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        Eales病患者血清中T淋巴細(xì)胞因子的檢測(cè)及臨床分析△

        2016-05-13 05:45:38趙娜陸勤康魏世輝王惠云童奇湖賴曉明
        中國(guó)眼耳鼻喉科雜志 2016年2期

        趙娜 陸勤康 魏世輝 王惠云 童奇湖 賴曉明

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        ·臨床研究·

        Eales病患者血清中T淋巴細(xì)胞因子的檢測(cè)及臨床分析△

        趙娜陸勤康魏世輝*王惠云童奇湖賴曉明

        【摘要】目的檢測(cè)Eales病患者血清中的T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)因子。方法采用Luminex技術(shù)分別檢測(cè)Eales病首發(fā)病例組、治愈病例組和健康對(duì)照組血清中輔助性T細(xì)胞1(TH1)亞群分泌的腫瘤壞死因子α(TNF-α)、干擾素γ(IFN-γ)和Th2細(xì)胞亞群分泌的白細(xì)胞介素4(IL-4)的濃度變化。結(jié)果TNF-α在首發(fā)病例組、治愈病例組和健康對(duì)照組的濃度分別為(23.08±0.22)、(12.36±0.16)、(12.38±0.13) pg/mL;IFN-γ的濃度分別為(18.23±0.26)、(7.07±0.19)、(6.66±0.22)pg/mL。首發(fā)病例組和治愈病例組(P<0.001),首發(fā)病例組和健康對(duì)照組(P<0.001),治愈病例組和健康對(duì)照組(P=0.04),各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IL-4在首發(fā)病例組、治愈病例組和健康對(duì)照組的濃度分別為(4.18±0.19)、(4.16±0.13)、(4.15±0.12)pg/mL。首發(fā)病例組和治愈病例組(P=0.03),首發(fā)病例組和健康對(duì)照組(P=0.01),各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;治愈病例組和健康對(duì)照組(P=0.79)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Th1和Th2細(xì)胞代表因子的比值IFN-γ/ IL-4在首發(fā)病例組、治愈病例組和健康對(duì)照組分別為4.26±0.11、1.70±0.08和1.49±0.06。首發(fā)病例組與治愈病例組(P<0.001),首發(fā)病例組與健康對(duì)照組(P<0.001),治愈病例組與健康對(duì)照組(P=0.02),各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論Eales病患者血清中T細(xì)胞因子的濃度均有不同程度升高,且Th1/Th2比值升高??梢?jiàn)Th1亞群分泌的細(xì)胞因子占優(yōu)勢(shì),可以證明T細(xì)胞亞群的失衡參與了Eales病的免疫機(jī)制。(中國(guó)眼耳鼻喉科雜志,2016,16:99-102)

        【關(guān)鍵詞】Eales?。幻庖咭蜃?;Luminex

        △基金項(xiàng)目:寧波市醫(yī)學(xué)科技計(jì)劃項(xiàng)目(2010A16)

        作者單位:浙江省寧波市鄞州人民醫(yī)院眼科中心(寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鄞州醫(yī)院眼科中心)寧波315040;

        *中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院眼科中心北京100853通訊作者:陸勤康(Email: 12556677@qq.com)

        Eales病又稱視網(wǎng)膜靜脈周?chē)?idiopathic retinal vasculitis),是一種視網(wǎng)膜血管炎癥性疾病,以血管的炎性滲出、玻璃體反復(fù)出血為主要特征,多為雙眼先后發(fā)病。在青年男性中患病率高,致盲率高[1]。該病的病因及發(fā)病機(jī)制尚無(wú)明確定論,多數(shù)學(xué)者認(rèn)為Eales病是由多種病因、多種系統(tǒng)參與引起的眼部疾病[2]。近年來(lái)已陸續(xù)有報(bào)道[3]提示,自身免疫機(jī)制存在于Eales病的發(fā)病機(jī)制中;而在1型糖尿病[4]、系統(tǒng)性紅斑狼瘡[5]、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎[6]等自身免疫性疾病中,已經(jīng)證實(shí)T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)因子的變化參與了其免疫機(jī)制。現(xiàn)為探討Eales病的免疫機(jī)制中是否也存在T細(xì)胞因子的變化,我們對(duì)Eales病患者血清中T細(xì)胞因子進(jìn)行檢測(cè)并做臨床分析,為揭示Eales病的發(fā)病機(jī)制提供理論依據(jù)。

