張小村,孔凡美,郭　軍,孔令讓

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東 泰安　271018;2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué),土肥資源高效利用國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室,山東 泰安　271018;3.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院,作物生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 泰安　271018)

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中國(guó)春-長(zhǎng)穗偃麥草異代換系、異附加系的氮營(yíng)養(yǎng)性狀

張小村1,孔凡美2,郭軍3,孔令讓3

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東 泰安271018;2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué),土肥資源高效利用國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室,山東 泰安271018;3.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院,作物生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 泰安271018)

摘要：為從小麥近緣植物長(zhǎng)穗偃麥草中尋找氮高效基因,在高、低氮2個(gè)水平下,以中國(guó)春-長(zhǎng)穗偃麥草二體異附加系和二體異代換系為試材,對(duì)其氮素利用特性進(jìn)行了鑒定和遺傳分析。結(jié)果表明:5E附加系氮素生理利用效率在低氮處理下極顯著高于對(duì)照中國(guó)春，5E代換系氮素生理利用效率在高氮處理下顯著高于對(duì)照中國(guó)春，4E代換系氮素總累積量和籽粒氮累積量在高、低氮處理下均顯著高于對(duì)照中國(guó)春，表明5E和4E染色體可能分別攜有促進(jìn)氮素生理利用效率和促進(jìn)氮素吸收轉(zhuǎn)運(yùn)的高效基因，長(zhǎng)穗偃麥草5E和4E染色體可以作為提高小麥氮營(yíng)養(yǎng)特性的有益基因資源。

關(guān)鍵詞：長(zhǎng)穗偃麥草;二體異代換系;二體異附加系;氮效率

小麥(Triticumaestivum,AABBDD)是世界上僅次于水稻的第二大糧食作物,是我國(guó)第三大糧食作物,也是我國(guó)重要的商品糧和戰(zhàn)略?xún)?chǔ)備糧,在國(guó)家糧食安全中具有突出地位。氮肥作為生命元素,在保障小麥高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)中具有重要作用[1-3]。我國(guó)小麥每年的氮肥用量高達(dá) 5 426 kg/hm2[4],但是氮肥利用率僅為22.4%～38.5%[5],損失的氮肥給環(huán)境帶來(lái)了巨大壓力[6-7]。提高氮肥利用率對(duì)于減少小麥生產(chǎn)成本、保護(hù)環(huán)境均具有重要現(xiàn)實(shí)意義。充分挖掘小麥的遺傳潛力,培育氮高效小麥品種,是提高氮肥利用效率的重要途徑之一。然而,由于小麥遺傳基礎(chǔ)狹窄,其本身可利用的氮高效遺傳資源貧乏,嚴(yán)重阻礙了小麥氮高效育種進(jìn)展[8]。而小麥的野生近緣植物中含有豐富的有益基因,因此,從小麥野生近緣植物中尋找氮高效基因,對(duì)于小麥氮高效遺傳改良具有十分重要的意義。

長(zhǎng)穗偃麥草(Agropyronelongatum,2n=2x=14,EE)是小麥近緣野生種,具有抗病性強(qiáng)、抗逆性好等特點(diǎn)。研究結(jié)果表明,長(zhǎng)穗偃麥草3E、4E染色體可能含有改良小麥光合作用的高光效基因[9],1E、7E染色體含有抗赤霉病主效基因[10],4E、6E染色體攜有耐低磷營(yíng)養(yǎng)脅迫基因[11],2E、4E染色體對(duì)提高小麥旗葉光合速率的效應(yīng)明顯,3E、4E及6E染色體上可能攜有對(duì)提高小麥產(chǎn)量有利的基因[12],另外,4E染色體上還可能攜有K/Na判別基因,這種基因的耐鹽功能要強(qiáng)于普通小麥4D染色體上的相關(guān)基因[13]。并且,長(zhǎng)穗偃麥草E基因組與小麥A、B、D基因組的遺傳分化程度相對(duì)較小,容易與普通小麥雜交并實(shí)現(xiàn)遺傳重組。因此,長(zhǎng)穗偃麥草已成為普通小麥遺傳改良不可多得的重要野生近緣物種之一[14-19]。然而,有關(guān)長(zhǎng)穗偃麥草E組染色體在小麥背景中對(duì)氮素利用效率的研究還鮮見(jiàn)報(bào)道。

