劉智會(huì)，鄧小芳，許曉明

(長(zhǎng)春市園林植物保護(hù)站，長(zhǎng)春130022)

?

玉簪白絹病菌最適培養(yǎng)基的篩選

劉智會(huì)，鄧小芳，許曉明

(長(zhǎng)春市園林植物保護(hù)站，長(zhǎng)春130022)

摘要：采用了從不同采集地得到的3個(gè)玉簪白絹病菌株，選用了5種常見(jiàn)培養(yǎng)基，對(duì)3個(gè)白絹病菌株進(jìn)行培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所有供試菌株在5種培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)、產(chǎn)核。但是菌絲生長(zhǎng)與產(chǎn)核量存在差異，3個(gè)菌株在PDA、玉米粉瓊膠培養(yǎng)基和燕麥片瓊膠培養(yǎng)基上均生長(zhǎng)良好，以PDA最佳，營(yíng)養(yǎng)瓊膠培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最差；平均產(chǎn)核量以PDA上最多；故得出，PDA為最適培養(yǎng)基。且菌株之間的在菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)核量方面也存在差異，具體表現(xiàn)為Y1>Y3>Y2，菌絲生長(zhǎng)與產(chǎn)核量成正相關(guān)關(guān)系。

關(guān)鍵詞：玉簪；白絹病菌株；菌絲生長(zhǎng)；產(chǎn)核量；最適培養(yǎng)基

玉簪是玉簪屬(Hosta)植物的統(tǒng)稱，屬百合科(Liliaceae)多年生宿根草本植物，主要分布在東北亞的溫帶與亞熱帶地區(qū)，如中國(guó)、日本、朝鮮及蘇聯(lián)的遠(yuǎn)東地區(qū)[1]。玉簪屬名從1712年開(kāi)始進(jìn)行簡(jiǎn)單分類，經(jīng)過(guò)多次更改確認(rèn)，直到1905年Hosta才成為合法屬名。目前美國(guó)玉簪協(xié)會(huì)及國(guó)際登陸以專著《The Genus Hosta》(1991)為基準(zhǔn)[2]Schmid在研究新資料的前提下將玉簪屬分3個(gè)亞屬10個(gè)組，共43種，而中國(guó)有4種。目前，世界已命名的玉簪品種多達(dá)4000種，每年還有許多新的優(yōu)良品種培育出來(lái)[3-4]。玉簪以品種繁多、花葉觀賞俱佳、抗逆性強(qiáng)，深受人們的喜愛(ài)，至20世紀(jì)末成為世界銷量第一的草本花卉[5-6]。另外，玉簪全株均可入藥，主要具有清熱、解毒、止血、止咳等功效。

玉簪在生長(zhǎng)過(guò)程中極易遭受病原菌的危害，使葉片出現(xiàn)大片枯黃，影響開(kāi)花觀賞甚至發(fā)生莖基部腐爛引起整株死亡。其中發(fā)生最普遍最常見(jiàn)造成危害最嚴(yán)重的要屬玉簪白絹病，發(fā)生面積大，危害時(shí)期長(zhǎng)，危害程度嚴(yán)重，常常對(duì)玉簪的葉片造成極為嚴(yán)重的危害，影響觀賞效果，常常是整個(gè)生長(zhǎng)季，大片的玉簪都是遍地枯黃，只留一株株花蕊獨(dú)立，而且不易防治。本文選用了從長(zhǎng)春市區(qū)的御花園、勝利公園、杏花邨3處采集到的玉簪白絹病的病株，通過(guò)菌株分離純化得到的3個(gè)白絹病原菌菌株。由于白絹病在三處所表現(xiàn)的致病力不同，所以為了更深入了解玉簪白絹病的生物學(xué)特性，更好的防治白絹病在玉簪上的發(fā)生及有效的防治，現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室條件下，選取5種不同培養(yǎng)基，進(jìn)行培養(yǎng)，選出最適合玉簪白絹病菌株菌絲生長(zhǎng)、更利于菌核產(chǎn)生的培養(yǎng)基。通過(guò)觀察其對(duì)菌絲生長(zhǎng)及產(chǎn)核量的影響，明確不同營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)玉簪白絹病菌株是否存在影響以及不同來(lái)源的菌株之間是否存在差異。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

供試的3個(gè)菌株分別來(lái)自長(zhǎng)春市的御花園、勝利公園、杏花邨三個(gè)公園，將在3處采集到的帶病植株進(jìn)行病原菌組織分離、純化得到3個(gè)玉簪白絹病病原菌，并采用常規(guī)方法將其在PDA培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)[2]，得到相應(yīng)菌株，編號(hào)分別為Y1、Y2、Y3，放于4℃的冰箱中保存。

