余桂芳， 陳樹娣， 陳雪竹， 侯開連， 梁 敏

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第五醫(yī)院腫瘤科，廣東 廣州 510700)

miR-222通過調(diào)控BCL2L13基因促進(jìn)HBx-HepG2細(xì)胞生長*

余桂芳△， 陳樹娣， 陳雪竹， 侯開連， 梁 敏

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第五醫(yī)院腫瘤科，廣東 廣州 510700)

目的： 探討HBx-HepG2 細(xì)胞中微小RNA-222(miR-222)對BCL2L13基因表達(dá)的調(diào)控作用以及對細(xì)胞生長和凋亡的影響，并研究其潛在的分子作用機(jī)制。方法: 利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測miR-222的表達(dá)水平；MTT和集落形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的生長；流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期和凋亡；構(gòu)建BCL2L13 3’UTR雙螢光素酶報(bào)告載體，通過采用雙螢光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-222的靶基因。結(jié)果: 與正常的肝細(xì)胞 L02相比, miR-222在HBx-HepG2細(xì)胞過量表達(dá)(P<0.05)。miR-222過表達(dá)可促進(jìn)HBx-HepG2細(xì)胞的生長，改變細(xì)胞周期，降低細(xì)胞的凋亡率；miR-222表達(dá)下調(diào)可抑制HBx-HepG2細(xì)胞的生長，改變細(xì)胞周期，增加細(xì)胞的凋亡率，和對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。與正常肝細(xì)胞 L02相比，BCL2L13在HBx-HepG2細(xì)胞表達(dá)下調(diào)(P<0.05)；miR-222表達(dá)下調(diào)可促進(jìn)BCL2L13的表達(dá)(P<0.05)。雙螢光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)和pcDNA3.1-BCL2L13轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示miR-222可以通過作用于BCL2L13的3’UTR區(qū)，負(fù)向調(diào)控其表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞的生長。結(jié)論: miR-222可以通過靶向調(diào)控BCL2L13基因進(jìn)而促進(jìn)HBx-HepG2細(xì)胞的生長。

微小RNA-222； HBx-HepG2細(xì)胞； 細(xì)胞生長; 細(xì)胞周期； 細(xì)胞凋亡;BCL2L13基因

微小RNA(microRNA，miRNA)是一種內(nèi)源性的小分子單鏈RNA，長度介于22～25個(gè)堿基。miRNA能夠在轉(zhuǎn)錄后水平上對基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，其表達(dá)與多種人類腫瘤的發(fā)展有著密切的關(guān)系，miRNA既可作為癌基因促進(jìn)腫瘤生長，又可作為抑癌基因抑制相關(guān)下游靶基因的表達(dá)[1-4]。研究發(fā)現(xiàn)miRNA-222(miR-222)在多種腫瘤上有著過表達(dá)；在肝癌組織中，miR-222 過量表達(dá)并且在腫瘤形成過程中具有促進(jìn)肝癌細(xì)胞的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的能力[5-8]。目前miR-222在肝癌細(xì)胞中，特別是表達(dá)乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein, HBx)的肝癌細(xì)胞HBx-HepG2中的作用機(jī)制尚不清楚，本研究通過生物信息學(xué)方法預(yù)測miR-222的靶基因，利用雙螢光素酶報(bào)告系統(tǒng)進(jìn)行檢測，通過分子生物學(xué)技術(shù)證實(shí)了miR-222通過作用于BCL2L13基因?qū)Bx-HepG2細(xì)胞生長產(chǎn)生影響，從而進(jìn)一步解釋了miR-222影響HBx-HepG2生長的分子作用機(jī)制。

材 料 和 方 法

1 主要材料

HBx-HepG2細(xì)胞株是之前實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的穩(wěn)定表達(dá)HBx的HepG2細(xì)胞株[9]; L02 和 HEK293T細(xì)胞株購自上海中科院細(xì)胞庫；RPMI-1640培養(yǎng)液和胎牛血清購自HyClone; miR-222模擬物(miR-222 mimics)、miR-222抑制物(miR-222 inhibitor)、無關(guān)序列模擬物對照(miR-control,miR-Ctrl)、抑制物對照(miR inhibitor-Ctrl)以及miR-222的引物均購于廣州瑞博生物科技有限公司；High Pure miRNA Isolation Kit 購于Roche；miRNA-222 cDNA Synthesis Kit和Lipofectamine 2000購于Invitrogen；miR-222熒光定量PCR試劑盒購于TaKaRa；pmirGLO質(zhì)粒和pcDNA3.1-BCL2L13質(zhì)粒購于上海捷瑞生物工程有限公司；雙螢光素酶報(bào)告基因試劑盒購于Promega；MTT購于Sigma； Annexin V-FITC/PI凋亡試劑盒購于東仁化學(xué)科技有限公司。

