朱芳　黃向華　宮心鵬

056002　河北省邯鄲市第一醫(yī)院(朱芳)；河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院(黃向華、宮心鵬)

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·綜述與講座·

TCDD對孕酮受體亞型的調節(jié)及與EMS發(fā)病的相關性

朱芳黃向華宮心鵬

056002河北省邯鄲市第一醫(yī)院(朱芳)；河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院(黃向華、宮心鵬)

【摘要】2，3，7，8-氯代二英(TCDD)與子宮內膜異位癥(endometriosis,EMS)的發(fā)病有關。本文從目前國內外對孕酮受體亞型及其與EMS發(fā)病相關性的研究現(xiàn)狀出發(fā)，介紹孕酮受體亞型結構與功能及其在EMS中的表達，通過對TCDD作用后子宮內膜孕酮受體及亞型的表達分析，論述TCDD對孕酮受體亞型的調節(jié)及其與EMS發(fā)病相關性。并在此基礎上提出深化研究TCDD的內分泌干擾機制以及尋找特異性更高的激素受體作用物應用于激素依賴性疾病的治療。TCDD對孕酮受體亞型的調節(jié)導致EMS發(fā)生與發(fā)展。

【關鍵詞】子宮內膜異位癥；2，3，7，8-氯代二英；孕酮受體

1孕酮受體及其亞型與EMS相關性

1.1孕酮受體結構與功能[6]孕激素活動通過其受體介導，孕酮受體(PR)屬于核受體家族成員之一，人孕酮受體(HPR)有多種亞型HPRA、HPRB、HPRC、HPRM等，它們都是HPR基因產(chǎn)物。其中最為主要為HPRA及HPRB，它們由2種不同的啟動子，2個不同位置的翻譯起始密碼子AUG1,AUG2分別轉錄和翻譯。PR從氨基酸序列N-末端到C-末端可分為A/B、C、D、E、F5個區(qū)域，A/B區(qū)即氨基末端為高變區(qū)，是受體抗體結合部位，該區(qū)有3個反式作用區(qū)域AF1、AF3、ID。AF1、AF3是反式作用激活結構域，可以募集受體激活蛋白來調節(jié)靶基因的啟動激活作用，AF2位于羥基末端，作用同AF1、AF3,且AF3為HPRB所特有。ID是轉錄抑制區(qū)，可以募集轉錄輔助抑制蛋白，兩者共有，但只在HPRA起作用，抑制AF1、AF2、ER但不抑制AF3功能。ID有利于HPRA與輔助抑制子(SMRT)結合，與HPRB不同，HPRA不能有效募集輔助激動子SRC-1和GRIPI,因此HPRA轉錄活性比HPRB弱，并且還可抑制HPRB的功能，C區(qū)為受體與DNA結合區(qū)域，能與基因調控區(qū)的特定DNA序列結合。D區(qū)為絞鏈區(qū)，無配體存在時可結合熱休克蛋白HSP90,從而阻止受體間形成二聚體。E區(qū)為配體結合域，為結構最大，功能最復雜區(qū)域，當有配體存在時與E區(qū)結合。PR通常以二聚體形式存在，當細胞中表達等分子質量的PRA、 PRB蛋白時，有三種二聚體方式結合DNA,如A∶A,B∶B,A∶B,二聚體形式，因此靶細胞中PRA、PRB蛋白比率不同可能會改變各種二聚化的相對成分，從而影響整個細胞對孕激素的反應。在正常月經(jīng)周期，子宮內膜中PRA和PRB共表達，且隨著月經(jīng)周期呈現(xiàn)周期性變化，增殖期持續(xù)上升，增殖晚期達到高峰，分泌期減少，分泌晚期和增殖早期只有少量表達，在整個月經(jīng)周期中PRA的表達水平都比PRB高。而絕經(jīng)后萎縮的內膜組織PRA表達較PRB明顯升高[7]。由此可見，孕酮受體亞型的功能與生理狀況相關，尤其是PRB的減少使其對子宮內膜的保護機制的下降可能與眾多子宮病變有關。