1.2試驗(yàn)方法

供試培養(yǎng)基供試培養(yǎng)基為PDA、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、寄主葉片培養(yǎng)基、玉米粉瓊膠培養(yǎng)基、燕麥片瓊膠培養(yǎng)基，配方如下[6-8]。馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基(PDA)：葡萄糖20.0g、馬鈴薯200.0g、瓊脂20.0g、蒸餾水1000mL；營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨10g、氯化鈉5g、牛肉膏粉3g、瓊脂15g、蒸餾水1000mL；寄主汁液(加葡萄糖)培養(yǎng)基：寄主葉10.0g、瓊脂20.0g、葡萄糖20.0g、蒸餾水1000mL；玉米粉瓊脂培養(yǎng)基：玉米粉30.0g、瓊脂20.0g、蒸餾水1000mL；燕麥片瓊脂培養(yǎng)基：燕麥片30.0g、瓊脂20.0g、蒸餾水1000mL；將上述培養(yǎng)基高溫滅菌后，取10mL倒入培養(yǎng)皿內(nèi)，冷卻后，接入5mm菌塊，每個(gè)處理3次重復(fù)，25℃下培養(yǎng)，3d后測(cè)量菌落直徑，并在無(wú)菌室拍照[8]。菌落在測(cè)量直徑后繼續(xù)培養(yǎng)10d，開(kāi)始觀察，35d后統(tǒng)計(jì)菌核產(chǎn)量。

2結(jié)果與分析

圖1　供試菌株在各個(gè)培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況

圖2　供試菌株在各個(gè)培養(yǎng)基上的產(chǎn)核狀況(第21d)

培養(yǎng)基名稱菌株編號(hào)菌落平均直徑/mm菌絲生長(zhǎng)狀況平均產(chǎn)核量/個(gè)營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基Y1Y2Y326.323.622.7******1321511玉簪葉片培養(yǎng)基Y1Y2Y34034.633**********402420玉米粉瓊膠培養(yǎng)基Y1Y2Y343.34139************1644882燕麥片瓊膠培養(yǎng)基Y1Y2Y340.838.838.6************675252PDAY1Y2Y3454440************24464136

備注：“**”，生長(zhǎng)差，“***”生長(zhǎng)良好，“****”生長(zhǎng)特別好。

2.13個(gè)菌株在5種培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)情況

從圖1和表1可以看出，3個(gè)供試菌株在5種培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng)，但生長(zhǎng)速度存在一定差異，以PDA、玉米粉瓊膠培養(yǎng)基和燕麥片瓊膠培養(yǎng)基最佳，營(yíng)養(yǎng)瓊膠培養(yǎng)基上生長(zhǎng)最差。其中，菌絲生長(zhǎng)最好的是在PDA培養(yǎng)基上，菌絲不但生長(zhǎng)速度快，而且菌絲粗壯、濃密；其次是玉米粉瓊膠培養(yǎng)基和燕麥片瓊膠培養(yǎng)基，3天后菌絲也幾乎長(zhǎng)滿整個(gè)培養(yǎng)基表面，但是菌絲與PDA上的比較，較為稀薄，纖細(xì)。3個(gè)供試菌株在營(yíng)養(yǎng)瓊膠培養(yǎng)基上生長(zhǎng)都很緩慢，只有PDA上平均生長(zhǎng)直徑的一半。而且在5種培養(yǎng)基上，3個(gè)菌株之間的生長(zhǎng)狀況也有明顯差異，Y1>Y3>Y2。Y1生長(zhǎng)狀況最好，其次是Y3，Y2最差。

2.23個(gè)菌株在5種培養(yǎng)基上的產(chǎn)核情況

從表1、圖2可以看出來(lái)，3個(gè)供試菌株在5種培養(yǎng)基上均能夠產(chǎn)生菌核尤其是PDA培養(yǎng)基，所有供試菌株產(chǎn)核的數(shù)量最多，菌核也最大；同時(shí)在產(chǎn)生菌核的時(shí)間上也有顯著差異。燕麥片瓊膠培養(yǎng)基最先產(chǎn)生菌核，是在接種后的第10天產(chǎn)生，且菌核分散、大小也極其均勻；然后依次是PDA培養(yǎng)基，第11天產(chǎn)核，菌核密集，個(gè)別菌核極大，顏色深，成熟度好，但是大小不均；玉米粉瓊膠培養(yǎng)基第12天產(chǎn)核，且菌核分散、大小也較均勻；寄主汁液培養(yǎng)基第13天產(chǎn)核，菌核分散、大小均勻，顏色深，但是數(shù)量最少；營(yíng)養(yǎng)瓊膠培養(yǎng)基最后產(chǎn)生菌核，是在培養(yǎng)21天后，產(chǎn)生菌核,整個(gè)培養(yǎng)基表面布滿氣生菌絲，但不產(chǎn)生菌核，即使產(chǎn)生極少的菌核，菌核也極小，顏色很淺，直至第35天菌核才接近成熟，可以清洗統(tǒng)計(jì)。所以，無(wú)論是產(chǎn)核時(shí)間還是產(chǎn)核數(shù)量都是PDA最佳，而且菌核較大，成熟快。