本試驗(yàn)采用普通小麥中國(guó)春為對(duì)照，以中國(guó)春的長(zhǎng)穗燕麥草E基因組附加系、代換系為供試材料,通過(guò)研究不同附加系、代換系材料氮效率的變化,探討長(zhǎng)穗偃麥草基因組中可能與氮效率有關(guān)基因的染色體定位,為利用染色體工程或基因工程手段將有關(guān)基因?qū)肫胀ㄐ←?以改良這一重要特性提供材料。

1材料和方法

1.1試驗(yàn)材料

普通小麥中國(guó)春-長(zhǎng)穗偃麥草(Agropyronelongatum,2n=2x=14,EE)二體異代換系(Disomic substitution lines,DS)7份,分別標(biāo)記為:DS1E(1D)、DS2E(2D)、DS3E(3D)、DS4E(4D)、DS5E(5D)、DS6E(6D)、DS7E(7D),在這些試材中,普通小麥-中國(guó)春的1D-7D染色體分別被長(zhǎng)穗偃麥草的1E-7E染色體所替代;普通小麥中國(guó)春-長(zhǎng)穗偃麥草二體異附加系(Disomic addition lines,DA)7份,分別標(biāo)記為:DA1E、DA2E、DA3E、DA4E、DA5E、DA6E、DA7E;這些試材中,普通小麥-中國(guó)春的正常染色體組中又分別附加了長(zhǎng)穗偃麥草的1E-7E染色體。

1.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)施方法

采用田間盆栽試驗(yàn),試驗(yàn)設(shè)置了低氮和高氮2個(gè)處理,完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì),重復(fù)3次。于2009-2010年在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)試驗(yàn)基地進(jìn)行,試驗(yàn)用土系潮土,基礎(chǔ)土壤pH值 8.1、有機(jī)質(zhì)18.087 g/kg、全氮1.030 g/kg、全磷0.718 g/kg、堿解氮121.367 mg/kg、速效磷(Olsen-P)8.117 mg/kg、速效鉀(NH4OAC-K)63.248 mg/kg。供試土壤過(guò)篩3次,肥料與土壤混勻后裝盆,每盆6.0 kg。每盆施P2O5(NaH2PO4)0.412g、K2O (K2SO4)0.594 g作為基肥,氮肥用量為低氮處理施用純氮(尿素)0.9 g;高氮處理施用純氮(尿素)2.7 g,其中40%做基肥,60% 在拔節(jié)期做追肥。

每盆混肥裝土后壓實(shí)、澆水,將盆子埋入土中15 cm,均勻播種5粒種子,出苗后留苗勢(shì)一致的幼苗3株。根據(jù)土壤含水量澆水,每盆澆水量保持一致。2010年6月8日收獲,分別將葉片、穎殼、籽粒裝入紙質(zhì)信封袋,烘箱70 ℃烘48 h,籽粒自然風(fēng)干。分別測(cè)量地上部和籽粒重量,同時(shí)分別測(cè)定地上部和籽粒氮濃度。

1.3相關(guān)指標(biāo)測(cè)定及計(jì)算方法

氮素濃度測(cè)定:硫酸-雙氧水消解,凱氏定氮法測(cè)定;收獲指數(shù)(Harvest index,HI(mg/mg)):籽粒產(chǎn)量/地上部總干物質(zhì)量×100%;氮素總累積量(Total nitrogen accumulation,TNA(mg/株)):單株地上部氮素累積量的總和;籽粒氮累積量(Grain nitrogen accumulation,GNA(mg/株)):單株籽粒氮素累積量的總和;氮素生理利用效率 (Nitrogen physiological efficiency,NPE(mg/mg)):地上部干質(zhì)量/地上部氮累積量;氮素利用效率 (Nitrogen use efficiency,NUE(mg/mg)):籽粒產(chǎn)量/地上部氮累積量。

