導(dǎo)劑（soluble tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis，sTWEAK）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）和白細(xì)胞介素10 （IL-10）的表達(dá)水平，并分析其臨床意義。方法：選取2010年1月—2014年2月在上海交通大學(xué)附屬仁濟(jì)醫(yī)院住院手術(shù)的EOC患者和良性上皮性卵巢腫瘤患者共43例，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法檢測(cè)外周血血清中sTWEAK、TNF-α和IL-10的表達(dá)水平。結(jié)果：①與良性上皮性卵巢腫瘤組相比，EOC組的sTWEAK的表達(dá)水平升高（P＜0.05），TNF-α的表達(dá)水平升高（P＜0.01），IL-10的表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。②sTWEAK、TNF-α和IL-10在EOC患者血清中的表達(dá)水平在不同的臨床分期、病理類型、組織學(xué)分級(jí)以及腹水有無腫瘤細(xì)胞者中差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。③2組患者中sTWEAK的表達(dá)與TNF-α呈正相關(guān)（rs=0.505，P=0.001），而sTWEAK與IL-10無相關(guān)性（rs=0.154，P= 0.325）。結(jié)論：sTWEAK、TNF-α與EOC的發(fā)生密切相關(guān)，sTWEAK高表達(dá)者血清TNF-α表達(dá)也高。

【關(guān)鍵詞】卵巢腫瘤；腫瘤壞死因子α；白細(xì)胞介素10；可溶性腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導(dǎo)劑；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定

作者單位：202150上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院崇明分院婦產(chǎn)科（黃毓麗）；上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院婦產(chǎn)科，上海市婦科腫瘤重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（邱麗華）

（J Int Obstet Gynecol，2016,43：84-86）

腫瘤壞死因子樣凋亡微弱誘導(dǎo)劑（tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis，TWEAK）在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要的生物學(xué)效應(yīng)[1]。已知循環(huán)血漿中存在TWEAK蛋白水解產(chǎn)生的可溶性TWEAK（sTWEAK）[2]。以往的研究發(fā)現(xiàn)外周血血清中sTWEAK的表達(dá)與上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer，EOC）的發(fā)生密切相關(guān)，且有可能成為判斷卵巢腫瘤良惡性的新型血清學(xué)標(biāo)記[3-4]。為了進(jìn)一步探討EOC患者外周血sTWEAK表達(dá)與其免疫功能的關(guān)系，本課題擬研究EOC患者外周血血清中sTWEAK、腫瘤壞死因子α（TNF-α）和白細(xì)胞介素10（IL-10）的表達(dá)及其相關(guān)性。

1　對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象選取2010年1月—2014年2月上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院收治的23例良性上皮性卵巢腫瘤和20例EOC患者，2組患者的平均年齡分別為（48.57±17.51）歲和（57.80±12.51）歲，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.008，P=0.052）。所有患者均經(jīng)手術(shù)病理證實(shí)，術(shù)前均未經(jīng)放、化療治療。EOC病理類型：漿液性囊腺癌11例，黏液性囊腺癌3例，透明細(xì)胞癌3例，子宮內(nèi)膜樣腺癌3例；病理分級(jí)按2003年世界衛(wèi)生組織（WHO）使用的卵巢癌組織學(xué)類型分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：G1～G2級(jí)8例，G3級(jí)12例；臨床分期根據(jù)2010年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ～Ⅱ期6例，Ⅲ～Ⅳ期14例。所有患者臨床病歷資料完整，試驗(yàn)獲患者本人知情同意并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法研究對(duì)象空腹抽取肘正中靜脈血2 mL，經(jīng)高速離心分離后取血清置于-20℃凍存?zhèn)溆谩２捎妹嘎?lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)外周血sTWEAK、TNF-α和IL-10的表達(dá)水平。ELISA試劑盒購(gòu)自上海優(yōu)寧維生物科技有限公司，操作方法參照說明書。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。定量資料經(jīng)檢驗(yàn)不符合正態(tài)分布，采用中位數(shù)和四分位數(shù)[M（P25，P75）]表示，2組比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，多組比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman相關(guān)分析。所有檢驗(yàn)均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.12組患者血清sTWEAK、TNF-α和IL-10表達(dá)水平EOC組的sTWEAK和TNF-α表達(dá)水平均高于良性上皮性卵巢腫瘤組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；而2組患者IL-10的表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。對(duì)所有患者sTWEAK、TNF-α和IL-10的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，sTWEAK的表達(dá)與TNF-α呈正相關(guān)（rs=0.505，P= 0.001），而與IL-10水平無相關(guān)性（rs=0.154，P= 0.325）。

