譚 萍，王仁剛，田 紅，林世鋒，賈蒙驁，楊志曉，李 莉

（1.貴州市農(nóng)業(yè)試驗中心，貴州 貴陽 550007；2.貴州省煙草科學研究院，貴州 貴陽550081；3.貴州師范大學，貴州 貴陽 550001）

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兩種煙草根結線蟲生防菌對土壤中微生物數(shù)量的影響

譚 萍1，王仁剛2，田 紅1，林世鋒2，賈蒙驁2，楊志曉2，李 莉3

（1.貴州市農(nóng)業(yè)試驗中心，貴州 貴陽 550007；2.貴州省煙草科學研究院，貴州 貴陽550081；3.貴州師范大學，貴州 貴陽 550001）

摘 要：以前期篩選出的對煙草根結線蟲防治效果較好的兩種擔子菌進行田間試驗，研究不同處理下煙草根際土壤中可培養(yǎng)真菌、細菌及放線菌的變化。結果表明：兩種生防擔子菌有效抑制了煙草根際中煙草根結線蟲二齡幼蟲的數(shù)量，還能顯著增加土壤中可培養(yǎng)真菌、細菌及放線菌數(shù)量；其中，毛頭鬼傘菌對土壤中可培養(yǎng)放線菌數(shù)量的影響最為顯著。

關鍵詞：煙草根結線蟲；生防菌；土壤微生物

煙草根結線蟲病是我國煙草生產(chǎn)的主要病害之一，分布范圍十分廣泛，對煙草品質影響較大[1]。長期以來，對該病的防治主要以化學藥劑為主，導致了一系列的副作用，如產(chǎn)生抗藥性、破壞生態(tài)平衡和污染環(huán)境等。近年來，符合現(xiàn)代環(huán)保和健康理念的生物防治方法受到各國的重視。因此，研究選用兩種防治煙草根結線蟲的生防菌進行田間試驗，觀測生防菌對煙草根圍土壤中可培養(yǎng)真菌、細菌和放線菌數(shù)量的影響，以期為煙草根結線蟲病的生物防治提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1試驗材料

供試菌株為毛頭鬼傘菌（Coprinus comatus）和P.ox1（P. ostreatus的馴化型）；供試藥劑為阿維菌素；供試烤煙品種為NC82，是煙草根結線蟲病感病品種。

1.2試驗方法

1.2.1試驗設計 試驗在貴州省福泉市煙草科學研究院實驗基地進行，選擇往年根結線蟲病發(fā)病較重的地塊為試驗田。田間試驗共設6個處理，分別為：毛頭鬼傘菌（500 g/株）、P.ox1（500 g/株）、C1（阿維菌素）、C2（滅菌玉米芯；500 g/株）、C3（阿維菌素+玉米芯）、CK（不作任何處理）。處理15～20 d后移栽壯苗，CK不作任何處理。小區(qū)為單行區(qū)，種煙50株/區(qū)。每個處理設3次重復，隨機區(qū)組排列，共18個小區(qū)。小區(qū)四周設保護行，按優(yōu)質煙栽培規(guī)范化管理。

1.2.2考察指標及方法 （1）土樣的采集。6～9月，每隔20 d左右取土樣1次。采用多點取樣法每點用土鉆采集0～30 cm土層，每個處理取3個點，土樣帶回實驗室做進一步處理。（2）線蟲的分離。將土樣混合均勻后從中取出100 g土樣，采用貝漫漏斗法分離線蟲，48 h后收集線蟲懸浮液，將蟲殺死后用TAF固定液固定，參照方中達[2]的方法進行鑒定。（3）土壤中真菌、細菌及放線菌的分離 采用震蕩稀釋分離法，稱取發(fā)病地區(qū)的根系和土壤10 g，加入盛放了90 mL無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，震蕩20 min，使土樣與水充分混合，靜置5 min，制成稀釋10倍的土壤懸液。將其作為原液進行梯度稀釋，吸取1 mL原液放入裝有9 mL滅菌水的試管中充分混勻，制成了稀釋100倍的土壤懸液，以此類推制成稀釋103、104、105、106倍的土壤懸液，采用馬丁氏、牛肉膏蛋白胨和改良高氏1號3種培養(yǎng)基分別進行真菌、細菌和放線菌的分離，培養(yǎng)條件見表1。