2 主要方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng) HBx-HepG2細(xì)胞，L02細(xì)胞用含有10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，置于37 ℃、5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)常規(guī)培養(yǎng)，消化傳代。當(dāng)6孔板里每孔細(xì)胞數(shù)量達(dá)2×105細(xì)胞時(shí)，用不含雙抗的培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h, 細(xì)胞融合率達(dá)80%時(shí)采用Lipofectamine 2000試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染，在轉(zhuǎn)染miR-222的實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)分為miR-222 mimics組和miR-222 inhibitor組，以及各自的對照組miR-Ctrl和 miR inhibitor-Ctrl；在轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-BCL2L13實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)分為pcDNA3.1空質(zhì)粒組和pcDNA3.1-BCL2L13組。轉(zhuǎn)染后24 h收集細(xì)胞進(jìn)行各項(xiàng)檢測。

2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測細(xì)胞miR-222以及BCL2L13的表達(dá) 使用High Pure miRNA Isolation Kit以及TRIzol分別提取miRNA和mRNA, 然后將miRNA或者mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA; 采用熒光定量PCR 儀擴(kuò)增檢測miR-222和BCL2L13目的片段。miR-222以U6為內(nèi)參照，BCL2L13以GAPDH為內(nèi)參照，采用2-ΔΔCt方法分析結(jié)果，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.3 MTT法檢測細(xì)胞活力 取對數(shù)生長期的HBx-HepG2細(xì)胞每孔1×104個(gè)細(xì)胞接種在96孔板中預(yù)培養(yǎng)24 h, 然后按照2.1分組轉(zhuǎn)染細(xì)胞，轉(zhuǎn)染24 h的HBx-HepG2細(xì)胞每孔加入MTT 20 μL 繼續(xù)培養(yǎng)4 h 后小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，每孔加入DMSO 150 μL，用酶聯(lián)免疫標(biāo)記分析儀在570 nm 波長處測定各孔的吸光度A值，按下列公式計(jì)算細(xì)胞生長率(%)=實(shí)驗(yàn)組A值/對照組A值×100%。為了檢測BCL2L13對細(xì)胞活力的影響，取對數(shù)生長期的HBx-HepG2細(xì)胞以每孔1×104接種在96孔板中預(yù)培養(yǎng)24 h, 然后按照2.1分組(pcDNA3.1組與pcDNA3.1-BCL2L13組)轉(zhuǎn)染細(xì)胞，對轉(zhuǎn)染24 h的HBx-HepG2細(xì)胞進(jìn)行MTT檢測。

2.4 細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn) 將轉(zhuǎn)染24 h 的HBx-HepG2細(xì)胞接種于6 孔培養(yǎng)板，每孔2 mL，充分混勻，常規(guī)培養(yǎng)10 d，每組3個(gè)復(fù)孔。每隔3 d更換新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。倒盡培養(yǎng)基，生理鹽水洗滌2遍，空氣干燥后75%乙醇固定15 min，0.5%結(jié)晶紫染色2 h，清水洗凈干燥。顯微鏡下觀察拍照，形成的克隆(≥50個(gè)細(xì)胞為1個(gè)克隆)計(jì)數(shù)。

2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡 將轉(zhuǎn)染48 h的HBx-HepG2細(xì)胞用PBS洗滌，加入70% 冷乙醇固定后重新收集細(xì)胞，PBS洗去固定液，加入RNA 酶反應(yīng)過夜，與碘化丙啶(propidium iodide，PI)染液混勻后，用流式細(xì)胞儀作流式細(xì)胞分析，激發(fā)波長為488 nm，并用ModFit LT 2.0 軟件分析細(xì)胞周期分布及凋亡情況。計(jì)算各期細(xì)胞所占比例。Annexin V-FITC/PI雙染后檢測細(xì)胞凋亡率。