實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)在產(chǎn)核能力方面，3個(gè)菌株之間的也存在顯著差異。從產(chǎn)核總數(shù)來(lái)看Y1(647個(gè))>Y3(301)>Y2(203)。尤其在營(yíng)養(yǎng)瓊膠培養(yǎng)基上Y1產(chǎn)核數(shù)為132個(gè)，而Y2為15，Y3則為11個(gè)，菌核數(shù)量相差最大；差異最小的是燕麥片瓊膠培養(yǎng)基Y1產(chǎn)核數(shù)為67個(gè)，Y2、Y3則均為52個(gè)。

3結(jié)論

玉簪是目前園林綠化上比較常用的宿根花卉，廣泛用于各個(gè)庭院、綠地。而玉簪的白絹病是目前危害較重的常見(jiàn)病害，且不易防治，給園林養(yǎng)護(hù)工作帶來(lái)極大困擾。鑒于園林花卉的特性，各地白絹病發(fā)生情況也不同，故本實(shí)驗(yàn)采集不同發(fā)病地點(diǎn)病株通過(guò)分離純化得到的菌株，以探知其致病力的強(qiáng)弱，并篩選出最適合的培養(yǎng)基，為以后的深入實(shí)驗(yàn)做好基礎(chǔ)，也有助于對(duì)該病害的進(jìn)一步研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，3個(gè)供試菌株均能在5種培養(yǎng)基上生長(zhǎng)且產(chǎn)核，只是菌絲生長(zhǎng)與產(chǎn)核量存在差異。除營(yíng)養(yǎng)瓊膠培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)較差外，供試菌株均能在PDA、玉米粉瓊膠培養(yǎng)基、燕麥片瓊膠3種培養(yǎng)基快速、良好，以PDA最佳，菌絲濃密、粗壯，生長(zhǎng)速度最快；供試菌株在PDA上平均產(chǎn)核量最多。而且所選用的5種常用的培養(yǎng)基中，PDA培養(yǎng)基成本低廉最易取得，制作也很簡(jiǎn)單。故綜合來(lái)看，PDA才是最適合玉簪白絹病菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

同時(shí)，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中通過(guò)比較實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)3個(gè)菌株的在菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)核量方面存在顯著差異，證明3個(gè)菌株之間的致病力存在較大差異，以Y1最強(qiáng)，其次是Y3、Y2，即，Y1>Y3>Y2，而且，在同一培養(yǎng)基上，一般來(lái)說(shuō)，菌絲生長(zhǎng)越好的，產(chǎn)核也越多。

參考文獻(xiàn)

[1]傅立國(guó)，陳潭清．中國(guó)高等植物[M]．13卷．青島：青島出版社，2002：91-92．

[2]Schmid W G.Hosta Species Update W.George Schmid 2007[EB/OL].http://www.hostalibrary.org.

[3]李錢(qián)魚(yú),夏宜平.玉簪屬植物種質(zhì)資源及其園林應(yīng)用現(xiàn)狀[J].中國(guó)園林，2004，20(2)：77-79．

[4]Schmidw G.The Genus Hosta[M].London:Tmi ber Press,1991.

[5]Grenfell D.The gardener’s guide to growing Hosta[M].Portland,Oregon:Tinber Press,1996:160.

[6]方中達(dá).植病研究法[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1998.

[7]李小霞.貴州省草烏病害調(diào)查及白絹病菌生物學(xué)特性研究[D].貴陽(yáng):貴州大學(xué),2007.

[8]肖仲久,李曉霞.6種培養(yǎng)基對(duì)不同來(lái)源白術(shù)白絹病菌培養(yǎng)的影響[J].廣州農(nóng)業(yè)科技，2012(6).

中圖分類號(hào):S436.8+1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

收稿日期：2015-12-10

作者簡(jiǎn)介：張麗(1976-)，女，高級(jí)農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣工作，E-mail:wjk8272915@163.com。 劉智會(huì)(1980-)，女，工程師，主要從事園林植物保護(hù)工作，E-mail:woliuzhihui@163.com。

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2016.02.016