表1　3類微生物的分離和培養(yǎng)

2　結果與分析

2.1不同處理土壤中煙草根結線蟲二齡幼蟲密度變化

根結線蟲是固著性內(nèi)寄生線蟲，在煙草根圍土壤中廣泛存在。煙草根結線蟲二齡幼蟲是其唯一的侵染蟲態(tài)[3]。從圖1中可以看出，毛頭鬼傘菌和P.ox1菌處理以及C1處理的后期對煙草根結線蟲二齡幼蟲的數(shù)量抑制效果明顯優(yōu)于其他處理；這表明在大田中施用生防菌毛頭鬼傘菌和P.ox1菌能顯著降低煙草根際土壤中根結線蟲的數(shù)量。C2和C3處理的前期煙草根結線蟲二齡幼蟲的數(shù)量持續(xù)緩慢增加，而后期煙草根結線蟲二齡幼蟲數(shù)量陡增，這種現(xiàn)象可能與處理中玉米芯的施用有關。

圖1　不同處理煙草根結線蟲二齡幼蟲的數(shù)量變化

2.2不同處理對煙草根圍土壤中可培養(yǎng)真菌數(shù)量的影響

土壤微生物系統(tǒng)中的第三大類群真菌直接參與土壤中有機質的分解、腐殖質和團聚體的形成以及土壤中的氨化作用[4]。由圖2可知，兩個生防菌及C2處理的可培養(yǎng)真菌數(shù)量呈現(xiàn)出持續(xù)上升的趨勢，且P.ox1處理后期土壤中可培養(yǎng)真菌數(shù)量顯著多余其他處理；C3處理前期的真菌數(shù)量幾乎沒有變化，可能是前期阿維菌素的作用抑制了真菌的生長，到后期藥效減弱，玉米芯給煙草根結線蟲二齡幼蟲及土壤中真菌提供了更多的生存條件所致。

圖2　不同處理煙草根圍土壤中可培養(yǎng)真菌數(shù)量的變化

2.3不同處理對煙草根圍土壤中可培養(yǎng)細菌數(shù)量的影響

從圖3中可以看出，毛頭鬼傘菌P.ox1及C2處理在初始期土壤中可培養(yǎng)細菌數(shù)量顯著多于其他處理，這可能與添加的外源物質為細菌生長提供了良好的生存環(huán)境及營養(yǎng)物質有關。隨著時間的推移，細菌不斷繁殖，生存空間逐漸縮小，可利用的基質也逐漸減少，不同處理土壤中的細菌數(shù)量均呈現(xiàn)下降趨勢。不同的是C2處理后期土壤中細菌數(shù)量呈緩慢持續(xù)上升趨勢，而毛頭鬼傘菌和P.ox1處理土壤中細菌數(shù)量呈現(xiàn)出先升后降的趨勢，出現(xiàn)第二個高峰，且毛頭鬼傘菌處理土壤中可培養(yǎng)細菌數(shù)量顯著高于其他處理，這可能是因為土壤中的有機質漸漸腐解，為微生物活動提供了持續(xù)碳源和能源。而 C1、C3處理前期土壤中細菌的數(shù)量變化不顯著，可能與阿維菌素作用有關。

圖3　不同處理煙草根圍土壤中可培養(yǎng)細菌數(shù)量的變化

2.4不同處理對煙草根圍土壤中可培養(yǎng)放線菌數(shù)量的影響

土壤中放線菌的數(shù)量僅次于細菌，不但對土壤中有機化合物的分解及腐殖質的合成有重要作用[5]，一些放線菌的代謝產(chǎn)物對根結線蟲還有抑制或毒殺作用[6-8]。由圖4可知，除C1處理7月土壤中放線菌數(shù)量低于CK外，其他時期各處理土壤中的放線菌數(shù)量均高于CK。隨著時間的變化，不同處理對煙草周圍土壤中可培養(yǎng)的放線菌數(shù)量的影響呈現(xiàn)先升后降的趨勢。7～8月，由于氣溫上升，受土壤生態(tài)因子的影響，各處理土壤中可培養(yǎng)的放線菌數(shù)量均顯著增加，其中增幅最大的是毛頭鬼傘菌處理。