2.6 雙螢光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)驗(yàn)證miR-222對BCL2L13 基因的調(diào)控作用 根據(jù)TargetScan靶基因預(yù)測數(shù)據(jù)庫預(yù)測miR-222的靶基因，我們發(fā)現(xiàn)BCL2L13為miR-222的潛在靶基因并尋找出與miR-222 互補(bǔ)配對的BCL2L13 3’UTR區(qū)。提取正?；蚪M，PCR擴(kuò)增包含有miR-222結(jié)合位點(diǎn)的BCL2L13 3’UTR區(qū)，回收純化后插入到pmirGLO載體多克隆位點(diǎn)中，載體命名為pmirGLO-BCL2L13-wide type(BCL2L13-3’UTR-WT); 設(shè)計(jì)針對BCL2L13 3’UTR“種子區(qū)”的突變引物，插入到pmirGLO載體多克隆位點(diǎn)中，載體命名為pmirGLO-BCL2L13-mutant(BCL2L13-3’UTR-Mut)。螢光素酶報(bào)告載體BCL2L13-3’UTR-WT和BCL2L13-3’UTR-Mut分別與miR-222 mimics和miR-222 inhibitor，以及各自的對照(miR-Ctrl和miR inhibitor Ctrl)兩兩組合共轉(zhuǎn)染到HEK293T 細(xì)胞中。每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。轉(zhuǎn)染48 h后收集細(xì)胞按照螢光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒說明書測定各組細(xì)胞螢火蟲螢光素信號及海腎螢光素信號。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，兩組間均數(shù)的比較采用Student’st檢驗(yàn)，多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 HBx-HepG2細(xì)胞中miR-222的表達(dá)

RT-qPCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)HBx-HepG2細(xì)胞中的miR-222表達(dá)顯著高于對照細(xì)胞株L02中miR-222的表達(dá) (P<0.05)，見圖1A。 miR-222 mimics轉(zhuǎn)染組HBx-HepG2細(xì)胞中的miR-222表達(dá)水平與miR-Ctrl相比顯著升高(P<0.05); 而miR-222 inhibitor轉(zhuǎn)染組HBx-HepG2細(xì)胞中的miR-222表達(dá)水平與miR inhibitor-Ctrl相比顯著降低(P<0.05),見圖1B。

2 miR-222對HBx-HepG2細(xì)胞生長、細(xì)胞周期以及凋亡的影響

MTT法檢測結(jié)果顯示，miR-222 mimics 轉(zhuǎn)染組HBx-HepG2細(xì)胞的生存率顯著高于miR-Ctrl組(P<0.05)；而miR-222 inhibitor轉(zhuǎn)染組HBx-HepG2細(xì)胞的生存率顯著低于miR inhibitor-Ctrl組(P<0.05)，見圖1C。細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可見，miR-222 mimics轉(zhuǎn)染組的HBx-HepG2集落形成數(shù)目顯著高于miR-Ctrl組(P<0.05)；而miR-222 inhibitor轉(zhuǎn)染組的HBx-HepG2集落形成數(shù)目顯著低于miR inhibitor-Ctrl組(P<0.05)，見圖1D。流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-222 mimics轉(zhuǎn)染組HBx-HepG2的G0/G1細(xì)胞比例下降和S期細(xì)胞比例上升(P<0.05)并且細(xì)胞凋亡率與miR-Ctrl組相比顯著降低(P<0.05)；而miR-222 inhibitor轉(zhuǎn)染組HBx-HepG2的G0/G1細(xì)胞比例上升和S期細(xì)胞比例下降(P<0.05)；細(xì)胞凋亡率與miR inhibitor-Ctrl組相比顯著升高(P<0.05)，見圖2。

Figure 1.The effect of miR-222 on the growth of HBx-HepG2 cells. A: the expression of miR-222 in L02 and HBx-HepG2 cells; B: the effect of miR-222 mimics or miR-222 inhibitor transfection on miR-222 expression; C: the effect of miR-222 on the viability of HBx-HepG2 cells; D: the effect of miR-222 on colony formation of HBx-HepG2 cells. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsL02;#P<0.05,##P<0.01vsmiR-Ctrl;△P<0.05,△△P<0.01vsmiR inhibitor-Ctrl group.

圖1 miR-222 對HBx-HepG2細(xì)胞生長的影響

Figure 2.The effect of miR-222 on the cell cycle and apoptotic rate in the HBx-HepG2 cells. A: the effect of miR-222 mimics or miR-222 inhibitor transfection on the cell cycle; B: the effect of miR-222 mimics or miR-222 inhibitor transfection on the apoptotic rate. 1: miR-Ctrl; 2: miR-222 mimics; 3: miR inhibitor-Ctrl; 4: miR-222 inhibitor. Mean±SD.n=3.*P<0.05vsmiR-Ctrl;#P<0.05vsmiR inhibitor-Ctrl group. 圖2 miR-222對HBx-HepG2細(xì)胞周期以及凋亡率的影響