        1資料與方法

        1.1研究對(duì)象的選擇及分組本研究選擇Eales病首發(fā)病例33例,設(shè)為首發(fā)病例組,均為男性;發(fā)病年齡21~39歲,平均(30.04±9.23)歲。臨床有玻璃體出血23例、未出血10例。治愈病例33例,設(shè)為治愈病例組,均為男性;發(fā)病年齡20~39歲,平均(29.87±9.08)歲。臨床有玻璃體出血20例、未出血13例。同時(shí)選擇健康獻(xiàn)血者33例作為健康對(duì)照組,年齡為20~40歲,既往健康,無(wú)自身免疫性疾病及遺傳病等病史,全身及眼部檢查正常。無(wú)特殊病史,眼科檢查無(wú)異常。

        本研究的診斷標(biāo)準(zhǔn)在Biswas等[7]提出的Eales病疑似病例診斷標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上,通過(guò)眼底表現(xiàn)、熒光素眼底血管造影(fundus fluorescein angiography, FFA)2項(xiàng)檢查顯示血管旁白鞘和靜脈管壁著染均陽(yáng)性者,即可診斷為視網(wǎng)膜靜脈周?chē)?圖1A、B)。治愈病例組患者通過(guò)口服藥物如皮質(zhì)類固醇激素、激光光凝術(shù)和玻璃體-視網(wǎng)膜手術(shù)等方法治療,以玻璃體積血吸收或手術(shù)清除,無(wú)玻璃體視網(wǎng)膜增殖性改變;視網(wǎng)膜周邊可見(jiàn)靜脈白鞘或硬化但無(wú)視網(wǎng)膜水腫及出血;FFA無(wú)靜脈滲漏作為Eales病臨床治愈標(biāo)準(zhǔn)(圖1C、D)。

        1.2方法受試者于晨起空腹抽取靜脈血,按試劑盒要求分離血漿,-30 ℃冰箱保存待測(cè)。試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D Systems公司,采用LuminexTM100-液相芯片分析平臺(tái)(美國(guó)Luminex公司研制)同時(shí)對(duì)腫瘤壞死因子-α(tumour necrosis factor α,TNF-α)、干擾素γ(interferon γ,IFN-γ)、白細(xì)胞介素4(interleukin 4,IL-4)進(jìn)行檢測(cè)。應(yīng)用MasterPlexTMQT多元數(shù)據(jù)分析軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,直接計(jì)算出同一孔中TNF-α、IFN-γ、IL-4的含量。

        圖1.眼底照相及FFA
        A. Eales病患者首發(fā)病例眼底照相顯示黃斑星芒狀滲出,靜脈可見(jiàn)白色炎癥滲出,顳側(cè)可見(jiàn)血管白鞘,視網(wǎng)膜點(diǎn)片狀出血;B. Eales病患者眼底FFA顯示,顳下象限視網(wǎng)膜新生血管膜扇形強(qiáng)熒光,血管壁熒光素滲漏,周邊部毛細(xì)血管無(wú)灌注,大片出血灶遮擋背景熒光;C. Eales病患者治愈病例眼底照相顯示顳側(cè)可見(jiàn)視網(wǎng)膜激光斑,血管白鞘,無(wú)玻璃體出血、視網(wǎng)膜水腫及出血;D. Eales病患者治愈病例眼底FFA顯示,眼底大致正常,無(wú)視網(wǎng)膜水腫及出血,無(wú)靜脈壁著染及滲漏

        1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS18.0分析軟件One-Way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