1.4數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì):采用SPSS 18.0分析軟件進(jìn)行方差分析。

2結(jié)果與分析

2.1小麥中國(guó)春-長(zhǎng)穗偃麥草異代換系和長(zhǎng)穗偃麥草異附加系干物質(zhì)累積分析

相同氮處理下作物的生物量及籽粒產(chǎn)量的高低是評(píng)價(jià)其特定條件下不同材料養(yǎng)分效率差異的重要表觀(guān)指標(biāo)。以中國(guó)春作為參比,比較中國(guó)春-長(zhǎng)穗偃麥草異代換系和長(zhǎng)穗偃麥草異附加系與小麥中國(guó)春生物量及產(chǎn)量的差異能夠明確不同氮處理?xiàng)l件下E染色體代換及附加對(duì)生物產(chǎn)量及籽粒產(chǎn)量的影響。

2.1.1小麥中國(guó)春-長(zhǎng)穗偃麥草異代換系的干物質(zhì)累積由表1看出，高氮處理下的DS5E(5D)總干物質(zhì)量顯著高于對(duì)照中國(guó)春。高氮處理下DS1E(1D)收獲指數(shù)極顯著低于中國(guó)春，DS5E(5D)的收獲指數(shù)顯著低于中國(guó)春。

2.1.2小麥中國(guó)春-長(zhǎng)穗偃麥草異附加系干物質(zhì)累積低氮處理下,DA5E總干物質(zhì)量極顯著高于對(duì)照中國(guó)春,高氮處理下,DA5E總干物質(zhì)量也高于對(duì)照小麥中國(guó)春,這表明5E染色體含有能增加總生物量的基因。然而,1E-7E附加系單株籽粒產(chǎn)量在高、低氮處理下均低于對(duì)照小麥中國(guó)春。特別是低氮處理下的DA1E、DA2E、DA3E附加系和在高氮處理下的DA1E附加系,其籽粒產(chǎn)量均顯著或極顯著低于對(duì)照小麥中國(guó)春,表明這些染色體可能含有對(duì)產(chǎn)量不利的基因。尤其是1E附加系,在高低氮處理下單株籽粒產(chǎn)量均顯著或極顯著低于對(duì)照中國(guó)春(表1),表明這些染色體特別是1E染色體可能含有對(duì)產(chǎn)量不利的基因。在高、低氮處理下,1E-7E附加系收獲指數(shù)均低于或顯著低于對(duì)照小麥中國(guó)春。

表1　小麥中國(guó)春-長(zhǎng)穗偃麥草異代換系和異附加系干物質(zhì)累積比較

注:*、**.0.05和0.01水平上與背景親本中國(guó)春差異顯著。表2同。

Note:*,**.Significant difference with Chinese Spring at 0.05 and 0.01 level.The same as Tab.2.

2.2小麥中國(guó)春-長(zhǎng)穗偃麥草異代換系和異附加系氮營(yíng)養(yǎng)性狀的差異

2.2.1小麥中國(guó)春-長(zhǎng)穗偃麥草異附加系氮素累積量與氮素利用效率由表2看出,在高、低氮處理下,DA5E氮素總累積量、籽粒氮累積量均高于對(duì)照中國(guó)春,但差異不顯著，表明5E染色體可能攜有氮高效吸收基因。同時(shí),低氮處理下,DA5E氮素生理利用效率極顯著高于對(duì)照小麥中國(guó)春,表明5E染色體可能攜有氮素生理利用高效基因。