圖4　不同處理煙草根圍土壤中可培養(yǎng)放線菌的變化

3　討 論

生物防治是植物病害綜合治理的重要措施之一，也是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要內(nèi)容。對煙草根結線蟲病的生物防治是煙草生產(chǎn)及現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展的需要。施用毛頭鬼傘菌與P.ox1可以改善土壤微生態(tài)環(huán)境，為煙草生長創(chuàng)造更好的營養(yǎng)條件，使煙草更加健壯，并且對煙草根結線蟲病有較好的防治效果。試驗采用的傳統(tǒng)分離培養(yǎng)方法雖然具有一定局限性，但可以簡單、直觀地反應出煙草根圍土壤中可培養(yǎng)真菌、細菌和放線菌的變化情況。土壤中棲居著大量的微生物，影響著煙草根系組織對養(yǎng)分的吸收，同時這些微生物之間也存在著微妙的關系[9]，因此還需進一步研究生防菌的施用對煙草周圍土壤中真菌、細菌及放線菌的群落結構的影響。

參考文獻：

[1] 邱雪柏. 煙草根結線蟲生物防治研究進展[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學，2010，38（7）：121-124.

[2] 方中達. 植病研究方法[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1998. 22-125.

[3] 姜治清. 殺線蟲擔子菌的篩選及毛頭鬼傘對煙草根結線蟲防治的研究[D]. 貴陽：貴州大學，2008.

[4] 何志剛，王秀娟，董 環(huán)，等. 日光溫室辣椒連作不同年限土壤微生物種群變化及酶活性研究[J]. 中國土壤與肥料，2013，（1）：38-42.

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[6] 祝明亮，李天飛，夏振遠，等. 云南煙草根結線蟲發(fā)病土壤生態(tài)因子分析[J]. 中國煙草學報，2003，9（4）：30-34.

[7] 祝明亮，李天飛，張克勤，等. 根結線蟲生防資源概況及進展[J].微生物學通報，2004，31（1）：100-104.

[8] 祝明亮，張克勤，李天飛，等. 三種生物制劑對煙草根結線蟲病防效研究[J]. 云南大學學報（自然科學版），2000，（5）：369-372.

[9] 李 苪. 解淀粉芽孢桿菌41B-1、銅綠假單胞菌841P-3對棉花根圍土壤微生物群落結構的影響[D]. 南京：南京農(nóng)業(yè)大學，2010.

（責任編輯：成 平）

共同第一作者：王仁剛

Effects of Two Kinds of Tobacco Root Knot Nematode Biocontrol Bacteria on Microorganism in soil

TAN Ping1，WANG Ren-gang2，TIAN Hong1，LIN Shi-feng2，JIA Meng-ao2，YANG Zhi-xiao2，LI Li3.
（1. Guiyang Agricultural Experiment Center， Guiyong 550025， PRC； 2. Guizhou Academy of Tobacco Science， Guiyong 550081， PRC；3. Guizhou Normal University， Guiyong 550001， PRC）

Abstract：Selected two kinds of basidiomycete which has better control effect of tobacco root knot nematode to take the field test, research the change of fungi, bacteria and actinomycetes in the rhizosphere soil of tobacco under different treatments. The results showed that two kinds of biocontrol fungi can effectively inhibit the quantity of second instar larvae of tobacco root knot nematode in tobacco rhizosphere, also increase the quantity of culturable fungi, bacteria and actinomycetes. Among them, Coprinus comatus has most significant effect on culturable actinomycetes in soil.

Key words：tobacco root knot nematode; biocontrol; soil microorganism

通訊作者：李 莉

作者簡介：譚 萍（1986-），女，遼寧寬甸縣人，助理農(nóng)藝師，主要從事植物病害研究。

基金項目：貴州省農(nóng)業(yè)攻關項目（黔科合NY［2013］3041號）

收稿日期：2016-03-01

DOI:10.16498/j.cnki.hnnykx.2016.04.021

中圖分類號：S154.3

文獻標識碼：A

文章編號：1006-060X（2016）04-0069-030