        2結(jié)果

        Eales病患者Th1型細(xì)胞因子TNF-α在首發(fā)病例組、治愈病例組和健康對(duì)照組的濃度含量分別為(23.08±0.22)、(12.36±0.16)、(12.38±0.13) pg/mL。首發(fā)病例組和治愈病例組(P<0.001),首發(fā)病例組和健康對(duì)照組(P<0.001),治愈病例組和健康對(duì)照組(P=0.03),各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        IFN-γ在首發(fā)病例組、治愈病例組和健康對(duì)照組的濃度含量分別為(18.23±0.26)、(7.07±0.19)、(6.66±0.22)pg/mL。首發(fā)病例組和治愈病例組(P<0.001),首發(fā)病例組和健康對(duì)照組(P<0.001),治愈病例組和健康對(duì)照組(P=0.04),各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        Th2細(xì)胞因子IL-4在首發(fā)病例組、治愈病例組和健康對(duì)照組的濃度含量分別為 (4.18±0.19)、(4.16±0.13)、(4.15±0.12)pg/mL。首發(fā)病例組和治愈病例組(P=0.03),首發(fā)病例組和健康對(duì)照組(P=0.01),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;治愈病例組和健康對(duì)照組(P=0.79),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        Th1和Th2細(xì)胞因子的比值IFN-γ/ IL-4在首發(fā)病例組、治愈病例組和健康對(duì)照組的比值分別為4.26±0.11、1.70±0. 08和1.49±0.06。首發(fā)病例組與治愈病例組(P<0.001),首發(fā)病例組與健康對(duì)照組(P<0.001),治愈病例組與健康對(duì)照組(P=0.02),各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

        表1 3組Th1、Th2細(xì)胞所分泌的細(xì)胞因子情況(pg/mL)

        3討論

        Th細(xì)胞根據(jù)功能不同可分為T(mén)h1和Th2細(xì)胞2個(gè)亞群,兩者通過(guò)分泌的不同細(xì)胞因子間的相互制約,處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài),維持著機(jī)體免疫系統(tǒng)的正常功能,Th1/Th2細(xì)胞平衡變化是體內(nèi)炎癥反應(yīng)與抗炎反應(yīng)及免疫平衡變化的基礎(chǔ)[8]。

        本實(shí)驗(yàn)采用較先進(jìn)的Luminex實(shí)驗(yàn)技術(shù),通過(guò) LuminexTM100-液相芯片分析平臺(tái),可同時(shí)對(duì)Eales病患者治療前、后血清中細(xì)胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-4進(jìn)行檢測(cè), 再應(yīng)用MasterPlexTMQT多元數(shù)據(jù)分析軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,直接計(jì)算出同一孔中IFN-γ、TNF-α、IL-4的含量。Luminex實(shí)驗(yàn)技術(shù)是在流式細(xì)胞術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和芯片的基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)的新一代研究平臺(tái),是一套多功能的液相反應(yīng)檢測(cè)系統(tǒng)。目前國(guó)內(nèi)應(yīng)用少見(jiàn)。

        實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示,Eales病患者血清中TNF-α的濃度升高。TNF-α是一種由單核-巨噬細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞等分泌的調(diào)節(jié)機(jī)體免疫和代謝過(guò)程的多功能細(xì)胞因子,過(guò)量的TNF-α可引起炎癥損傷和免疫抑制效應(yīng)[9]。TNF-α在首發(fā)病例組患者血清中的濃度升高可能是因?yàn)門(mén)NF-α作為炎癥介質(zhì),使局部發(fā)生炎癥反應(yīng)及周?chē)M織白細(xì)胞積聚,血管通透性增加,纖維蛋白沉積,微血栓形成,并刺激中性粒細(xì)胞附著血管壁,釋放溶酶體等物質(zhì),導(dǎo)致局部血管內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)損傷及脫落,形態(tài)發(fā)生顯著變化,以及大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),造成血管炎的發(fā)生,甚至出血[10]。另外,微血管病變是Eales病的特征性表現(xiàn),TNF-α導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞的損傷可能是引起微血管病變的主要因素。

        另外,Eales病患者血清中IFN-γ濃度升高。IFN-γ為Ⅱ型干擾素,主要由活化的T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞分泌,是典型的 Th1型炎性細(xì)胞因子,具有多種抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用,包括激活巨噬細(xì)胞和增強(qiáng)T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫[11]。Eales病患者首發(fā)病例組的血清中IFN-γ濃度明顯升高,原因可能是IFN-γ可以顯著上調(diào)人類主要組織相容性復(fù)合體(MHC)-II在單核巨噬細(xì)胞的表達(dá),促進(jìn)自身抗原的呈遞,增強(qiáng)T細(xì)胞對(duì)自身抗原的反應(yīng)[12]。此外, IFN-γ還可以促進(jìn)細(xì)胞間黏附分子1(intercellular adhesion molecule 1, ICAM-1)的表達(dá)。ICAM-1是內(nèi)皮損傷的一個(gè)重要指標(biāo)[13-15]。IFN-γ還具有明顯的溶細(xì)胞效應(yīng),其導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷可能是發(fā)生微血管病變的主要因素。