表12　組患者血清sTWEAK、TNF-α和IL-10的表達(dá)水平　M（P25，P75）

2.2EOC組患者臨床資料分析將EOC患者分別按照臨床分期、組織學(xué)分級(jí)和病理類型分組，各亞組之間sTWEAK、TNF-α和IL-10表達(dá)水平差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。20例EOC患者中有16例患者有腹水，其腹水中腫瘤細(xì)胞陽性者的sTWEAK、TNF-α和IL-10表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞陰性者比較，差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2　EOC組患者臨床資料分析M（P25，P75）

3　討論

TWEAK廣泛表達(dá)在胰腺、腸、心臟、肺、腦、卵巢、血管系統(tǒng)、骨骼、肌肉、肝、腎[2]。其主要與其受體——成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)14（fibroblast growth factor-inducible 14，F(xiàn)n14）結(jié)合，介導(dǎo)多種生物學(xué)作用，如生成促炎性細(xì)胞因子、細(xì)胞增殖、存活、遷移和凋亡等。有研究發(fā)現(xiàn)，促炎性細(xì)胞因子和抗炎性細(xì)胞因子可能都具有調(diào)節(jié)腫瘤生長(zhǎng)以及機(jī)體抗腫瘤免疫的作用。其中，TNF-α主要由活化的單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，具有直接殺傷腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)巨噬細(xì)胞、自然殺傷（NK）細(xì)胞、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞等免疫活性細(xì)胞的細(xì)胞毒效應(yīng)，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和分化等功能。Johansson等[5]發(fā)現(xiàn)小劑量TNF-α具有促進(jìn)血管重鑄和抗腫瘤免疫應(yīng)答的作用，可作為主動(dòng)免疫治療的有效佐劑。IL-10是一種多功能負(fù)性調(diào)節(jié)因子，主要由Th2細(xì)胞、活化的B細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，其參與免疫細(xì)胞、炎癥細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等多種細(xì)胞的生物調(diào)節(jié)，在自身免疫性疾病、嚴(yán)重感染性疾病、腫瘤及移植免疫等多種疾病中發(fā)揮重要作用。Zhou等[6]研究發(fā)現(xiàn)，卵巢癌患者的卵巢組織、血清以及腹水中的IL-10均顯著高于良性卵巢腫瘤患者及正常卵巢患者，提示IL-10的表達(dá)與卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。另有研究發(fā)現(xiàn)IL-10具有免疫刺激功能，可能發(fā)揮促癌作用，亦有可能發(fā)揮抑癌作用[7]。Candido等[8]發(fā)現(xiàn)EOC患者卵巢組織和外周血中TNF-α、IL-4、IL-6和IL-10的表達(dá)水平均高于卵巢正常的其他婦科疾病患者，其中Ⅲ/Ⅳ期EOC患者的IL-10 和TNF-α表達(dá)水平較高，且伴有較高水平的CA125。而且，EOC患者中未行滿意腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)的患者和低分化腫瘤患者的IL-6和IL-10表達(dá)水平較高，且總生存率較低。本研究發(fā)現(xiàn)，與良性卵巢上皮性腫瘤患者相比，EOC患者外周血血清IL-10的表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而TNF-α的表達(dá)顯著增加，且這兩種細(xì)胞因子的表達(dá)水平在EOC患者不同的病理類型、臨床分期、組織學(xué)分級(jí)以及腹水中有無腫瘤細(xì)胞者差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示外周血TNF-α水平與EOC的發(fā)生密切相關(guān)，但其不能反映EOC的腫瘤進(jìn)展程度，而IL-10則與EOC的發(fā)生和腫瘤進(jìn)展程度無關(guān)。本研究結(jié)果與上述研究結(jié)果不盡相同，這可能與細(xì)胞因子的表達(dá)個(gè)體差異大及本研究病例數(shù)少有關(guān)。

