宋文韜，孫燕來，徐忠法

(濟(jì)南大學(xué)·山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院生命與科學(xué)學(xué)院·山東省腫瘤醫(yī)院，濟(jì)南250000)

CMTM3在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及意義

宋文韜，孫燕來，徐忠法

(濟(jì)南大學(xué)·山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院生命與科學(xué)學(xué)院·山東省腫瘤醫(yī)院，濟(jì)南250000)

目的 探討趨化素樣因子樣MRVEL跨膜結(jié)構(gòu)域超家族成員3(CMTM3)在結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 采用免疫組化法檢測104例份結(jié)直腸癌組織及其配對癌旁正常組織中CMTM3表達(dá)，分析結(jié)直腸癌組織中CMTM3表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 CMTM3在結(jié)直腸癌組織及癌旁正常組織中的陽性表達(dá)率分別為15.4%(16/104)、100%(104/104)，二者比較P<0.01。結(jié)直腸癌組織CMTM3陽性表達(dá)與腫瘤直徑、組織分化程度、NCCN分期及腫瘤類型有關(guān)(P均<0.05)，與患者性別、年齡、腫瘤部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、合并腸道多發(fā)息肉及便血無關(guān)(P均>0.05)。結(jié)論 結(jié)直腸癌組織中CMTM3表達(dá)降低，其表達(dá)降低可促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展。

結(jié)直腸癌；趨化素樣因子樣MRVEL跨膜結(jié)構(gòu)域超家族成員3；免疫組化

目前尚無可準(zhǔn)確預(yù)測結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)記物。趨化素樣因子(CKLF)樣MRVEL跨膜結(jié)構(gòu)域超家族(CMTM)是2003年北京大學(xué)發(fā)現(xiàn)的一個新基因家族，該家族包括9個基因，即CKLF和CMTM 1～8。CKLF和CMTM 1～4在人類染色體16q22上形成一個基因簇，CMTM 6～8在3q22形成一個基因簇，CMTM5獨(dú)立定位與14q11.2。因腫瘤患者上述染色體區(qū)域常缺失，故該區(qū)域被認(rèn)為是富含抑癌基因的區(qū)域。CMTM3定位于抑癌基因富集區(qū)，在正常組織中高表達(dá)，在腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)或缺失，其啟動子區(qū)的CpG島存在甲基化修飾，在腫瘤細(xì)胞中恢復(fù)其表達(dá)，可抑制腫瘤細(xì)胞增殖、遷移，甚至啟動細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，CMTM3在多種腫瘤(如胃癌、乳腺癌等)組織中表達(dá)被抑制甚至缺失[1]。但其在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)情況鮮見報(bào)道。本研究觀察CMTM3在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)情況，探討其在結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年10月～2015年10月在山東省腫瘤醫(yī)院行結(jié)直腸癌根治性切除術(shù)患者104例，男62例、女42例，年齡<50歲者18例、≥50歲者86例。所有患者經(jīng)術(shù)后組織病理檢查明確診斷。腫瘤部位：左半結(jié)腸癌20例，右半結(jié)腸癌18例，直腸癌66例；腫瘤類型：潰瘍型79例，菜花型7例，隆起型18例；腫瘤直徑：<5 cm者60例，≥5 cm者44例；腫瘤組織分化程度：高分化者72例，低分化者32例； NCCN分期：Ⅰ、Ⅱ期48例，Ⅲ、Ⅳ期56例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者57例，合并腸道多發(fā)息肉者14例，有便血者59例。所有患者排除結(jié)直腸腺瘤、家族性腺瘤性息肉病相關(guān)結(jié)直腸癌、遺傳性非息肉性結(jié)直腸癌等，以及術(shù)前行新輔助化療者。

1.2 結(jié)直腸癌組織及癌旁正常組織CMTM3表達(dá)檢測 采用免疫組化法。取結(jié)直腸癌組織及其配對癌旁正常組織，10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚切片；切片置于60 ℃烘箱烤片2 h，二甲苯脫蠟、乙醇水化、3%過氧化氫阻斷15 min。枸櫞酸鹽緩沖液熱修復(fù)，水浴煮沸20 min，自然冷卻至室溫。5% BSA或TBST-5% NGS消除非特異性染色。CMTM3用鼠抗人CMTM3單抗，陰性對照用PBS緩沖液作為一抗。一抗稀釋倍數(shù)為1∶200。4 ℃濕盒中孵育過夜。滴加適量二抗，室溫孵育20 min，PBS漂洗3次、每次5 min。辣根酶標(biāo)記工作液，DAB鏡下控制顯色，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，中性樹膠封片。顯微鏡下拍照觀察。結(jié)果判定：采用半定量法評估染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分比。染色強(qiáng)度-、+、++、+++分別計(jì)0～3分；陽性細(xì)胞百分比<5%、≥5%～<25%、≥25%～<50%、≥50%分別計(jì)0～3分。染色強(qiáng)度評分×陽性細(xì)胞百分比評分≥3為CMTM3陽性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確概率檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)直腸癌組織及癌旁正常組織CMTM3陽性表達(dá)率分別為15.4%(16/104)、100%(104/104)，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=17.33，P<0.01)。CMTM3陽性表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系見表1。

