馬長(zhǎng)華 楊 歡 羅振中

電針對(duì)糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠痛閾及脊髓p38MAPK表達(dá)的影響

馬長(zhǎng)華 楊 歡 羅振中

目的 探析電針對(duì)糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠痛閾及脊髓p38MAPK表達(dá)的影響。方法 選擇成年大鼠進(jìn)行篩選，選取符合條件60只按照數(shù)字隨機(jī)分配的原則進(jìn)行均分(15只/組)分為四組：對(duì)照組、模型組、電針組、假電針組，篩選出來(lái)的大鼠中進(jìn)行造模手術(shù)，在造模成功的大鼠中分為模型組、電針組、假電針組，分別在手術(shù)前后治療后觀察大鼠的行為并測(cè)定其疼痛。10天后開(kāi)始進(jìn)行電針治療實(shí)驗(yàn)，通過(guò)熒光標(biāo)記方法檢測(cè)大鼠脊髓p38MAPK的表達(dá)。結(jié)果 對(duì)照組中大鼠的痛閾及脊髓p38MAPK表達(dá)無(wú)變化，但是模型組和假電針組降低明顯，電針組在電針治療上均顯著升高且電針治療后大鼠的運(yùn)動(dòng)較模型組和假電針組低。電針組大鼠的脊髓p38MAPK表達(dá)高于模型組和假電針組。結(jié)論 電針治療有效減輕對(duì)糖尿病神經(jīng)病理性大鼠的疼痛，抑制脊髓p38MAPK表達(dá)的影響。

電針； 糖尿病神經(jīng)病理性疼痛； 脊髓p38MAPK

糖尿病神經(jīng)病理性疼痛是糖尿病患者最常見(jiàn)、最復(fù)雜和最嚴(yán)重的并發(fā)癥，主要是糖尿病慢性高血糖狀態(tài)及其所致各種病理生理改變而導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)損傷，可累及全身神經(jīng)系統(tǒng)，包括感覺(jué)神經(jīng)、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)和自主神經(jīng)。臨床上以肢體疼痛、感覺(jué)減退、麻木、灼熱、冰涼等，也可表現(xiàn)為自發(fā)性疼痛、痛覺(jué)過(guò)敏、痛覺(jué)超敏，甚至發(fā)展至糖尿病足潰瘍或需要截肢，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。電針療法是利用刺入身體穴位的毫針上，用電針機(jī)通以微量低頻脈沖電流的一種治療方法，對(duì)神經(jīng)痛、神經(jīng)麻痹等的治療效果良好。為了更好的探究電針對(duì)糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠痛閾及脊髓p38MAPK表達(dá)的影響，本組選定大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來(lái)作進(jìn)一步探討，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取的60只成年大鼠，按照數(shù)字隨機(jī)分配為原則(15只/組)分為四組，分別是對(duì)照組、模型組、假電針組、電針組。最大重量的是260 g，最小的是190 g，平均重量(221.26±3.58)g。大鼠模型的建立：將大鼠禁食24小時(shí)后，將STZ溶液按55 mg/kg的劑量一次性注射大鼠體內(nèi)。36小時(shí)候用血糖儀測(cè)量大鼠的血量指標(biāo)，>17.6 mol/L的大鼠成為糖尿病大鼠模型。再注射2%的戊巴比妥鈉給大鼠進(jìn)行麻醉，快速去脊髓，進(jìn)行熒光標(biāo)記p38MAPK。

1.2 方法

每天固定時(shí)間利用電針?lè)▽?duì)電針組大鼠進(jìn)行電針刺激治療，從建模成功后7天開(kāi)始，將模型組大鼠置于自制的裝置中，盡可能將四肢以及尾部暴露在外，但大鼠安靜后，始每天刺激持續(xù)時(shí)間15min，連續(xù)電針半個(gè)月，觀察大鼠行為，記錄飲食、大便、泌尿等日常行為；并測(cè)定大鼠疼痛感以及觀察熒光標(biāo)記的p38MAPK在脊髓中的表達(dá)。

在建模前和建模后2天、4天、5天進(jìn)行行為檢測(cè)，每天固定的時(shí)間進(jìn)行觀察大鼠的行為(8：00-11:00)。

通過(guò)免疫組化方式的檢驗(yàn)，p38MAPK的陽(yáng)性細(xì)胞因子。

1.3 疼痛測(cè)定運(yùn)動(dòng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

運(yùn)動(dòng)無(wú)障礙為0，隨著運(yùn)動(dòng)障礙的提升其評(píng)定分也隨之升高。對(duì)大鼠的疼痛進(jìn)行記錄，無(wú)變化(0分)，隨著疼痛度其評(píng)定相應(yīng)增加。并記錄體重，飲食等情況，p38MAPK的陽(yáng)性細(xì)胞因子。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠大鼠疼痛對(duì)比

模型組大鼠出現(xiàn)了疼痛變化，一些大鼠表現(xiàn)出煩躁和狂躁的狀態(tài)更有不能行動(dòng)的大鼠出現(xiàn)；但在電針組大鼠出現(xiàn)的煩躁現(xiàn)象較少幾乎沒(méi)有出現(xiàn)不能行動(dòng)的大鼠，詳見(jiàn)表1。