        Th2細(xì)胞因子IL-4在首發(fā)病例組、治愈病例組和健康對(duì)照組的濃度含量分別為 (4.18±0.19)、(4.16±0.13)、(4.15±0.12)pg/mL。首發(fā)病例組和治愈病例組(P=0.03),首發(fā)病例組和健康對(duì)照組(P=0.01),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治愈病例組和健康對(duì)照組(P=0.79),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。IL-4是B細(xì)胞增生和分化的重要因子,可減弱單核細(xì)胞的吞噬作用,抑制炎性因子IFN-γ、TNF和IL-6 的分泌,因而可控制炎癥的進(jìn)展,抑制細(xì)胞免疫的作用,與IFN-γ的作用相反。IL-4控制了由Th1致炎細(xì)胞因子造成的組織損傷。有報(bào)道[16]對(duì)IL-4抑制免疫應(yīng)答機(jī)制作了闡釋,IL-4作用于樹(shù)突細(xì)胞(dendritic cell, DC)的基部而減弱溶細(xì)胞性T細(xì)胞的應(yīng)答。IL-4阻止抗原刺激白細(xì)胞毒性前體物質(zhì)促DC分化的過(guò)程,從而影響DC 對(duì)CD8+T 細(xì)胞的活化。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,患者血液中IL-4的濃度比對(duì)照組升高,可見(jiàn)由于Th1中的炎性因子IFN-γ和TNF-α濃度顯著升高,刺激Th2細(xì)胞中的抗炎性、抑制免疫應(yīng)答因子IL-4濃度升高,以達(dá)到控制炎癥和調(diào)節(jié)免疫的目的。IL-4在Eales病的發(fā)生中起著保護(hù)免疫反應(yīng)的作用[17]。

        正常情況下,Th1和Th2細(xì)胞亞群兩者以相互拮抗和自身促進(jìn)的方式,形成復(fù)雜有序的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò),分別行使各自不同的生理功能,調(diào)節(jié)正常的免疫應(yīng)答。但是在某些疾病狀態(tài)下,淋巴細(xì)胞平衡失調(diào),產(chǎn)生細(xì)胞因子種類和數(shù)量發(fā)生變化,導(dǎo)致細(xì)胞免疫及體液免疫功能紊亂,引起異常免疫應(yīng)答。由于Th1/ Th2細(xì)胞比值較Th1細(xì)胞或Th2細(xì)胞更能體現(xiàn)患者體內(nèi)Th1細(xì)胞與Th2細(xì)胞的平衡情況,多數(shù)研究以高表達(dá)IFN-γ和IL-4分別代表Th1細(xì)胞和Th2細(xì)胞進(jìn)行比值分析間接反映機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能的情況[18]。本研究發(fā)現(xiàn),Eales病患者血清中T細(xì)胞亞群存在明顯失衡,Th1細(xì)胞占優(yōu)勢(shì),分泌模式朝Th1細(xì)胞偏移, 產(chǎn)生了所謂“免疫漂移”現(xiàn)象。Th1炎癥性細(xì)胞因子增加,而抑制細(xì)胞免疫的Th2細(xì)胞因子雖然也有小幅度提高,但并沒(méi)有起到控制炎癥和調(diào)節(jié)免疫的保護(hù)作用,使血液中Th1細(xì)胞因子相對(duì)增多明顯,結(jié)果進(jìn)一步導(dǎo)致Eales病細(xì)胞免疫及體液免疫功能紊亂,引起異常免疫應(yīng)答。因此Th1/Th2細(xì)胞失衡在Eales病變中起著一定的作用。Th1/Th2細(xì)胞比例失衡通過(guò)細(xì)胞間的接觸,極大地促進(jìn)了巨噬細(xì)胞和DC的活性和細(xì)胞因子的分泌,使得炎癥反應(yīng)持續(xù)存在,導(dǎo)致Eales病的發(fā)生。在研究中,我們還發(fā)現(xiàn),治愈病例組和健康對(duì)照組間也存在小幅度的Th1/Th2細(xì)胞比例失衡,說(shuō)明雖然Eales病患者的眼部并發(fā)癥得到完全治愈,但是體內(nèi)的T淋巴細(xì)胞亞群仍存在失衡。這可能也是Eales病容易復(fù)發(fā)的潛在因素。

