范立僑，譚明，李勇，檀碧波，王冬，劉慶偉

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院 外三科，河北 石家莊 050011)

·論 著·

胃癌組織中Vav1蛋白表達(dá)與胃癌臨床生物學(xué)行為及預(yù)后的關(guān)系

范立僑，譚明，李勇，檀碧波，王冬，劉慶偉

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院 外三科，河北 石家莊 050011)

目的：探討胃癌組織中Vav1蛋白表達(dá)與腫瘤臨床生物學(xué)行為及預(yù)后的關(guān)系，并對(duì)Vav1蛋白與轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白MMP-2、TIMP-1的關(guān)系進(jìn)行分析。方法：采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Vav1、MMP-2、TIMP-1蛋白在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)，收集患者的臨床資料并進(jìn)行隨訪。結(jié)果：Vav1、MMP-2蛋白在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織(均P<0.01)，TIMP-1蛋白在胃癌組織中表達(dá)低于癌旁組織(P<0.01)。Vav1蛋白與腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期相關(guān)(P<0.05)。Vav1陽(yáng)性表達(dá)患者5年生存率為26.26%，明顯低于陰性表達(dá)患者(50.82%)(均P<0.05)。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸顯示，Vav1陽(yáng)性表達(dá)是影響患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。Vav1與MMP-2存在正相關(guān)關(guān)系(P<0.05)。結(jié)論：Vav1與胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)，Vav1陽(yáng)性表達(dá)是胃癌預(yù)后差的標(biāo)志。

胃癌；Vav1蛋白；侵襲；轉(zhuǎn)移；預(yù)后

研究發(fā)現(xiàn)，Vav家族中的Vav1基因在各種生物和細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中扮演重要的角色[1]。Vav1對(duì)T和B淋巴細(xì)胞的發(fā)育、功能及其受體誘導(dǎo)的鈣離子通道具有極其重要的作用[2]。Vav1蛋白可以促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化[3]。目前有關(guān)Vav1侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制不明，研究證實(shí)，Vav1具有原癌基因特征，然而與胃癌關(guān)系尚不明確。本研究應(yīng)用免疫組化方法，分析Vav1與胃癌臨床生物學(xué)行為及預(yù)后的關(guān)系，探討檢測(cè)胃癌組織中Vav1蛋白的意義。為初步了解Vav1蛋白的作用機(jī)制，我們還檢測(cè)了與腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)系密切的MMP-2、TIMP-1蛋白，分析Vav1與它們的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 病例來(lái)源

本研究收集2009年1月至2010年7月在我院經(jīng)手術(shù)、病理學(xué)確診為胃癌的患者160例，其中男123例，女37例，年齡為33～82歲，中位年齡為59歲。均有完整的臨床資料及隨訪，隨訪截止日期為2015年8月。胃癌組為石蠟包埋的癌組織；癌旁組為石蠟包埋的距癌灶邊緣5cm以上的胃組織，病理學(xué)證實(shí)無(wú)癌存在。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑

Vav1兔抗人多克隆抗體、MMP-2兔抗人多克隆抗體、TIMP-1兔抗人多克隆抗體均購(gòu)自武漢云克隆科技股份有限公司。免疫組化試劑盒、濃縮型DAB試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組化染色檢測(cè)Vav1、MMP-2以及TIMP-1蛋白表達(dá)

用免疫組化二步法檢測(cè)Vav1、MMP-2以及TIMP-1蛋白的表達(dá)，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照，以試劑盒提供的組織作為陽(yáng)性對(duì)照。Vav1、MMP-2以及TIMP-1以胞漿出現(xiàn)黃色染色顆粒為陽(yáng)性。隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例及染色強(qiáng)弱度計(jì)分，表達(dá)強(qiáng)度為(-)或(+)記為陰性表達(dá)，(++)或(+++)記為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，采用χ2檢驗(yàn)、Spearman相關(guān)性分析、Kaplan-Meier法生存分析、Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 胃癌組織中Vav1、MMP-2以及TIMP-1的表達(dá)與腫瘤生物學(xué)的關(guān)系