3 miR-222對BCL2L13 3’UTR表達(dá)的影響

采用雙螢光素酶報(bào)告基因檢測各組螢光信號的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-222 mimics和BCL2L13-3’ UTR-WT共轉(zhuǎn)染HEKT293細(xì)胞后，細(xì)胞的螢光素酶與對照組相比明顯受到抑制；miR-222 inhibitor和BCL2L13-3’ UTR-WT共轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，細(xì)胞的螢光素酶與對照組相比明顯升高(P<0.05)。而miR-222 mimics或者miR-222 inhibitor和BCL2L13-3’ UTR-Mut共轉(zhuǎn)染細(xì)胞后, 螢光素酶的表達(dá)水平與對照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P>0.05)，見圖3。

4BCL12L13在HBx-HepG2中的表達(dá)及其對細(xì)胞生長的影響

RT-qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，BCL12L13在HBx-HepG2細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著低于正常肝細(xì)胞L02的表達(dá)水平(P<0.05)，見圖4A。同時(shí)，在HBx-HepG2轉(zhuǎn)染miR-222 inhibitor后，BCL2L13的表達(dá)水平明顯高于只轉(zhuǎn)染miR inhibitor-Ctrl的細(xì)胞(P<0.05),見圖4B。轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-BCL2L13載體能夠顯著提高HBx-HepG2細(xì)胞中BCL2L13的表達(dá)水平(P<0.05)，見圖4C。同時(shí)轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-BCL2L13載體的HBx-HepG2細(xì)胞生存率明顯低于轉(zhuǎn)染了空載體的HBx-HepG2細(xì)胞(P<0.05)，見圖4D。

Figure 3. The targeted inhibition ofBCL2L13 expression in the HEKT293 cells by miR-222 detected by dual-luciferase reporter assay. 1： miR-Ctrl; 2: miR-222 mimics; 3: miR inhibitor-Ctrl; 4: miR-222 inhibitor. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsmiR-Ctrl;##P<0.01vsmiR inhibitor-Ctrl.

圖3 雙螢光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測提示miR-222靶向抑制HEKT293細(xì)胞中BCL2L13基因表達(dá)

Figure 4.BCL2L13 was down-regulated in the HBx-HepG2 cells and inhibited cell growth. A: the expression ofBCL2L13 in the L02 and HBx-HepG2 cells; B: the effect of miR-222 inhibitor transfection on the expression level ofBCL2L13; C: the effect of pcDNA3.1-BCL2L13 transfection on the expression ofBCL2L13; D: the effect of pcDNA3.1-BCL2L13 transfection on the viability of HBx-HepG2 cells. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsL02;#P<0.05vsmiR inhibitor-Ctrl;△△P<0.01vsvector.

圖4BCL2L13在HBx-HepG2細(xì)胞中下調(diào)并且可以抑制細(xì)胞生長

討 論

肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是最常見的惡行腫瘤之一，死亡率位于世界第4，慢性乙肝病毒感染是其發(fā)病的主要原因之一[10-11]。HBx是HBV 4個(gè)開放讀碼框中的X-ORF編碼的病毒蛋白，為含有154個(gè)氨基酸的多肽，分子量為17.5 kD，研究發(fā)現(xiàn)HBx促進(jìn)了與其相關(guān)的HCC的發(fā)展[12-13]。HBx蛋白通過與不同宿主因素相互作用來調(diào)節(jié)細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，轉(zhuǎn)錄調(diào)控，細(xì)胞周期進(jìn)程，DNA修復(fù)，細(xì)胞凋亡和遺傳穩(wěn)定性[14]。前期的實(shí)驗(yàn)中我們成功建立了穩(wěn)定表達(dá)HBx的HCC細(xì)胞模型，并且發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定表達(dá)的HBx促進(jìn)HepG2細(xì)胞的增殖，本實(shí)驗(yàn)在前面基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究其分子機(jī)制，為尋找新的早期診斷標(biāo)志和治療靶點(diǎn)提供依據(jù)。

miRNA既可作為癌基因促進(jìn)腫瘤生長，又可作為抑癌基因抑制相關(guān)下游靶基因的表達(dá)[2]。研究發(fā)現(xiàn)miR-222在多種腫瘤上有著過表達(dá)；在肝癌組織中，miR-222 過量表達(dá)并且在腫瘤形成過程中具有促進(jìn)肝癌細(xì)胞的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的能力[5-8]。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)miR-222的過表達(dá)與肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移有關(guān)，而且miR-222是通過AKT信號通路來影響肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的[15]。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)miR-222能夠通過抑制GNAI3的表達(dá)來促進(jìn)肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和入侵[16]。miR-222的過量表達(dá)能夠下調(diào)p27的表達(dá)從而來促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增長[5]。本研究第一次在HBx-HepG2細(xì)胞上證明miR-222的過表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞的增長，而miR-222影響HBx-HepG2細(xì)胞的增長可能是通過調(diào)控細(xì)胞周期，降低細(xì)胞的凋亡率而實(shí)現(xiàn)的。