1.2EMS中孕酮孕酮受體亞型的表達孕酮受體亞型表達情況與EMS發(fā)病密切相關。呂艷文等[8]采集EMS患者(EMS組)以及宮頸上皮內瘤變(對照組)的子宮內膜為在位內膜，種植于裸鼠腹腔為EMS組和對照組的異位內膜，采用western印跡雜交方法檢測PRA與PRB蛋白表達情況進行比較分析，結果顯示，EMS組和對照組在位和異位內膜PRA蛋白均呈陽性表達，EMS組在位內膜和異位內膜PRB表達為陰性，而對照組均為陽性表達。提示PRB表達缺失與EMS發(fā)病有關。同樣，在卵巢巧克力囊腫組織中亦發(fā)現(xiàn)PRB mRNA及PR mRNA表達明顯低于正常內膜組織和EMS患者在位內膜組織，且PRB/PRA+B mRNA比值降低[9]。在對子宮腺肌癥異位組織PR檢測亦發(fā)現(xiàn)，子宮腺肌癥異位內膜間質細胞PR、PRA、PRB蛋白表達水平低于正常內膜，且以PRB為甚，PRA占優(yōu)勢[10]。以上研究均表明內異癥中孕酮受體亞型表達量的改變，以及PRA/PRB比值的改變參與了EMS形成機制中的“孕酮抵抗”。

2TCDD對孕酮受體及其亞型的調節(jié)及其與EMS發(fā)病機制的研究

TCDD致EMS發(fā)病的潛在機制目前尚不清楚。“孕酮抵抗”是EMS發(fā)病的重要因素，它導致基質金屬蛋白酶(MMPs)表達增強，導致細胞外基質降解，異位內膜的侵襲、粘附與其有密切的關系。它可以通過雌激素干擾作用或其他細胞生長、分化依賴的信號通路以及表觀遺傳學途徑來影響PR尤其是PRB在子宮內膜的表達，這些都可能導致EMS的發(fā)生與發(fā)展。

2.1TCDD雌激素干擾作用對孕酮受體及其亞型的調節(jié)雌激素受體(estrogen receptor,ER)是核受體超家族的成員之一，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的ER包括兩種亞型：ERα和ERβ。尤其值得注意的是，在許多的組織和細胞中，ERα和ERβ發(fā)揮著截然不同，甚至是相反的作用。在很多時候，ERβ表現(xiàn)出一種對雌激素行為更強的調控作用，研究都表明，當二者同時表達時，ERβ以一種濃度依賴的方式對ERα介導的轉錄活性進行拮抗[11，12]。雌激素可以增強PR的表達，而在此過程中ERα起到了重要作用[13]，而PRB的轉錄活性強于PRA，因此可以設想ERα降低對PRB的抑制作用較明顯。目前眾多研究者指出，內異癥患者在位及異位組織ERβ較正常組織表達高[14，15]，使ERα/ERβ比值下降可能參與了PR，尤其是間質細胞中PRB的下調[16]，TCDD雌激素干擾作用非常復雜，Tian等[17]給雌性C57BL/6J (B6) 小鼠喂飼TCDD(5 mg/kg)4 d后卵巢、子宮ER hnRNA 和ER mRNA表達下降，子宮中存在ERα和ERβ，但仍以ERα為主導。Swedenborg等[18]研究則表明TCDD對ERβ的抑制作用較ERα為強，以上研究均說明，TCDD對ERα，ERβ表達的影響干擾了PR尤其是PRB的表達。激素受體亞型之間復雜但密切的調節(jié)機制均參與了EMs的形成。