Vav1陽(yáng)性表達(dá)率在胃癌組織中高于癌旁組織(χ2=12.818，P<0.001)(表1)。TIMP-1陽(yáng)性表達(dá)率在胃癌組織中明顯低于癌旁組織(χ2=19.031，P<0.001)(圖1)。Vav1陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期相關(guān)(分別χ2=4.264，P=0.039；χ2=7.385，P=0.007；χ2=4.251，P=0.039；χ2=5.464，P=0.019)(表2)。MMP-2陽(yáng)性表達(dá)率在胃癌組織中顯著高于癌旁組織(χ2=76.098，P<0.001)。

表1 Vav1、MMP-2以及TIMP-1的表達(dá)情況

組 別Vav1MMP-2TIMP-1陽(yáng)性/例陽(yáng)性率/%陽(yáng)性/例陽(yáng)性率/%陽(yáng)性/例陽(yáng)性率/%癌旁組6741.884326.8810263.75胃癌組9961.8812175.636339.38χ2值12.81876.09819.031P值<0.001<0.001<0.001

A.Vav1在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)；B.Vav1在癌旁組織中的陰性表達(dá)

圖1 Vav1在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá) Elivision×400

2.2 胃癌組織中Vav1的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

Vav1陽(yáng)性表達(dá)患者5年生存率為26.26%，陰性表達(dá)患者5年生存率為50.82%(χ2=4.550，P=0.033)。Kaplan-Meier生存分析顯示，Vav1陽(yáng)性表達(dá)患者的生存率低于陰性表達(dá)的患者(圖2)。Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸顯示，Vav1的陽(yáng)性表達(dá)是胃癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(表3)。

表2 胃癌組織中Vav1的表達(dá)與胃癌臨床生物學(xué)行為的關(guān)系

臨床生物學(xué)特征nVav1蛋白 陽(yáng)性/例 陽(yáng)性率/% χ2值P值性別1.8220.177 男性1238367.48 女性371643.24年齡0.0260.871 <60845363.10 ≥60764660.53部位0.3810.826 賁門(mén)胃底694260.87 胃體/竇684058.82 全胃231878.26大小1.4590.227 ≤5cm723758.33 >5cm886264.77大體類型(Borrmann)0.8120.846 Ⅰ型4250.00 Ⅱ型482552.08 Ⅲ型855665.88 Ⅳ型231669.57分化程度4.2640.039 高/中分化894247.19 低/未分化715780.28浸潤(rùn)深度7.3850.007 T1、T2541833.33 T3、T41068176.42脈管瘤栓0.0570.812 無(wú)1298162.79 有311858.06淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移4.2510.039 無(wú)622641.94 有987374.49遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移0.5830.445 無(wú)1529663.16 有8337.50TNM分期5.4640.019 Ⅰ、Ⅱ823643.90 Ⅲ、Ⅳ786380.77

圖2 胃癌中Vav1表達(dá)與預(yù)后關(guān)系的K-M曲線

表3 Vav1的表達(dá)與預(yù)后的多因素分析

因 素B值SE值Wald值df值SigExp(B)Vav12.1350.34338.65210.0008.458TNM分期1.1460.27517.41710.0003.145脈管瘤栓1.2890.26922.94510.0003.630

2.3 胃癌組織中Vav1、MMP-2及TIMP-1表達(dá)之間的相關(guān)分析

結(jié)果顯示，Vav1與MMP-2呈正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001，r=0.454)。Vav1與TIMP-1以及MMP-2與TIMP-1無(wú)明顯相關(guān)性(P=0.746，r=-0.026；P=0.810，r=-0.019)。