我們通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)BCL2L13基因是miR-222的一個(gè)潛在靶點(diǎn)，雙螢光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)和pcDNA3.1-BCL2L13轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示miR-222可以通過作用于BCL2L13的3’UTR區(qū)，負(fù)向調(diào)控其表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞的生長。BCL2L13屬于Bcl-2家族中的一員，BCL2L13的過表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞的凋亡[17]。盡管BCL2L13基因與細(xì)胞的凋亡有關(guān)，但是其具體的分子機(jī)制還是有很多爭議。研究發(fā)現(xiàn)BCL2L13基因的過表達(dá)與小孩急性白血病的生存率呈負(fù)相關(guān)[18]。在多型性神經(jīng)膠母細(xì)胞中，BCL2L13能夠抑制化療藥物引起的細(xì)胞凋亡[19]。而本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)BLC2L13 的過表達(dá)可以抑制HBx-HepG2的生長。這些具有爭議的結(jié)果可能因?yàn)椴煌募?xì)胞系或是不同的癌癥種類。BCL2L13基因在 HBx-HepG2細(xì)胞中的分子機(jī)制可能還需要進(jìn)一步的研究。

綜上所述，miR-222可以通過靶向調(diào)控BCL2L13基因進(jìn)而促進(jìn)HBx-HepG2細(xì)胞的生長。為了進(jìn)一步闡述miR-222在HBx-HepG2中的機(jī)制，我們將來的實(shí)驗(yàn)有必要觀察miR-222在臨床樣本中的表達(dá)情況，從而進(jìn)一步確認(rèn)miR-222 在慢性乙肝病毒感染肝癌中的臨床意義。

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(責(zé)任編輯： 林白霜， 羅 森)

miR-222 enhances HBx-HepG2 cell growth via regulation ofBCL2L13 gene

YU Gui-fang, CHEN Shu-di, CHEN Xue-zhu, HOU Kai-lian, LIANG Min

(DepartmentofOncology,TheFifthAffiliatedHospitalofGuangzhouMedicalUniversity,Guangzhou510700,China.E-mail:guifangyu1023@sina.com)

AIM: To investigate the regulation of miR-222 onBCL2L13 gene and its effect on the growth and apoptosis of HBx-HepG2 cells, and to explore the underlying molecular mechanisms. METHODS: The expression level of miR-222 was detected by RT-qPCR. The HBx-HepG2 cell growth was examined by MTT and colony formation assays. The cell cycle and apoptosis were analyzed by flow cytometry. The recombination vector pmirGLO-BCL2L13 was constructed, and dual-luciferase reporter experiment was performed to validate the target of miR-222. RESULTS: The expression level of miR-222 in the HBx-HepG2 cells was significantly higher than that in the L02 cells (P<0.05). Over-expression of miR-222 enhanced HBx-HepG2 cell growth, changed cell cycle, and inhibited apoptosis (P<0.05). Knockdown of miR-222 reduced HBx-HepG2 cell growth, changed cell cycle, and increased cell apoptotic rate (P<0.05).BCL2L13 was down-regulated in the HBx-HepG2 cells as compared with L02 cells (P<0.05), and knockdown of miR-222 in the HBx-HepG2 cells increased the expression level ofBCL2L13 (P<0.05). The results of dual-luciferase reporter assay and restore experiment showed that miR-222 negatively regulated the expression ofBCL2L13 via targeting 3’UTR ofBCL2L13, resulting in the promotion of HBx-HepG2 cell growth. CONCLUSION: miR-222 enhances HBx-HepG2 cell growth via down-regulation ofBCL2L13.

MicroRNA-222; HBx-HepG2 cells; Cell growth; Cell cycle; Apoptosis;BCL2L13 gene

1000- 4718(2016)08- 1389- 06

2015- 11- 25

2016- 07- 06

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(No. 20130319c)

R363

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.08.008

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△通訊作者 Tel: 020-32208059; E-mail: guifangyu1023@sina.com