龐衛(wèi)花　徐娜　楊敬芳　安和兵　李金巍

075100　河北省張家口市，河北北方學院附屬第二醫(yī)院檢驗科(龐衛(wèi)花、楊敬芳、安和兵、李金巍)，婦產(chǎn)科(徐娜)

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·論著·

ABO血型正反定型與交叉配血實驗結(jié)果及影響因素分析

龐衛(wèi)花徐娜楊敬芳安和兵李金巍

075100河北省張家口市，河北北方學院附屬第二醫(yī)院檢驗科(龐衛(wèi)花、楊敬芳、安和兵、李金巍)，婦產(chǎn)科(徐娜)

【摘要】目的分析ABO血型正反定型與交叉配血實驗結(jié)果，并探討其影響因素。方法選擇3 000例血清標本，采用微柱凝膠法行ABO正反定型及Rh血型鑒定，并與異型血進行交叉配血。對78例ABO正反定型與交叉配血不合的標本，采用2-Me處理被患者自身冷抗體凝集的紅細胞，凝聚胺法及微柱凝膠法行血型不規(guī)則抗體篩選及特異性鑒定，氯喹放散法測定自身抗體所掩蓋的同種抗體等，分析ABO血型正反定型不符與交叉配血不合的原因。結(jié)果3 000例經(jīng)正定型檢測的血清標本，其中紅細胞定型為A型879例，676例檢出抗B，203例未檢出抗B，抗B檢出率76.9%(676/879)；紅細胞定型為B型1 034例，762例檢出抗A，272例未檢出抗A，抗A檢出率73.7%(762/1 034)；紅細胞定型為O型1 087例，770例同時檢出抗A和抗B，抗A和抗B檢出率70.8%(770/1 087)，76例僅檢出抗A，抗A檢出率7.0%(76/1 087)，60例僅檢出抗B，抗B檢出率5.5%(60/1 087)，181例未檢出抗A和抗B。選擇反定型完全沒出現(xiàn)凝集反應的800例血清標本，采用微柱凝膠法進行交叉配血實驗，結(jié)果顯示，78例出現(xiàn)凝集反應，配血不合。經(jīng)分析，ABO血型正反定型不符與交叉配血不合的原因主要有：自身冷抗體21例(26.9%)、血型不規(guī)則抗體14例(17.9%)、血型抗原性減弱11例(14.1%)、血型抗體效價減弱9例(11.5%)、自身抗體陽性9例(11.5%)、實驗方法學原因6例(7.7%)，此外，肝素影響及血標本細菌污染也為重要原因。結(jié)論ABO血型鑒定中正反定型大部分一致，而出現(xiàn)正反定型不符與交叉配血不合的原因有多種，其中自身冷抗體、血型不規(guī)則抗體、血型抗原性減弱、血型抗體效價減弱、自身抗體陽性占較大比例，臨床輸血前應采取多種血型血清學檢測方法進行相互驗證，確保臨床輸血安全，保障患者安全。

【關(guān)鍵詞】ABO血型；正反定型；交叉配血；微柱凝膠法

對于失血性休克、貧血及重癥感染、燒傷等危重患者，數(shù)學為臨床常用重要干預手段之一。目前，臨床雖提倡成分輸血，安全性較高。但研究表明，輸血在挽救患者生命同時，也帶來一定不良反應，如免疫抑制、溶血性輸血反應等，嚴重時可影響患者生命安全[1]。有文獻報道，ABO血型正反定型不符可致急性溶血性貧血等發(fā)生，給患者生命安全帶來嚴重威脅[2]。本研究檢測我院2012年4月至2014年4月共3 000例患者、送檢血樣及獻血員標本，并對一些ABO血型正反定型不符標本進行交叉配血實驗，探討ABO血型正反定型不符與交叉配血不合的原因及對處理方式進行探討，以期為臨床安全輸血提供建議。

1資料與方法

1.1一般資料選取2012年4月至2014年4月我院3 000例患者、送檢血樣及獻血員標本，送檢驗科進行ABO血型鑒定。其中男1 800例，女1 200例；年齡5～85歲，平均年齡(39±12)歲。包括白血病患者325例，多發(fā)性骨髓瘤患者91例，骨髓纖維化患者24例，貧血患者288例，腸癌患者164例，消化道出血患者270例，外科手術(shù)患者269例，以及其他相關(guān)疾病患者1 569例。篩選出ABO血型正反定型不符與交叉配血不合的78例患者作為研究對象，其中男41例，女37例；年齡20～65歲，平均年齡(46±9)歲。本研究均經(jīng)患者及家屬知情同意，且均符合醫(yī)院倫理委員會基本要求。