低氮處理下,DA2E氮素總累積量、籽粒氮累積量均顯著低于對(duì)照小麥中國(guó)春,這表明低氮條件下,2E染色體可能攜有強(qiáng)烈抑制氮素吸收的基因。高氮處理下,DA2E氮素生理利用效率顯著低于對(duì)照小麥中國(guó)春,表明2E染色體可能攜有抑制氮素生理利用效率的基因。

不論在高氮還是低氮處理下,1E-7E附加系氮素利用效率均低于對(duì)照小麥中國(guó)春,特別是低氮處理下,DA1E、DA2E、DA5E附加系的氮素利用效率極顯著低于對(duì)照小麥中國(guó)春,高氮處理下,DA1E、DA2E、DA3E附加系氮素利用效率顯著或極顯著低于對(duì)照小麥中國(guó)春,表明這些染色體上可能攜有強(qiáng)烈抑制氮素利用效率的基因。

2.2.2小麥中國(guó)春-長(zhǎng)穗偃麥草異代換系氮素累積量與氮素利用效率在高、低氮處理下，DS4E(4D)氮素總累積量和籽粒氮累積量均顯著高于對(duì)照中國(guó)春，這表明4E染色體可能攜有促進(jìn)氮素吸收及向籽粒轉(zhuǎn)移累積的高效基因。高氮處理下，DS5E(5D)的氮素總累積量和籽粒氮累積量均顯著高于對(duì)照中國(guó)春。低氮處理下，DS1E(1D)的氮素生理利用效率顯著高于對(duì)照中國(guó)春，DS2E(2D)、DS3E(3D)、DS4E(4D)和DS6E(6D)的氮素生理利用效率顯著低于對(duì)照中國(guó)春。高氮處理下，5E代換系氮素生理利用效率顯著高于對(duì)照中國(guó)春。低氮處理下，1E-6E代換系氮素利用效率均極顯著低于對(duì)照中國(guó)春。

表2　不同氮處理下小麥中國(guó)春-長(zhǎng)穗偃麥草異代換系和異附加系氮營(yíng)養(yǎng)性狀相關(guān)指標(biāo)

3討論

已有研究表明長(zhǎng)穗偃麥草染色體攜有大量對(duì)小麥改良有益的基因,比如,長(zhǎng)穗偃麥草4E染色體可能攜有與耐低磷脅迫特性有關(guān)的主效基因[11]、抗赤霉病基因[10]、決定總根長(zhǎng)和根系總表面積相關(guān)基因[20]、K/Na判別基因[13]等。本試驗(yàn)表明,長(zhǎng)穗偃麥草4E染色體可能攜有增加單株粒重的相關(guān)基因,其代換系的單株粒重在高、低氮處理下均高于對(duì)照小麥中國(guó)春。陳士強(qiáng)等[12]研究也表明,4E染色體對(duì)小麥千粒質(zhì)量和收獲指數(shù)有顯著和極顯著的提高作用,整體上對(duì)單穗籽粒產(chǎn)量也有提高作用,這說(shuō)明長(zhǎng)穗偃麥草4E染色體對(duì)小麥產(chǎn)量的提高有正向效益。

然而,本研究中低氮和高氮處理下,4E代換系的收獲指數(shù)小于小麥中國(guó)春,4E染色體對(duì)小麥中國(guó)春收獲指數(shù)表現(xiàn)了明顯的負(fù)效應(yīng),這與陳士強(qiáng)等[12]的研究結(jié)果不同。收獲指數(shù)是籽粒產(chǎn)量與地上部總干質(zhì)量的比例,相對(duì)低的籽粒產(chǎn)量或相對(duì)高的地上部總干質(zhì)量均可能導(dǎo)致收獲指數(shù)偏低。本研究中4E代換系的粒重高于對(duì)照小麥中國(guó)春,而收獲指數(shù)又低于小麥中國(guó)春,這可能是因?yàn)?E染色體不但對(duì)籽粒產(chǎn)量有正效應(yīng),對(duì)地上部總干質(zhì)量也有正效應(yīng),而本試驗(yàn)中4E代換系的粒重在高、低氮處理下分別比對(duì)照中國(guó)春提高0.99%和6.83%,而總干質(zhì)量則分別比對(duì)照中國(guó)春提高12.89%和17.83%,可見(jiàn),4E代換系收獲指數(shù)的負(fù)效應(yīng)是由于4E染色體對(duì)地上部總干質(zhì)量的效應(yīng)高于其對(duì)單株籽粒產(chǎn)量的效應(yīng)。