3 討 論

胃癌具有較強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移力，這是胃癌預(yù)后差的重要原因[4-5]。Vavl蛋白在不同的信號(hào)傳導(dǎo)通路激活自然殺傷細(xì)胞，觸發(fā)自然殺傷作用[1-2，6]。Sebban等[7]報(bào)道，乳腺癌組織中Vav1的表達(dá)顯著高于癌旁正常組織。Fernandez-Zapico[8]發(fā)現(xiàn)，胰腺導(dǎo)管癌組織中Vav1的表達(dá)顯著高于癌旁正常組織。齊瑤等[9]發(fā)現(xiàn)，抑制非小細(xì)胞肺癌中Vav1蛋白的表達(dá)，腫瘤分化程度降低，以上結(jié)果均說(shuō)明Vav1與惡性腫瘤關(guān)系密切。

本研究結(jié)果顯示：Vav1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在胃癌組織中為61.88%，高于癌旁組織；Vav1的表達(dá)與腫瘤分化程度、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期相關(guān)，提示Vav1可能參與了胃癌侵襲轉(zhuǎn)移。5年生存率Vav1陽(yáng)性表達(dá)患者低于陰性者，多因素分析提示，Vav1的陽(yáng)性表達(dá)是影響胃癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示Vav1蛋白可能是胃癌預(yù)后差的標(biāo)志物。

為了解Vav1與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系，本研究還檢測(cè)MMP-2、TIMP-1在胃癌中的表達(dá)，MMP-2的陽(yáng)性表達(dá)率在胃癌組織中顯著高于癌旁組織；TIMP-1的陽(yáng)性表達(dá)率在胃癌組織中明顯低于癌旁組織。相關(guān)性分析顯示，Vav1與MMP-2呈正相關(guān)，說(shuō)明Vav1與MMP-2在胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移中可能起協(xié)同作用，對(duì)此還需進(jìn)一步研究。

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Expression of Vav1 protein in gastric cancer and it′s relationship with clinical biological behaviors and prognosis of gastric cancer

FAN Li-qiao，TAN Ming，LI Yong，TAN Bi-bo，WANG Dong，LIU Qing-wei

(TheThirdDepartmentofSurgery，theFourthHospital，HebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050011，China)

Objective: To explore the relationship between the expression of Vav1 protein and clinical biological behavior，prognosis of gastric cancer，and to analysize of the relationship among Vav1 protein MMP-2 and TIMP-1 of the metastasis associated protein.Methods:Expressions of Vav1，MMP-2，TIMP-1 proteins in gastric cancer and paracancerous tissues were tested by immunohistochemistry.Data of clinicopathological characteristics and follow-up were also collected.Results: The expressions of Vav1，MMP-2 in gastric cancer were higher than in paracancerous tissue(allP<0.01)，whereas expression of TIMP-1 was lower in gastric cancer than in paracancerous tissues(P<0.01).The expression of Vav1 in gastric cancer was correlated with the tumor differentiation，tumor infiltration depth，lymph node metastasis and TNM stage(allP<0.05).Five years survival rate in patients with Vav1 positive was 26.26%，and the negative was 50.82%(P<0.05).Cox proportional hazard regression showed that the positive expression of Vav1 was an independent risk factor affecting the prognosis of patients(P<0.05).The expression of Vav1 was positive correlated with MMP-2(P<0.05).Conclusion:Vav1 is involved in the invasion，metastasis of gastric cancer，and positive expression of Vav1 may be an independent risk factor for the prognosis of patients with gastric cancer.

gastric cancer；Vav1 protein；invasion；metastasis；prognosis

2016-06-03

2016-08-25

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81372580)；河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(H2016206173)；河北省科技項(xiàng)目(14277779D)

范立僑(1963-)，男，山東淄博人，主任醫(yī)師，教授。E-mail：drflq@sina.com

李勇 E-mail：li_yong_hbth@126.com

范立僑，譚明，李勇，等.胃癌組織中Vav1蛋白表達(dá)與胃癌臨床生物學(xué)行為及預(yù)后的關(guān)系[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2017，36(1)：4-8.

R735.2

A

1671-6264(2017)01-0004-05

10.3969/j.issn.1671-6264.2017.01.002