表1 結(jié)直腸癌組織CMTM3陽性表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討論

近年來隨著我國人口老齡化、生活水平提高、飲食習(xí)慣和結(jié)構(gòu)改變，結(jié)直腸癌的發(fā)病率和病死率呈明顯上升趨勢，特別是青年群體的發(fā)病率明顯升高[1～8]。目前，根治性切除術(shù)是結(jié)直腸癌的主要治療手段，但術(shù)后一旦出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，其5年生存率明顯下降。CEA、CA19-9等為臨床判斷腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的常用生物標(biāo)記物，但在結(jié)直腸癌中的敏感性和特異性較低[9]。結(jié)直腸鏡定期復(fù)查配合可疑病變標(biāo)本檢測雖然可直觀準(zhǔn)確地判斷局部復(fù)發(fā)情況，但成本高，患者痛苦大、依從性差。CMTM是一個新的CKLF超家族[10]，CMTM3是其家族成員之一，定位于16q22.1。CMTM3在正常人體組織中廣泛表達(dá)，但在多種腫瘤組織中表達(dá)被抑制甚至缺失；恢復(fù)腫瘤細(xì)胞CMTM3表達(dá)可抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡[1]。啟動子區(qū)CpG甲基化導(dǎo)致基因沉默是CMTM3表達(dá)下調(diào)的主要機(jī)制，而CpG甲基化導(dǎo)致腫瘤的抑癌基因功能喪失被認(rèn)為是腫瘤形成、發(fā)展的重要環(huán)節(jié)和表觀遺傳學(xué)改變[11～14]。

本研究結(jié)果顯示，在結(jié)直腸癌組織中CMTM3陽性表達(dá)率明顯低于癌旁正常組織。表明CMTM3在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)下調(diào)甚至缺失。這與CMTM3在大多數(shù)腫瘤組織中的表達(dá)結(jié)果基本一致[1]。本研究還發(fā)現(xiàn)，CMTM3陽性表達(dá)與腫瘤直徑、組織分化程度、NCCN分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及腫瘤類型有關(guān)，而與患者性別、年齡、腫瘤部位、合并腸多發(fā)息肉及便血無關(guān)。而結(jié)直腸癌腫瘤直徑、組織分化程度、NCCN分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤類型等是影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素，說明結(jié)直腸癌組織中CMTM3表達(dá)降低可作為判斷患者預(yù)后不良的指標(biāo)。

綜上所述，結(jié)直腸癌組織中CMTM3表達(dá)下調(diào)甚至缺失，其表達(dá)降低與腫瘤直徑、組織分化程度、NCCN分期等有關(guān)，有可能成為新的判斷結(jié)直腸癌預(yù)后的分子標(biāo)記物。

[1] Wang Y, Li J, Cui Yan, et al. CMTM3, located at the critical tumor suppressor locus 16q22.1, is silenced by CpG methylation in carcinomas and inhibits tumor cell growth through inducing apoptosis[J]. Cancer Res, 2009,69(12):5194-5201.

[2] Rizzo S, Bronte G, Fanale D, et al. Prognostic vs predictive molecular biomarkers in colorectal cancer: is KRAS and BRAF wild type status required for anti-EGFR therapy[J]. Cancer Treat Rev, 2010,36(Suppl 3):S56-S61.

[3] Center MM, Jemal A, Ward E. Internations trends in colorectal cancer incidence rates[J]. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 2009,18(6):1688-1694.

[4] Sung JJ, Lau JY, Young GP, et al. Asia pacific consensus recomendations for colorectal cancer screening[J]. Gut, 2008,57(8):1166-1176.

[5] Yee YK, Tan VP, Chan P, et al. Epidemiology of colorectal cancer in Asia[J]. J Gastroenterol Hepatol, 2009,24(12):1810-1816.

[6] Jemal A, Siegel R, Xu J, et al. Cancer Statistics, 2010[J]. CA Cancer J Clin, 2010,60(5):277-300.

[7] Yang L, Parkin DM, Li LD, et al. Estimation and projection of the national profile of cancer mortality in China: 1991-2005[J]. Br J Caneer, 2004,90(11):2157-2166.

[8] 李泓瀾，高玉堂，鄭瑩，等.上海市區(qū)居民1973-2005年結(jié)直腸癌發(fā)病趨勢分析[J].中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2009，43(10)：875-879.

[9] 房學(xué)強(qiáng)，馬清，李會慶，等.1970-2005年山東省腸癌患者死亡率變化趨勢分析[J].中國癌癥雜志，2009，19(11)：846-850.

[10] Chapman MA, Buekley D, Henson DB, et al. Preoperative careinoembryonic antigen is related to tumour stage and long-term survival in colorectal cancer[J]. Br J Cancer, 1998,78(10):1346-1349.

[11] Ying J, Li H, Chen YW, et al. WNT5A is epigenetically silenced in hematologic malignancies and inhibits leukemia cell growth as a tumor suppressor[J]. Blood, 2007,110(12):4130-4132.

[12] Jones PA, Baylin SB. The fundamental role of epigenetic events in cancer[J]. Nat Rev Genet, 2002,3(6):415-428.

[13] Knudson AG. Two genetic hits (more or Iess) to caneer[J]. Nat Rev Cancer, 2001,1(2):157-162.

[14] Ying J, Srivastava G, Hsieh WS, et al. The stress-responsive gene GADD45G is a functional tumor suppressor, with its response to environmental stresses frequently disrupted epigenetically in multiple tumors[J]. Clin Cancer Res, 2005,11(18):6442-6449.

山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2015WS0149)。

徐忠法(E-mail： xzfa2216@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.24.015

R735.3

B

1002-266X(2016)24-0045-03

2016-02-29)