本試驗(yàn)中,4E染色體代換系的氮素總累積量在低氮和高氮條件下均高于小麥中國(guó)春處理,但是其生理利用效率和氮素利用效率在低氮條件下均顯著低于中國(guó)春，在高氮條件下與中國(guó)春無(wú)顯著差異。這表明,盡管長(zhǎng)穗偃麥草4E染色體可能含有氮高效吸收基因,然而,由于4E代換系是外源4E染色體替換掉了普通小麥的4D染色體,在這個(gè)過(guò)程中,普通小麥本身的相對(duì)遺傳平衡被打破,外源基因與普通小麥的核基因或與細(xì)胞質(zhì)基因發(fā)生了一系列有利或不利的互作。而普通小麥經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期人工馴化,基因組之間已經(jīng)形成復(fù)雜又高度協(xié)調(diào)的有機(jī)整體[21-23],因此,其物質(zhì)分配與代換系相比更加協(xié)調(diào)。

此外，高氮處理下， 5E代換系的氮素總累積量、籽粒氮素累積量及氮素生理利用效率顯著高于對(duì)照中國(guó)春，表明5E染色體可能攜有高氮條件下氮素高效吸收及氮素生理利用高效的基因。因此，長(zhǎng)穗偃麥草4E、5E染色體可以作為改良小麥氮高效特性的有益基因資源。

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The Nitrogen Use Efficiency inTriticumaestivum-Agropyronelongatumwith Chinese Spring Background under Different Nitrogen Treatments

ZHANG Xiaocun1,KONG Fanmei2,GUO Jun3,KONG Lingrang3

(1.College of Food Science and Engineering,Shandong Agricultural University,Taian271018,China;2.National Engineering Laboratory for Efficient Utilization of Soil and Fertilizer,Shandong Agricultural University,Taian271018,China;3.College of Agronomy,Shandong Agricultural University,State Key Laboratory of Crop Biology,Taian271018,China)

Abstract：The nitrogen(N) use efficiency was studied with one set of the disomic substitution lines and disomic addition lines of Triticum aestivum L.cv.Chinese Spring(CS)-Agropyron elongatum (Host)under high and low N levels.The 5E genomes of Agropyron elongatum might confer high N physiological efficiency genes because the substitution and addition lines of 5E achieved remarkable higher N physiological efficiency values than Chinese Spring in low and high N treatment,respectively.The 4E genomes of Agropyron elongatum might confer high N absorption and transfer efficient genes because the substitution line of 4E achieved significantly higher values of total N accumulation and grain N content than Chinese Spring in high and low N treatments.Therefore,the chromosomes of 5E and 4E of Agropyron elongatum would be useful genetic resources to improve wheat N efficient features.

Key words:Agropyron elongatum;Disomic substitution;Disomic addition;Nitrogen use efficiency

doi:10.7668/hbnxb.2016.02.026

中圖分類(lèi)號(hào)：S143.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1000-7091(2016)02-0159-05

作者簡(jiǎn)介：張小村(1978-),男,山東安丘人,講師,博士,主要從事小麥遺傳育種以及農(nóng)產(chǎn)品加工研究。通訊作者：孔令讓(1963-),男,山東菏澤,教授,博士,主要從事小麥遺傳育種研究。

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31171553)

收稿日期：2016-02-18