        通過(guò)以上的實(shí)驗(yàn)研究分析,我們認(rèn)為Eales病患者血清中存在因T細(xì)胞亞群失衡引起的免疫功能紊亂現(xiàn)象。本研究為更深入探討Eales病的免疫機(jī)制提供了理論依據(jù),為Eales病的預(yù)防、監(jiān)測(cè)和治療提供了新思路,具有一定的臨床實(shí)用價(jià)值。然而本研究只分析了患病組、治愈組、健康對(duì)照組間T細(xì)胞因子的變化,而治療效果是否會(huì)對(duì)T細(xì)胞因子產(chǎn)生影響尚不明確。今后將采用免疫熒光法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證,進(jìn)一步探討T細(xì)胞因子在Eales病治療指導(dǎo)中的作用。

        參 考 文 獻(xiàn)

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        (本文編輯諸靜英)

        Detection of serum T lymphocytes cytokines of patients with Eales disease and its clinical significance

        ZHAONa,LUQin-kang,WEIShi-hui*,WANGHui-yun,TONGQi-hu,LAIXiao-ming.

        OphthalmologyCenter,YinzhouPeople’sHospitalofNingboCity,YinzhouHospitalAffiliatedtoMedicalSchoolofNingboUniversity,Ningbo315040,China

        【Abstract】ObjectiveTo detect the serum T lymphocytes cytokine of patients with Eales disease. MethodsLuminex technique was used to detect the concentration changes of tumour necrosis factor α(TNF-α) and interferon γ (IFN-γ) secreted by helper T cells 1 (Th1) subset and interleukin 4 (IL-4) secreted by Th2 subset in the serum of patients with Eales disease untreated group, cured group and healthy control group.ResultsThe concentrations of TNF-α in untreated group, cured group and healthy control group were (23.08±0.22),(12.36±0.16), (12.38±0.13) pg/mL, respectively; the concentrations of IFN-γ in untreated group, cured group and healthy control group were (18.23±0.26), (7.07±0. 19), (6.66±0.22) pg/mL, respectively. The differences of the concentration of TNF-α and IFN-γ between untreated group and cured group (P<0.001), untreated group and healthy control group (P<0.001), cured group and healthy control group (P=0.04), were statistically significant. The concentrations of IL-4 in untreated group, cured group and healthy control group were (4.18±0.19), (4.16±0.13), (4.15±0.12), respectively. The differences of the concentration of IL-4 between untreated group and cured group (P=0.03), untreated group and healthy control group (P=0.01) were statistically significant. While the difference was not statistically significant between cured group and healthy control group (P=0.79). The ratios of representative factors (IFN-γ/ IL-4) of Th1 and Th2 in untreated group, cured group and healthy control group were 4.26±0.11, 1.70±0. 08 and 1.49±0.06, respectively. The differences of the ratio between untreated group and cured group (P<0.001), untreated group and healthy control group (P<0.001), cured group and healthy control group (P=0.02) were statistically significant. ConclusionsConcentrations of T lymphocytes cytokines in the serum of Eales disease of patients are increased at diferent degrees, and the Th1/Th2 ratio is also increased, which indicates the domination of cytokines secreted by Th1 subset. The imbalance of T lymphocyte subsets participates in the immunological mechanism of Eales disease.(Chin J Ophthalmol and Otorhinolaryngol,2016,16:99-102)

        【Key words】Eales disease; Immune factors; Luminex

        (收稿日期2015-04-29)

        Corresponding author:LU Qin-kang, Email: 12556677@qq.com

        DOI:10.14166/j.issn.1671-2420.2016.02.009

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