TWEAK具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用，人非特異性免疫細(xì)胞——NK細(xì)胞、樹突細(xì)胞（DC）和巨噬細(xì)胞均表達(dá)TWEAK及其受體Fn14，而特異性免疫細(xì)胞——T細(xì)胞和B細(xì)胞基本不表達(dá)TWEAK。TWEAK可通過抑制NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生γ干擾素（IFN-γ）和IL-12，促進(jìn)NK細(xì)胞發(fā)生活化誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡（AICD）來抑制非特異性免疫應(yīng)答[9]。Kaduka等[10]發(fā)現(xiàn)，腹腔及皮下接種TWEAK敏感的Fn14受體陽性腫瘤細(xì)胞的小鼠，TWEAK在其體內(nèi)可介導(dǎo)巨噬細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)。以往的研究將巨噬細(xì)胞與EOC細(xì)胞HO-8910PM共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)TWEAK可刺激巨噬細(xì)胞分泌TNF-α，TWEAK和TNF-α具有協(xié)同抑制EOC細(xì)胞的侵襲能力的作用，提示TWEAK介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞抗腫瘤作用可能與其調(diào)節(jié)TNF-α的表達(dá)有關(guān)[3]。Park等[11]研究發(fā)現(xiàn)與正常外耳道皮膚相比，中耳膽脂瘤組織中TWEAK和TNF-α的蛋白表達(dá)水平均顯著增加，且TWEAK與TNF-α的表達(dá)水平密切相關(guān)，提示在中耳膽脂瘤中TWEAK具有調(diào)節(jié)TNF-α表達(dá)的作用。本研究發(fā)現(xiàn)EOC患者外周血sTWEAK及TNF-α在EOC中的表達(dá)水平較良性上皮性卵巢腫瘤顯著升高，且sTWEAK的表達(dá)與TNF-α的表達(dá)呈正相關(guān)，提示在EOC患者中sTWEAK同樣具有調(diào)節(jié)TNF-α表達(dá)的作用。鑒于本研究發(fā)現(xiàn)sTWEAK和TNF-α的表達(dá)與EOC進(jìn)展無關(guān)，sTWEAK調(diào)節(jié)TNF-α表達(dá)是否進(jìn)一步與EOC患者預(yù)后有關(guān)，尚待對(duì)隨訪患者的5年生存率和無瘤生存期加以探討闡明。

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[本文編輯王昕]

Serum sTWEAK，TNF-α and IL-10 Expression and Their Clinical Significance in Epithelial Ovarian Cancer Patients

HUANG Yu-li，QIU Li-hua.Department of Obstetrics and Gynecology，Xinhua Hospital Chongming Branch，School of Medicine，Shanghai Jiao Tong University，Shanghai 202150，China（HUANG Yu-li）；Department of Obstetrics and Gynecology，Shanghai Key Laboratory of Gynecologic Oncology，Renji Hospital，School of Medicine，Shanghai Jiao Tong University，Shanghai 200127，China （QIU Li-hua）
Corresponding author：QIU Li-hua，E-mail：Lilyqiulh@126.com

【Abstract】Objective：To explore the expression level and clinical implications of serum sTWEAK，TNF-α and IL-10 in epithelial ovarian cancer（EOC）patients.Methods：Totally 43 patients with EOC（EOC group）and benign epithelial ovarian tumor（BOT group）were selected from Renji Hospital，School of Medicine，Shanghai Jiao Tong University.These patients were admitted to the hospital during the period from January 2010 to February 2014.The levels of serum sTWEAK，TNF-α and IL-10 were detected by ELISA.Results：①Compared to the BOT group，the expression levels of sTWEAK（P＜0.05）and TNF-α（P＜0.01）were significantly increased in the EOC group，the elevation of IL-10 level was not significant（P＞0.05）.②The expression levels of sTWEAK，TNF-α and IL-10 in peripheral serum in EOC group were not significantly different with different clinical stages，pathological types，histological grade and ascites presence of tumor cells（P＞0.05）.③In both two groups，the expression level of sTWEAK was positively correlated with serum TNF-α（rs=0.505，P=0.001）and was no correlation with serum IL-10（rs=0.154，P=0.325）.Conclusions：Serum sTWEAK and TNF-α expression levels were closely correlated with the pathogenesis of EOC.In patients with high sTWEAK expression，the expression of TNF-α was dominant.

【Keywords】Ovarian neoplasms；Tumor necrosis factor-alpha；Interleukin-10；sTWEAK；Enzyme-linked immunosorbent assay

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（81272884）

通信作者：邱麗華，E-mail：Lilyqiulh@126.com

收稿日期：（2015-05-13）