1.2試劑所用試劑抗A、抗B、抗A+B、抗H、抗A1、抗D、抗c等均購自上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司，反定型后細胞懸液由長春博德生物制品研究所提供；微柱凝膠卡及專用離心機購自達亞美公司。

1.3儀器免疫微柱離心機、卡式專用離心機、免疫微柱孵育箱購自達亞美公司。

1.4血型鑒定方法

1.4.1ABO血型正反定型:使用長春博訊ABO、RhD血型定型試劑卡將全體血樣標本進行ABO血型正反定型，篩選出正反定型不符的標本。對此初次出現(xiàn)正反定型不符的標本重新采集，并嚴格按照微柱凝膠卡操作規(guī)程重復試驗，以排除人為因素及技術(shù)失誤。對重新采集的血樣，留取唾液做進一步的血型物質(zhì)鑒定。

1.4.2交叉配血:將患者血清及紅細胞放置37℃水浴中預溫10 min，再采用微柱凝膠法進性交叉配血實驗。

1.4.3ABO血型正反定型與交叉配血不符的進一步鑒定:應用2-Me處理被患者自身冷抗體凝集的紅細胞，凝聚胺法及微柱凝膠法行血型不規(guī)則抗體篩選及特異性鑒定，氯喹放散法測定自身抗體所掩蓋的同種抗體。

1.5鑒定標準鑒定檢測均參照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》和《臨床輸血診療技術(shù)》進行。

2結(jié)果

2.1血清ABO血型抗體檢測結(jié)果選取3 000例經(jīng)正定型檢測的血清標本，其中紅細胞定型為A型879例，676例檢出抗B，203例未檢出抗B，抗B檢出率76.9%(676/879)，正反定型不相符率4.2%(37/879)；紅細胞定型為B型1 034例，762例檢出抗A，272例未檢出抗A，抗A檢出率73.7%(762/1 034)，正反定型不相符率4.2%(43/1 034)；紅細胞定型為O型1 087例，770例同時檢出抗A和抗B，抗A和抗B檢出率70.8%(770/1 087)，正反定型不相符率1.8%(20/1 087)76例僅檢出抗A，抗A檢出率7.0%(76/1 087)，60例僅檢出抗B，抗B檢出率5.5%(60/1 087)，181例未檢出抗A和抗B。見表1。

表1　3 000例血清標本ABO抗體檢出情況

2.2血清反定型與反應時間的關(guān)系選取正定型為A型、反定型為B性的血清標本各1 000例進行反定型檢測，結(jié)果顯示，隨著反應時間延長，出現(xiàn)凝集反應的標本數(shù)逐漸增多。見表2。

表2　正定型為A、B型血清標本各1 000例反定型實驗檢測情況　例(%)

2.3交叉配血實驗選擇反定型完全沒出現(xiàn)凝集反應的800例血清標本，采用微柱凝膠法進行交叉配血實驗，結(jié)果顯示，78例出現(xiàn)凝集反應，配血不合。

2.4ABO血型正反定型不符與交叉配血不合的原因分析經(jīng)ABO正反定型、吸收放散試驗、抗人球蛋白試驗及血型不規(guī)則抗體篩選等，整理分析得出造成ABO血型正反定型不符與交叉配血不合的原因主要有：自身冷抗體、血型不規(guī)則抗體、血型抗原性減弱、血型抗體效價減弱、自身抗體陽性等。見表3。

表3　ABO血型正反定型不符與交叉配血不合的原因分析

3討論

輸血對于失血性休克等危重患者具有重要臨床價值，有文獻報道，輸血前有部分患者ABO血型正反定型不符及交叉配血不合，導致無法確認患者血型，影響輸血搶救，不利于臨床治療[3,4]。正因如此，探討ABO血型正反定型不符及交叉配血不合相關(guān)原因具有重要價值。