2.2TCDD信號通路干擾機制對孕酮受體及其亞型的調節(jié)孕酮對MMPs抑制作用的下調使MMPs表達增強，促使EMS的發(fā)生與發(fā)展。此依賴間質-上皮間的TGF-β2信號傳導[19]。Toshio等[20 ]取36例21～40歲女性正常增生期(11～14 d)子宮內膜，以及16例27～36歲EMS女性增生期子宮內膜(所有病例3個月內均未接受激素治療)體外處理和聯(lián)合培養(yǎng)子宮內膜間質與腺上皮細胞，給予1 nmol/人雌激素以及分別給予0、0.1、1、5、10、20 nmol/人 TCDD作用48～72 h,顯示TCDD作用后間質-上皮培養(yǎng)細胞體系中，間質細胞PRB的表達呈劑量依賴性下降，且在高劑量時尤為明顯，間質細胞中PRB/PRA降低使兩種細胞的MMPs表達上調，說明PRB/PRA直接參與調節(jié)MMPs表達。在上述實驗中TCDD對E2引起的MMPs表達影響不大，但對E2聯(lián)合P處理后MMPs表達有明顯增強作用。此實驗并沒有指出TCDD的抗雌激素效應，卻支持TCDD對P活動的干擾，而P作用的發(fā)揮需要借助間質-上皮間的聯(lián)系，間質細胞對甾體激素敏感，并調節(jié)了鄰近上皮細胞的功能[21]，此與先前研究中，子宮內膜短期暴露TCDD能夠阻斷P介導的MMPs下調是一致的[5]。Igarashi等[22]實驗結果顯示， TCDD處理可降低間質-上皮培養(yǎng)體系PR的表達,使特異MMP-3表達增強。以上研究表明，TCDD對P的反應，依賴于間質-上皮間的聯(lián)系。而TCDD短期暴露可使TGF-β2受到抑制，從而使MMPs表達上升，且研究特別指出TGF-β2 的抑制與PRB 的缺失密切相關，從而說明PRB 的缺失使子宮內膜孕酮反應基因和蛋白如TGF-β2表達下降 ，從而導致EMS的形成[23]。盡管TCDD的作用受體芳香烴受體(AhR)的內源性調節(jié)通路尚未得到很好的證明，但動物實驗模型反應了其在正常發(fā)育中的作用，因此，AhR可能為細胞進程中的調節(jié)物質，且與很多信號通路間存在直接或間接的相互作用。研究表明，AhR通路與TGF-β信號通路間存在相互作用[24]。AhR裸鼠胚胎纖維母細胞中(AhR-/-MEF)TGF-β水平是上升的，并且指出AhR-/-MEF中升高的TGF-β依賴于LTBP-1(TGF-β binding protein-1),它可對參與TGF-β釋放的兩種蛋白酶(纖維蛋白溶酶，彈性蛋白酶)起作用。而AhR-/-MEF細胞中AhR過度表達將導致增殖活性上升，非依賴配體的活化以及TGF-β水平的下降[25]。

3TCDD表觀遺傳學調節(jié)途徑對孕酮受體及其亞型調節(jié)

研究表明早期暴露可以從表觀遺傳學的角度改變一些主要基因的表達，從而導致成年后疾病的發(fā)生[26]，表觀遺傳學是指在基因組中除了DNA和RNA序列以外,還有許多調控基因的信息,它們雖然本身不改變基因的序列,但是可以通過對基因DNA和組蛋白的化學修飾,RNA干擾,蛋白質與蛋白質、DNA和其它分子的相互作用,而影響和調節(jié)基因的功能和特性,并且通過細胞分裂和增殖周期遺傳給后代[27]。Sasaki等[28-30]在對子宮內膜癌細胞系(UEC)研究中發(fā)現(xiàn)在此細胞系中PRB失活，而PRA活性依然存在，PRB失活是由其基因啟動子區(qū)CpG島甲基化引起，導致子宮內膜癌的發(fā)生。

以上研究表明，TCDD作為外源性配體與AhR結合后，存在孕酮受體尤其對PRB的下調機制，從而導致EMS的發(fā)病與發(fā)展?？梢栽O想，TCDD有可能通過對孕激素受體敏感基因的作用，或激素受體作用機制中信號傳導通路的干擾改變了其在組織中的表達，再次表明TCDD的內分泌干擾機制有待于進一步深化研究。對于臨床我們期待特異性更高的激素受體作用物應用于激素依賴性疾病的治療。

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(收稿日期：2015-11-24)

【中圖分類號】R 711.71

【文獻標識碼】A

【文章編號】1002-7386(2016)09-1409-03

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.09.043