表1 大鼠疼痛評(píng)定值

2.2 各組大鼠運(yùn)動(dòng)對(duì)比

對(duì)照組中大鼠沒(méi)有出現(xiàn)不適的運(yùn)動(dòng)功能障礙。其余三組在建模后的2天時(shí)間內(nèi)均出現(xiàn)了明顯運(yùn)動(dòng)功能受損，模型組和假電針組大鼠運(yùn)動(dòng)障礙顯著升高，而電針組大鼠的運(yùn)動(dòng)障礙從第3次電針過(guò)后有所改善，電針組較模型組和假電針組的運(yùn)動(dòng)評(píng)分較回緩，見(jiàn)表2。

表2 大鼠運(yùn)動(dòng)評(píng)定值

2.3 各組大鼠p38MAPK表達(dá)對(duì)比

對(duì)照組中大鼠脊髓的p38MAPK陽(yáng)性細(xì)胞因子的陽(yáng)性率較低(6.78%±1.23%)，模型組中的(63.23%±2.56%)，假電針組中的(68.41%±1.02%)，電針組中的(14.65%±1.88%),電針組中p38MAPK陽(yáng)性細(xì)胞因子的陽(yáng)性率明顯低于模型組和假電針組，詳見(jiàn)表3。

表3 p38MAPK表達(dá)變化 (%)

3 討論

糖尿病周?chē)窠?jīng)痛是以疼痛為主要表現(xiàn)的一類(lèi)神經(jīng)病變，屬于神經(jīng)病理性疼痛的一種。糖尿病周?chē)窠?jīng)病變的患者中約有80%的患者正經(jīng)受著神經(jīng)痛的折磨。糖尿病周?chē)窠?jīng)病變發(fā)生緩慢，其發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，目前尚不能完全闡明。由于糖尿病周?chē)窠?jīng)病變是一種常見(jiàn)的神經(jīng)病理性疼痛類(lèi)型，發(fā)病機(jī)制可能與神經(jīng)病理性疼痛相似。在神經(jīng)病理性疼痛發(fā)生過(guò)程中，中樞敏化發(fā)揮重要作用。為減輕患者的病痛折磨，本組針對(duì)大鼠進(jìn)行模擬實(shí)驗(yàn)研究，利用電針的治療手段來(lái)研究本課題。

隨著生物技術(shù)的不斷發(fā)展，對(duì)蛋白質(zhì)、核酸及細(xì)胞標(biāo)記的要求越來(lái)越高，傳統(tǒng)的同位素標(biāo)記方法已不能適應(yīng)當(dāng)今的發(fā)展。而發(fā)展起來(lái)的熒光探針技術(shù)已經(jīng)在蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞檢測(cè)及免疫分析等方面顯現(xiàn)出巨大的潛能。熒光探針技術(shù)具備高度靈敏性和極寬的動(dòng)態(tài)響應(yīng)時(shí)間，可以使研究人員高靈敏和高選擇性地檢測(cè)復(fù)雜生物分子，包括活細(xì)胞中的特定成分。

電針療法適用于毫針刺法的主治病證，在中醫(yī)領(lǐng)域認(rèn)為其具有針灸和治療的優(yōu)點(diǎn)，其安全性和療效已經(jīng)得到認(rèn)證。電針可以提升患者痛閾，且具鎮(zhèn)痛效果，電針在治療過(guò)程中對(duì)機(jī)體產(chǎn)生電的生理效應(yīng)，維持較長(zhǎng)時(shí)間的針感，為大部分患者所接受。針刺鎮(zhèn)痛能提高了痛閾，增加了疼痛的耐受力，降低疼痛的敏感性。

本研究以大鼠為研究對(duì)象，成功將正常大鼠進(jìn)行建模，電針組大鼠的疼痛評(píng)定和運(yùn)動(dòng)障礙評(píng)估呈顯著下降趨勢(shì)，通過(guò)免疫組檢測(cè)的熒光標(biāo)記p38MAPK陽(yáng)性因子陽(yáng)性率將其他兩組低，本研究試驗(yàn)結(jié)果與某些專(zhuān)家的研究具有一致性。

分析得出MAPK信號(hào)傳輸是從細(xì)胞表面通過(guò)細(xì)胞壁到細(xì)胞質(zhì)在到細(xì)胞核的傳導(dǎo)者，通過(guò)免疫組化方法對(duì)熒光標(biāo)記的追蹤，p38MAPK完成細(xì)胞轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)合成以及受體表達(dá)的調(diào)整，在整個(gè)細(xì)胞中扮演著傳遞者的身份。在模型組中觀察到熒光標(biāo)記的因子和蛋白質(zhì)合成水平顯著提升，p38MAPK在刺激下對(duì)細(xì)胞的能量活性其直接作用。p38MAPK的表達(dá)隨著疼痛程度的提升表達(dá)變得強(qiáng)烈，與一些專(zhuān)家研究的結(jié)果一致，深度證明p38MAPK在糖尿病神經(jīng)性疼痛中的發(fā)展具有至關(guān)重要意義。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)使用的模型組采取對(duì)大鼠影響小為主要原則，更貼近臨床醫(yī)學(xué)需求，電針治療有效減輕對(duì)糖尿病神經(jīng)病理性大鼠的疼痛，抑制脊髓p38MAPK表達(dá)的影響。

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江西省衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科技計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：2015A024)

楊 歡

R365

A

10.3969/j.issn.1671-332X.2016.10.008

馬長(zhǎng)華 楊 歡 羅振中 ： 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院 江西南昌 330006