本研究采用微柱凝膠法結(jié)合血清學方法檢測ABO血型正反定型，并與異型血進行交叉配血實驗，篩選出其中ABO血型正反定型與交叉配血不合病例。本結(jié)果顯示，879例紅細胞定型為A型的標本正反定型不相符率4.2%(37/879)，1 034例紅細胞定型為B型的標本正反定型不相符率4.2%(43/1 034)，1 087例紅細胞定型為O型的標本正反定型不相符率1.8%(20/1 087)，說明3 000例標本中大部分患者ABO血型正反定型一致。交叉配血實驗結(jié)果顯示，800例標本中有78例出現(xiàn)凝集反應，配血不合。我們分析其原因，主要影響因素：(1)自身冷抗體：為影響ABO血型正反定型不符及交叉配血不合最為常見原因之一。健康人群冷凝集素效價一般低于1∶16，其活性在0～4℃時最強，能夠與紅細胞結(jié)合引起凝集反應[5]。但在支原體肺炎、自身免疫性貧血、傳染性單核細胞增多癥、某些惡性腫瘤等病理情況下，患者血清中具有高效價冷凝激素，影響檢測結(jié)果[5,6]。此種情況下，需加做自身對照并結(jié)合冷抗體效價檢測、冷抗體吸收試驗、直接抗人球蛋白試驗等一系列實驗進行鑒定。本研究發(fā)現(xiàn)，對此類患者將血清及紅細胞置于37°C孵育15 min行離心觀察，于凝固狀態(tài)下使用2-Me處理紅細胞，后進行ABO正定型，有助于準確判斷。(2)血型不規(guī)則抗體：血型不規(guī)則抗體為ABO血型不合另一重要原因，有研究表明，血型不規(guī)則抗體檢出率為0.3%～2.0%，為引起較差配血不合及輸血反應的重要原因之一。在自身對照為陰性情況下，若反定型與O型細胞凝集反應呈陽性，則應該考慮血型不規(guī)則抗體出現(xiàn)的可能性[7]。針對于此種原因時，可通過細胞及譜細胞篩選出血型不規(guī)則抗體并進行特異性鑒定，從而選擇合適血液進行輸血搶救。(3)血型抗原性減弱：血型抗原減弱為ABO血型不符及交叉配血不合發(fā)生的另一重要原因。相關(guān)研究表明，白血病及惡性腫瘤患者由于外周血出現(xiàn)大量原始及幼稚細胞，引起血型抗原性減弱，從而導致血型誤定現(xiàn)象發(fā)生[8, 9]。此時，加大試劑血清劑量，延長放置時間后再行離心試驗觀察則有助于判斷。(4)血型抗體效價下降：血型抗體減弱臨床應重視。有研究表明，若僅為抗體減弱，延長抗原抗體反應時間或者加大血清劑量有助于評估[6]。(5)自身抗體陽性：自身抗體陽性主要指機體收到自身血型抗原刺激后，機體所產(chǎn)生的免疫性抗體，可采取抗人球蛋白法進行判斷。(6)血漿蛋白異常：血漿蛋白異常為ABO血型正反定型不符及交叉配血不合的重要因素，肝臟疾病、多發(fā)性骨髓瘤等患者血清中存在異常球蛋白，且部分疾病可引起纖維蛋白水平增高等可致定型困難[10]。(7)實驗方法學原因：在使用微柱凝膠法檢測ABO血型時，如果血標本抗凝效果差或者離心時間過短等原因?qū)е卵欣w維蛋白含量升高進而出現(xiàn)假性凝集反應[11]。因此，臨床檢測過程中應嚴格按照步驟進行操作，盡量消除血中纖維蛋白對結(jié)果的影響。(8)血樣污染：細菌污染能夠激活紅細胞上的T抗原，從而與供血者血清中的抗T抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集反應，這也是造成假陽性結(jié)果的原因之一。臨床進行血型鑒定及交叉配血工作時，應盡量選擇新鮮的血標本，保障臨床輸血安全。

綜上所述，正確的ABO血型正反定型及交叉配血是保證臨床安全輸血的關(guān)鍵和前提，引起正反定型不符及交叉配血不合的原因有多種，其中自身冷抗體、血型不規(guī)則抗體、血型抗原性減弱、血型抗體效價減弱、自身抗體陽性等均為重要原因，針對于不同情況，我們可采取針對性措施以降低其發(fā)生，保障臨床輸血安全。

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(收稿日期：2015-12-11)

【中圖分類號】R 446.11

【文獻標識碼】A

【文章編號】1002-7386(2016)09-1366-03

doi:10.3969/j.issn.1002-7386.2016.09.027